用于兽用的TNFα和NGF抗体制造技术

提供了与犬源化TNFα抗体和犬源化NGF抗体相关的各种实施方案。此类抗体可以用于治疗患有炎性病症如炎性肠病的犬类的方法中，和/或用于治疗患有疼痛如骨关节炎疼痛、背部疼痛、癌性疼痛和/或神经性疼痛的犬类的方法中。癌性疼痛和/或神经性疼痛的犬类的方法中。癌性疼痛和/或神经性疼痛的犬类的方法中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于兽用的TNF
α
和NGF抗体
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年12月18日提交的美国临时申请号63/127,994和2020年12月21日提交的美国临时申请号63/128,804的优先权权益，将每个文献的内容通过引用以其整体并入本文。


[0002]本公开文本涉及犬源化TNFα抗体和/或犬源化NGF抗体，所述犬源化TNFα抗体和/或犬源化NGF抗体例如用于治疗犬类的炎性病症(如炎性肠病)和/或用于治疗犬类的疼痛。

技术介绍

[0003]TNF是一种参与全身性炎症的细胞因子，并且刺激急性期反应。TNF促进炎性应答，这继而引起或促成许多与自身免疫性障碍相关的临床问题，如强直性脊柱炎、哮喘、癌症、克罗恩病、炎性肠病(IBD)、幼年型特发性关节炎、包括斑块状银屑病的银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎和其他慢性炎性障碍。
[0004]本公开文本提供了用于用TNFα抗体治疗伴生动物的诸如IBD的疾病的方法和组合物，并且因此涉及生物学、分子生物学和兽医学领域。
[0005]伴生动物(如猫、狗和马)患有许多与人疾病相似的疾病，包括自身免疫性疾病、癌症和慢性炎性障碍。然而，迄今为止尚未证明阿达木单抗或英夫利昔单抗可以用于治疗伴生动物的此类疾病。此外，具有显著的源自人的氨基酸序列含量的蛋白质(特别是如果那些序列源自抗体)可能在非人动物中具有免疫原性。并且结合人TNF的人药物可能不会以在伴生动物中提供与在人中提供的治疗效果同样有益的治疗效果的方式结合伴生动物TNF，特别是如果伴生动物TNF在序列上与人TNF不同。相似地，如果人药物在伴生动物中引发免疫应答，那么所述免疫应答可能无效。参见Mauldin等人,Aug.2010,21(4):373
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382。
[0006]IBD是一个统称，其用于描述具有相关炎症组织学证据的狗的胃肠道障碍。参见Ettinger SJ和Feldman EC.Diseases of the Small Intestine.Textbook of Veterinary Internal Medicine:Diseases of the Dog and the Cat,Elsevier Saunders,2010。虽然犬类IBD的确切病因仍然未知，但免疫系统对饮食抗原和肠道细菌的耐受性的改变被认为与遗传易感性一样起着主要作用。犬类IBD可能与发生在人中的障碍(也称为克罗恩病和溃疡性结肠炎)具有相似的病因，但是与狗和人相关的临床综合征和组织学变化是不同的。参见Ettinger和Feldman；Suchodolski JS等人“The fecal microbiome in dogs with acute diarrhea and idiopathic inflammatory bowel disease.”PLoS ONE.2012；7(12):e51907.doi:10.1371/journal.pone.0051907；Suchodolski JS.“Companion
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animals symposium:Microbes and gastrointestinal health of dogs and cats.”J Anim Sci.2010；89(5):1520
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1530。临床上，犬类IBD的特征在于持续性或反复性体征，如呕吐、腹泻、腹痛、体重减轻或食欲改变。
[0007]犬类IBD的准确诊断可能具有挑战性，并且当无法鉴定确切的致病因子时，通常使
用术语“特发性”。通常建议进行完整的病史和体格检查，然后进行实验室检查、诊断成像和肠活检(以证明存在炎症)。此外，与人IBD相反，患有淋巴细胞性
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浆细胞性结肠炎(LPC)(IBD的常见形式)的狗未能在发炎的结肠粘膜中表达主要的细胞因子谱(包括TNFα)。参见Tamura Y等人“Evaluation of Selected Cytokine Gene Expression in Colonic Mucosa from Dogs with Idiopathic Lymphocytic
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plasmacytic Colitis.”J Vet Med Sci.2014；76(10):1407
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10。用于管理这些患者的治疗策略包括以缓解临床体征为目标的抗寄生虫药(驱虫药)、抗生素、饮食调整以及免疫抑制药物的施用。参见Ettinger和Feldman。在人中，抑制TNF的抗炎性单克隆抗体被广泛用于治疗这种疾病。在我们的犬类患者中，传统疗法的预后和对传统疗法的反应不同，并且可以从极好到差变化。因此，狗的治疗结局不能基于人治疗来预测。
[0008]因此，仍然需要可以用于结合伴生动物中的伴生动物TNF以治疗伴生动物的TNF相关病症的方法和化合物。理想地，所述化合物将与伴生动物TNF特异性地结合，并且在血浆中具有足够长的半衰期以适用于疗法，但在伴生动物中不会具有高免疫原性。本专利技术满足这种需要。
[0009]本公开文本还提供了用于伴生动物的疼痛如慢性疼痛或炎性疼痛的使用NGF抗体的方法和组合物，并且因此涉及生物学、分子生物学和兽医学领域。
[0010]神经生长因子(NGF)是一种神经营养因子，其对调节某些神经元的生长、维持、增殖和存活具有广泛作用。NGF还与慢性疼痛和炎性疼痛相关联。NGF与以下两类受体结合：原肌球蛋白(tropomyosine)受体激酶A(TrkA)和低亲和力NGF受体。当NGF(一种二聚体)与TrkA细胞外结构域结合时，NGF引起受体二聚化，从而激活下游激酶活性。NGF抗体可以用于拮抗NGF活性、减少游离NGF和/或减弱与NGF相关疼痛相关的临床体征和症状。
[0011]伴生物种动物(如猫、狗和马)可能遭受慢性和炎性疼痛。仍然需要可以用于特异性地结合伴生动物NGF以治疗NGF诱导的病症和降低NGF信号传导活性的方法和物种特异性化合物。
[0012]本公开文本还提供了能够结合TNF和NGF二者的双特异性抗体，以及用于使用此类分子进行治疗的方法。例如，本公开文本的双特异性分子可以用于治疗炎症和与炎症相关的疼痛二者，如用于治疗骨关节炎、慢性疼痛、下背部疼痛、癌性疼痛和神经性疼痛。

技术实现思路

实施方案1.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含可变轻链的犬源化抗体，所述可变轻链包含(i)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR
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L1；(ii)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR
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L2；(iii)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR L3；和(iv)含有在位置3处的谷氨酰胺和在位置8处的赖氨酸的LC
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FR2。实施方案2.根据实施方案1所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链，所述可变重链包含(i)含有SEQ ID NO:4的氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含可变轻链的犬源化抗体，所述可变轻链包含(i)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR
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L1；(ii)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR
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L2；(iii)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR L3；和(iv)含有在位置3处的谷氨酰胺和在位置8处的赖氨酸的LC
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FR2。2.根据权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链，所述可变重链包含(i)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR
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H1；(ii)含有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR
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H2；和(iii)含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR H3。3.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述LC
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FR2包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含(i)可变轻链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其变体，在所述变体中所述可变轻链的1、2、3、4、5或6个氨基酸被不同的氨基酸取代；(ii)可变重链，所述可变重链包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或其变体，在所述变体中所述可变重链的1、2、3、4、5或6个氨基酸被不同的氨基酸取代；或(iii)如在(i)中的可变轻链和如在(ii)中的可变重链。5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含(i)可变轻链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:46的氨基酸序列或其变体，所述变体与SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:46的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；(ii)可变重链，所述可变重链包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或其变体，所述变体与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；或(iii)如在(i)中的可变轻链和如在(ii)中的可变重链。6.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)可变轻链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:46的氨基酸序列；(ii)可变重链，所述可变重链包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列；或(iii)如在(i)中的可变轻链和如在(ii)中的可变重链。7.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链和可变重链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:46的氨基酸序列，所述可变重链包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。8.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的可变轻链和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的可变重链。9.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的可变轻链和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的可变重链。10.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含以下的犬源化抗体：(a)轻链，所述轻链包含(i)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR
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L1；(ii)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR
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L2；(iii)含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR L3；和(iv)含有SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其变体的可变轻链，在所述变体中所述可变轻链的1、2、3、4、5或6个氨基酸被不同的氨基酸取代；
(b)重链，所述重链包含(i)含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
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H1；(ii)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
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H2；(iii)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR H3；和(iv)含有SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其变体的可变重链，在所述变体中所述可变重链的1、2、3、4、5或6个氨基酸被不同的氨基酸取代；或(c)如在(a)中的轻链和如在(b)中的重链。11.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含以下的犬源化抗体：(a)轻链，所述轻链包含(i)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR
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L1；(ii)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR
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L2；(iii)含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR L3；和(iv)含有SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的氨基酸序列或其变体的可变轻链，所述变体与SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；(b)重链，所述重链包含(i)含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
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H1；(ii)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
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H2；(iii)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR H3；和(iv)含有SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的氨基酸序列或其变体的可变重链，所述变体与SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；或(c)如在(a)中的轻链和如在(b)中的重链。12.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的氨基酸序列的可变轻链；(ii)含有SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:58的氨基酸序列的可变重链；或(iii)如在(i)中的可变轻链和如在(ii)中的可变重链。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含犬类恒定重链区和/或犬类恒定轻链区。14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自IgG
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A、IgG
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B、IgG
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C和IgG
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D恒定区的犬类重链恒定区。15.根据权利要求1至9、13或14中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:44的氨基酸序列或其变体，所述变体与SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；(ii)重链，所述重链包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:64的氨基酸序列或其变体，所述变体与SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；或(iii)如在(i)中的轻链和如在(ii)中的重链。16.根据权利要求1至9或权利要求13至15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(i)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链，(ii)含有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链，或(iii)如在(i)中的轻链和如在(ii)中的重链。17.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链。18.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:15的氨基
酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链。19.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含以下的犬源化抗体：(a)轻链，所述轻链包含(i)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR
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L1；(ii)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR
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L2；(iii)含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR L3；和(iv)含有SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60的氨基酸序列或其变体的轻链，所述变体与SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；(b)重链，所述重链包含(i)含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
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H1；(ii)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
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H2；(iii)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR H3；和(iv)含有SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62的氨基酸序列或其变体的重链，所述变体与SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；或(c)如在(a)中的轻链和如在(b)中的重链。20.一种与犬类TNFα结合的分离的抗体，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链。21.一种与犬类NGF结合的分离的抗体，其中所述抗体是包含以下的犬源化抗体：(i)含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR
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H1；(ii)含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR
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H2；和(iii)含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR
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H3。22.根据权利要求21所述的分离的抗体，其中所述抗体进一步包含(iv)含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR
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L1；(v)含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR
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L2；和(vi)含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的CDR L3。23.根据权利要求21或权利要求22所述的分离的抗体，其中所述抗体包含(i)可变轻链，所述可变轻链包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列、其变体，所述变体与SEQ ID NO:73的氨基酸序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性；(ii)可变重链，所述可变重链包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列或其变体，所述变体与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少90％、至少91...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：金德雷德生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：