一种β-酪蛋白及其制备方法、应用技术

本发明专利技术涉及β

【技术实现步骤摘要】
一种
β
‑
酪蛋白及其制备方法、应用


[0001]本专利技术涉及β
‑
酪蛋白
，具体涉及一种β
‑
酪蛋白及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]酪蛋白是乳腺腺泡上皮细胞产生的磷酸化蛋白。在蛋白等电点和适宜温度条件下，能从脱脂乳中沉淀下来。它来源于各种动物乳中，是乳蛋白的重要组成成分之一。乳是哺乳动物乳腺分泌的产物，是一种成分复杂的生物液体。乳中各成分以适宜的比例混合，具有很高的营养价值，同时乳对人类和动物生长调节与免疫保护具有不可替代的功能，因而是新生哺乳动物最好的营养物质。
[0003]乳中的酪蛋白占总蛋白质的比例在30％～35％左右，主要是β
‑
酪蛋白和κ
‑
酪蛋白，其中β
‑
酪蛋白所占比例较大。β
‑
酪蛋白由226个氨基酸残基组成，分子量为25382Da。每个分子可结合5个磷酸根，结合位点主要集中在肽链16～33处。有从0(β
‑
酪蛋白
‑
0P)到5(β
‑
酪蛋白
‑
5P)，6种磷酸化水平。有研究比较了在β
‑
酪蛋白中含量较高的结合了两个磷酸根的β
‑
酪蛋白(β
‑
酪蛋白
‑
2P)和结合了四个磷酸根的β
‑
酪蛋白(β
‑
酪蛋白
‑
4P)，结果显示两者约占β
‑
酪蛋白总量的70％，每个大约35％。采用胰酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等对上述实施例和对比例分别得到的β
‑
酪蛋白进行酶解，能够得到一种含有磷酸丝氨酸的特征肽段：磷酸丝氨酸肽(CPP)，CPP的核心结构为
‑
Ser(P)
‑
Ser(P)
‑
Ser(P)
‑
Glu
‑
Glu，由于其含有成簇的磷酸丝氨酸残基[
‑
Ser(P)]，可以螯合钙离子形成可溶性的磷酸盐复合合物，有效避免钙在中性或碱性条件下形成磷酸钙沉淀，从而促进钙的吸收和提供其生物利用度。
[0004]因而，当β
‑
酪蛋白中的磷酸丝氨酸含量越高，其被酶解获得的硫酸丝氨酸肽含量亦越高，有利于促进钙的吸收。由此可知，如何能够得到高磷酸化丝氨酸的β
‑
酪蛋白具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了制备高磷酸化丝氨酸的β
‑
酪蛋白的方法及应用。
[0006]本专利技术目的之一提供一种β
‑
酪蛋白的制备方法，包括以下步骤：
[0007]取驼乳进行脱脂处理；
[0008]经脱脂处理的乳清部分经硫酸铵沉淀处理；
[0009]将硫酸铵沉淀物混入离子溶液中于2～8℃处理60～180min后，离心，留上清液，冷冻干燥，得冻干粉；
[0010]将所述冻干粉经离子交换层析处理，收集洗脱峰，即可得到所述β
‑
酪蛋白。
[0011]在所述制备方法中，所述离子溶液包含柠檬酸钠、醋酸钠、邻苯二甲酸氢钾、磷酸二氢钾、氯化钠，所述离子溶液的pH值为5.6～6.5。
[0012]在所述制备方法中，所述离子溶液还包含乙醇。
[0013]在所述制备方法中，所述离子溶液包含1～5mM柠檬酸钠、1～5mM醋酸钠、1～5mM邻苯二甲酸氢钾、1～12.5mM磷酸二氢钾、1～20mM氯化钠。
[0014]在所述制备方法中，所述离子溶液为含5mM柠檬酸钠、5mM醋酸钠、5mM邻苯二甲酸氢钾、12.5mM磷酸二氢钾、20mM氯化钠的pH＝6.2的溶液。
[0015]在所述制备方法中，所述离子溶液包含1～5mM柠檬酸钠、1～5mM醋酸钠、1～5mM邻苯二甲酸氢钾、1～12.5mM磷酸二氢钾、1～20mM氯化钠和10～20％v/m乙醇。
[0016]在所述制备方法中，所述离子溶液为含5mM柠檬酸钠、5mM醋酸钠、5mM邻苯二甲酸氢钾、10mM磷酸二氢钾、18mM氯化钠和15％v/m乙醇的pH＝6.2溶液。
[0017]在所述制备方法中，所述离子交换层析的步骤包括：
[0018]将所述冻干粉制备成上样液；
[0019]将所述上样液上样至DEAE
‑
Sepharose Fast Flow树脂填充的层析柱中，采用流动相A液和流动相B液混合进行梯度洗脱，UV280nm为检测波长，收集分离组分；其中，所述流动相A液为含20mmol/LTris和3.3mol/L尿素的溶液，pH为9.5；所述流动相B液为20mmol/LTris、3.3mol/L尿素和0.3mol/LNaCl的溶液，pH为9.5；
[0020]从分离组分中确认和得到β
‑
酪蛋白。
[0021]本专利技术目的之一提供所述的制备方法制得的β
‑
酪蛋白。
[0022]本专利技术目的之一提供所述的制备方法制得的β
‑
酪蛋白在制备促进骨骼生长发育的制品中的应用。
[0023]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果之一：
[0024]采用本专利技术提供的β
‑
酪蛋白制备方法制得的β
‑
酪蛋白，不仅得率高，而且制得的β
‑
酪蛋白纯度高。并且，采用该方法制得的β
‑
酪蛋白含磷量和含磷酸丝氨酸含量均显著高于对比例，具有促进钙吸收和生物利用度应用前景。
[0025]另外，通过松密度、轻敲密度、Hausner比值、Carr
’
s指数分析发现，采用本专利技术方法制得的β
‑
酪蛋白的冻干粉的流动性优异，可以作为配方奶粉、配方奶片的原料。
[0026]经过Caco
‑
2单层细胞实验证实，采用本专利技术方法制得的β
‑
酪蛋白不仅具有优异的促进钙转运特性，还能促进成骨细胞的增殖，并且对成骨细胞碱性磷酸酶的酶活具有激活和促进作用。由此表明，采用本专利技术提供的方法制得的β
‑
酪蛋白能够提高成骨细胞的碱性磷酸酶活，促进成骨细胞产生矿化结晶，有利于骨骼生长和发育。
附图说明
[0027]图1为实施例1～5和对比例1～3(泳道1～8)提供的SDS
‑
PAGE图。
[0028]图2为实施例1～5和对比例1～3(泳道1～8)提供的Western
‑
Blot鉴定结果图。
[0029]图3为实施例1～5和对比例1～3制得的β
‑
酪蛋白酶解所得CPP含量结果图。
[0030]图4为实施例1～5和对比例1～3制得的β
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酪蛋白中磷含量结果图。
[0031]图5为实施例1～5和对比例1～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β
‑
酪蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取驼乳进行脱脂处理；经脱脂处理的乳清部分经硫酸铵沉淀处理；将硫酸铵沉淀物混入离子溶液中于2～8℃处理60～180min后，离心，留上清液，冷冻干燥，得冻干粉；将所述冻干粉经离子交换层析处理，收集洗脱峰，即可得到所述β
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酪蛋白。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述离子溶液包含柠檬酸钠、醋酸钠、邻苯二甲酸氢钾、磷酸二氢钾、氯化钠，所述离子溶液的pH值为5.6～6.5。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述离子溶液还包含乙醇。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述离子溶液包含1～5mM柠檬酸钠、1～5mM醋酸钠、1～5mM邻苯二甲酸氢钾、1～12.5mM磷酸二氢钾、1～20mM氯化钠。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述离子溶液为含5mM柠檬酸钠、5mM醋酸钠、5mM邻苯二甲酸氢钾、12.5mM磷酸二氢钾、20mM氯化钠的pH＝6.2的溶液。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述离子溶液包含1～5mM柠檬酸钠、1～5mM醋酸钠、1～5mM邻苯二甲酸氢钾、1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞，陈媛媛，曹庸，李双祁，
申请(专利权)人：广州绿萃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：