细胞外囊泡与制造技术

本发明专利技术公开一种细胞外囊泡与

【技术实现步骤摘要】
细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法


[0001]本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法
。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡
(Extracellular Vesicle,EVs)
是一类具备磷脂双分子层膜结构及其包裹的多肽
、
脂质以及核酸等多种生物分子的来源于细胞的生物纳米囊泡
。
细胞分泌
、
产生细胞外囊泡并释放至胞外后，一般通过膜融合的形式将细胞外囊泡所携带的生物大分子递送至受体细胞
。
因此，细胞外囊泡是细胞间物质交换及信息传递的重要载体
。
除天然的分子传输属性外，细胞外囊泡自身还具备一定的纳米属性
(
直径在
30
～
1500nm
范围
、
比表面积大等
)
以及良好的生物相容性，是药物递送领域中一类新型的内源性药物载体
。
大量研究表明，细胞外囊泡可用于装载并递送多柔比星
、
姜黄素等小分子化学药物，体现出显著的抗肿瘤和抗炎活性
。
[0003]近年来，含笑内酯
、
小白菊内酯
、
土木香内酯等倍半萜内酯类天然产物被发现具有抗肿瘤
、
抗炎
、r/>抗菌等多种作用
。
然而倍半萜内酯类天然产物大多水溶性较差，导致生物利用度较低，严重限制了其药效的发挥
。
目前多采用转化为前药的方法，改善其水溶性
。
由于桉叶烷型倍半萜基本骨架中均具备
α
,
β
‑
不饱和羰基结构，因此多将二甲胺在
α
,
β
‑
不饱和键上进行
Michael
加成，进一步转化为可溶性盐前药
。
如含笑内酯
(Micheliolide,MCL)
通过
Michael
加成转化为二甲氨基含笑内酯
(Dimethylaminomicheliolide,DMAMCL)
富马酸盐，改善了水溶性及稳定性
。
[0004]然而仅通过转化为水溶性前药，仍难以有效提高其生物利用度
。
因此，亟需一种新的药物递送系统能够有效增强以含笑内酯为代表的倍半萜内酯类天然产物的生物利用度，进而提升其药效
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法
。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法，碱催化条件下，使得细胞外囊泡外表面的伯胺与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物发生
Michael
加成反应，获得由碳氮键连接的细胞外囊泡和
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物偶联物
。
[0007]优选地，碱催化条件中催化剂为强碱弱酸盐
、
季铵碱或叔胺
。
[0008]优选地，强碱弱酸盐为碳酸钾或碳酸钠，季铵碱为氢氧化四甲铵，叔胺为三甲胺或三乙胺
。
[0009]优选地，
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物和碱催化剂的摩尔比为
1:1
‑
4。
[0010]优选地，将细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物混合孵育，孵育条件为以超纯水
、
生理盐水或
PBS
缓冲液为溶剂，
25
‑
37℃
反应1‑
4h。
[0011]优选地，孵育后通过离心柱层析纯化，柱层析条件为
CORE400
填料，
pH 7.4
的
PBS
缓冲液作流动相，
20
‑
25℃
，
1000
‑
2000g
离心2‑
5min。
[0012]优选地，细胞外囊泡为来源于奶源
、
血液
、
尿液或干细胞的细胞外囊泡
。
[0013]细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法制备得到的
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物和细胞外囊泡的偶联物
。
[0014]α
,
β
‑
不饱和羰基化合物和细胞外囊泡的偶联物在药物制备及示踪研究中的应用
。
[0015]优选地，
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物为倍半萜内酯
。
[0016]优选地，倍半萜内酯为含笑内酯
、
小白菊内酯
、
土木香内酯
。
[0017]本专利技术具有的优点和积极效果是：对于含有
α
,
β
‑
不饱和羰基结构特征的化合物
(
荧光示踪剂或药用天然产物
)
，提供一种基于
Michael
加成反应的生物偶联方法，通过碱催化，一步法将
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物直接与细胞外囊泡偶联，形成细胞外囊泡
‑
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物偶联物；
[0018]采用细胞外囊泡携带具有示踪作用或药用的含有
α
,
β
‑
不饱和羰基结构特征的化合物，细胞外囊泡上包括多个伯胺，能够连接多个化合物分子，装载量较大，能够实现高效装载；
[0019]偶联过程在不影响细胞外囊泡的形态学
、
膜结构及生物学功能的条件下完成，有助于对细胞外囊泡的示踪及载药研究，并保证装载含有
α
,
β
‑
不饱和羰基结构特征的化合物的细胞外囊泡有效的载药作用
。
附图说明
[0020]图1为细胞外囊泡与式2化合物经
Michael
加成反应直接共价偶联形成细胞外囊泡
‑
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物偶联物的制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法，其特征在于：碱催化条件下，使得细胞外囊泡外表面的伯胺与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物发生
Michael
加成反应，获得由碳氮键连接的细胞外囊泡和
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物偶联物
。2.
根据权利要求1所述的细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法，其特征在于：碱催化条件中催化剂为强碱弱酸盐
、
季铵碱或叔胺；强碱弱酸盐为碳酸钾或碳酸钠，季铵碱为氢氧化四甲铵，叔胺为三甲胺或三乙胺
。3.
根据权利要求1或2所述的细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法，其特征在于：
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物和碱催化剂的摩尔比为
1:1
‑
4。4.
根据权利要求3所述的细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物的生物偶联方法，其特征在于：将细胞外囊泡与
α
,
β
‑
不饱和羰基化合物混合孵育，孵育条件为以超纯水
、
生理盐水或
PBS
缓冲液为溶剂，
25
‑
37℃
反应1‑
4h。5.
根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，王达，董凤伟，白玫，肖更午，白云飞，程国钢，王淼，
申请(专利权)人：天津外泌体科技有限公司，
类型：发明
国别省市：