兽用细小病毒抗体制造技术

提供了涉及细小病毒抗体的各种实施方案，所述细小病毒抗体包括犬源化抗体、猫源化抗体和嵌合抗体，其与犬和/或猫细小病毒结合，例如具有改善的表达特征。在各种实施方案中，所述细小病毒抗体具有ADCC、ADCP和/或CDC效应子功能。在各种实施方案中，此类单克隆细小病毒抗体能够用于预防和/或治疗诸如狗和猫等受试者的细小病毒感染的方法中。例如，所提供的细小病毒抗体能够用于提供针对犬或猫细小病毒感染的被动免疫。染的被动免疫。染的被动免疫。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】兽用细小病毒抗体
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年7月30日提交的美国临时申请号62/880,650、2020年1月31日提交的美国临时申请号62/968,970和2020年5月26日提交的美国临时申请号63/030,123的权益，将其中的每一个出于任何目的通过引用以其整体并入本文。


[0002]本专利技术涉及分离的犬细小病毒抗体，例如具有改进的重组产生并中和与犬细小病毒和/或猫细小病毒的结合；以及使用所述抗体的方法，例如用于在伴侣动物(诸如狗和猫)中提供针对犬或猫细小病毒感染的被动免疫和/或治疗细小病毒感染。

技术介绍

[0003]犬细小病毒(CPV)是全世界范围内感染狗的最重要的肠道病毒1。CPV病毒体是无包膜的DNA病毒。原始CPV有多种变体，包括CPV
‑
2a、CPV
‑
2b和CPV
‑
2c。CPV
‑
2的变体彼此之间仅有几个氨基酸不同2。CPV在环境中相当持久，可以在数月内保持感染性。CPV经由直接和间接接触传播3。在与口腔粘膜接触时，CPV开始在局部淋巴管中复制并全身传播。经过4至14天的孵育期，CPV靶向快速分裂的身体细胞，包括骨髓、淋巴细胞和肠隐窝上皮细胞。
[0004]临床疾病表现为发热和抑郁，然后是呕吐、腹泻(量大且带血)、淋巴细胞减少症、脱水和经常继发败血症和死亡。幼犬死亡率可能超过70％3。在断奶后的幼犬中感染最常见，因为母体抗体开始减弱。疫苗是容易获得的并且有效地防御CPVr/>‑
2的所有变体。
[0005]尽管适当定时的疫苗接种具有保护作用，但细小病毒感染仍然是一个问题。主要的易感犬群体包括处于易损窗口的幼犬，在此时母源抗体已经减弱至不具有保护作用的水平并且在给予疫苗接种之前(参见图1)。24周龄以下的幼犬患CPV疾病的风险最高。此外，母源抗体被动转移失败的幼犬是另一个易损群体。爆发也继续在犬舍和庇护所幼稚群体中发生。
[0006]到目前为止，对CPV感染的治疗在很大程度上一直是支持性的。治疗通常涉及静脉注射液、止吐药和广谱抗生素以预防败血症。已经尝试了各种其他治疗，但均未成功，包括抗病毒剂和超免疫血浆4。通常建议住院治疗，这对于许多主人来说可能成本过高，并且可能导致决定实施安乐死。送感染CPV的狗住院治疗需要严格的隔离方案。这对于兽医机构和工作人员可能被证明是后勤困难的5。因此，对于预防和治疗性治疗存在未满足的医疗需求。
[0007]目前没有专门针对CPV的经USDA或FDA批准的疗法。本文所述的细小病毒单克隆抗体将作为治疗干预给予患有活动性CPV感染的狗，以降低与CPV相关的发病和死亡的严重性或消除与CPV相关的发病和死亡。此外，本文所述的细小病毒单克隆抗体将用作暴露于CPV感染的狗的狗的预防性治疗以防止发生CPV感染。

技术实现思路

实施方案1.一种与犬细小病毒和/或猫细小病毒结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)(i)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(ii)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR
‑
H2、(iii)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR
‑
H3和(iv)SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的HC
‑
FR1序列；或(b)(i)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(ii)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR
‑
H2、(iii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR
‑
H3和(iv)SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46的HC
‑
FR1序列。实施方案2.一种与犬细小病毒和/或猫细小病毒结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR
‑
L2、(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR
‑
L3和(iv)SEQ ID NO:16的LC
‑
FR1序列；或(b)(i)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(ii)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
‑
L2、(iii)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR
‑
L3和(iv)SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的LC
‑
FR1序列。实施方案3.根据实施方案1所述的分离的抗体，其中(a)的所述抗体包含SEQ ID NO:12的HC
‑
FR4序列。实施方案4.根据实施方案1所述的分离的抗体，其中(b)的所述抗体包含SEQ ID NO:48的HC
‑
FR2序列。实施方案5.根据实施方案1或实施方案4所述的分离的抗体，其中(b)的所述抗体包含SEQ ID NO:50的HC
‑
FR3序列。实施方案6.根据实施方案2所述的分离的抗体，其中(b)的所述抗体包含SEQ ID NO:59的HC
‑
FR3序列。实施方案7.根据实施方案2或实施方案6所述的分离的抗体，其中(b)的所述抗体包含SEQ ID NO:61的HC
‑
F4序列。实施方案8.一种与犬细小病毒和/或猫细小病毒结合的分离的抗体，其中所述抗体是犬源化或猫源化抗体，其包含：a)重链，所述重链包含(i)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR
‑
H1；(ii)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR
‑
H2；和(iii)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR
‑
H3；或b)重链，所述重链包含(i)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR
‑
H1；(ii)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR
‑
H2；和(iii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR
‑
H3。实施方案9.一种与犬细小病毒和/或猫细小病毒结合的分离的抗体，其中所述抗体是犬源化或猫源化抗体，其包含：a)轻链，所述轻链包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR
‑
L1；(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR
‑
L2；和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR
‑
L3；或b)轻链，所述轻链包含(i)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
‑
L1；(ii)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
‑
L2；和(iii)包含SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:5的氨基酸序列的CDR
‑
H2；和(iii)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR
‑
H3；和b)轻链，所述轻链包含(i)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的CDR
‑
L1；(ii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR
‑
L2；和(iii)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR
‑
L3。11.一种与犬细小病毒和/或猫细小病毒结合的分离的抗体，其中所述抗体是犬源化或猫源化抗体，其包含：a)重链，所述重链包含(i)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR
‑
H1；(ii)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR
‑
H2；和(iii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR
‑
H3；和b)轻链，所述轻链包含(i)包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR
‑
L1；(ii)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR
‑
L2；和(iii)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR
‑
L3。12.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。13.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含犬或猫恒定重链区或者犬或猫恒定轻链区。14.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)选自IgG
‑
A、IgG
‑
B、IgG
‑
C和IgG
‑
D恒定区的犬重链恒定区；或(b)选自IgG1、IgG2a和IgG2b恒定区的猫重链恒定区。15.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有补体结合活性的野生型或变体IgG Fc。16.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性的野生型或变体IgG Fc。17.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)活性的野生型或变体IgG Fc。18.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：a)在对应于SEQ ID NO:91的位置10的位置处的天冬氨酸或谷氨酸；b)在SEQ ID NO:91的位置10处的天冬氨酸或谷氨酸；c)在对应于SEQ ID NO:91的位置103的位置处的天冬氨酸或谷氨酸；d)在SEQ ID NO:91的位置103处的天冬氨酸或谷氨酸；e)在对应于SEQ ID NO:91的位置10和/或位置103的位置处的天冬氨酸或谷氨酸；f)在SEQ ID NO:91的位置10和/或位置103处的天冬氨酸或谷氨酸；或g)SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98或SEQ ID NO:99的氨基酸序列。19.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含犬κ轻链恒定区或猫κ轻链恒定区。20.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含不具有一个或多个N
‑
糖基化位点的猫κ轻链恒定区。21.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的表位结合。22.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中如通过生物膜层干涉法所测量的，所述抗体以小于5x10
‑6M、小于1x10
‑6M、小于5x10
‑7M、小于1x10
‑7M、小于5x10
‑8M、小于1x10
‑8M、小于5x10
‑9M、小于1x10
‑9M、小于5x10
‑
10
M、小于1x10
‑
10
M、小于5x10
‑
11
M、小于1x10
‑
11
M、小于
5x10
‑
12
M、小于1x10
‑
12
M、小于5x10
‑
13
M或小于1x10
‑
13
M的解离常数(Kd)与犬细小病毒或猫细小病毒结合。23.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析和/或生物膜层干涉法所确定的，所述抗体与犬细小病毒或猫细小病毒结合。24.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体在200μg/mL的浓度下具有至少8000、至少16000、至少32000的血凝抑制值。25.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。26.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其包含以下中的一个或多个：(a)SEQ ID NO:7、8、45或46的(HC
‑
FR1)序列；(b)SEQ ID NO:9、47或48的HC
‑
FR2序列；(c)SEQ ID NO:10、49或50的HC
‑
FR3序列；(d)SEQ ID NO:11、12或51的HC
‑
FR4序列；(e)SEQ ID NO:16、55或56的可变区轻链框架1(LC
‑
FR1)序列；(f)SEQ ID NO:17或57的LC
‑
FR2序列；(g)SEQ ID NO:18、58或59的LC
‑
FR3序列；或(h)SEQ ID NO:19、60或61的LC
‑
FR4序列。27.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:88的可变重链序列；和/或(b)SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:89的可变轻链序列。28.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)SEQ ID NO:20的可变重链序列和SEQ ID NO:22的可变轻链序列；(b)SEQ ID NO:21的可变重链序列和SEQ ID NO:22的可变轻链序列；(c)SEQ ID NO:85的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；(d)SEQ ID NO:86的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；(e)SEQ ID NO:40的可变重链序列和SEQ ID NO:41的可变轻链序列；(f)SEQ ID NO:62的可变重链序列和SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:65的可变轻链序列；(g)SEQ ID NO:63的可变重链序列和SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:65的可变轻链序列；或(h)SEQ ID NO:88的可变重链序列和SEQ ID NO:89的可变轻链序列。29.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：(a)(i)SEQ ID NO:23、...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：金德雷德生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：