临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和储存制造技术

技术编号:3910500 阅读:226 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和储存,其制备方法如下:冲洗脐带,将脐带剪切至颗粒状,置于含2%庆大霉素的生理盐水中,离心,悬浮,离心,培养10天,按1∶3传代,传至4~5代,可获得大量间充质干细胞,加入冻存液后置于液氮中保存,液氮冷冻温度为-196℃。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种脐带间充质干细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)无菌条件下取正常顺产或剖腹产者胎儿脐带,用含2%庆大霉素的生理盐水反复冲洗,去除残留血迹; (2)将脐带置于含2%庆大霉素的生理盐水中,用无菌剪刀将其剪切至约颗粒 状,组织块置于50ml离心管内,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟,弃掉上清,重新加入含2%庆大霉素的生理盐水,将沉淀的组织块充分振荡,使之松散,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟; (3)将步骤2 所获的组织块用含10%胎牛血清的DMEM培养基悬浮,充分振荡后高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟; (4)将步骤3获得的组织块沉淀均匀种植于塑料细胞培养瓶中,置于5%CO↓[2]培养箱中,待组织块完全贴壁后,补加含1 0%胎牛血清的DMEM培养基; (5)于培养第10天在倒置显微镜下观察到组织块周围出现贴壁、梭型或多角型细胞时,将组织块全部吸出,补加含10%胎牛血清的DMEM培养基,置于5%CO↓[2]培养箱中继续培养1周; (6)待细胞80 %融合,用0.25%胰酶消化,按1∶3传代; (7)经14~15天扩增后,细胞传至4~5代,得到间充质干细胞。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员:王福生施明徐若男
申请(专利权)人:中国人民解放军第三○二医院
类型:发明
国别省市:11[中国|北京]

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