兽用促红细胞生成素类似物制造技术

本文提供各种实施方案，所述实施方案涉及具有一个或多个另外的糖基化位点和/或另外的半胱氨酸残基的促红细胞生成素(EPO)多肽类似物，以及其产生方法和用于治疗伴生动物的贫血的使用方法。本文还提供各种实施方案，所述实施方案涉及包含EPO受体的细胞外结构域的多肽，以及其用于治疗哺乳动物的红细胞增多症的使用方法。使用方法。使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】兽用促红细胞生成素类似物
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2018年12月12日提交的美国临时申请号62/778,849；2018年12月13日提交的美国临时申请号62/779,332；和2018年12月27日提交的美国临时申请号62/785,691的优先权益，出于任何目的，每个所述申请通过引用以其整体并入本文。


[0002]本公开文本涉及具有增强的药代动力学的促红细胞生成素(EPO)多肽类似物以及其产生和使用方法，例如，用于在伴生动物(如犬类、猫类和马类)中治疗贫血或缺氧相关症状(如慢性肾病(CDK))。本公开文本涉及编码EPO多肽的核酸、载体和表达系统，以及其使用方法(例如，基因治疗方法)，例如用于EPO多肽的受控或诱导的表达。本公开文本还涉及本文所述的EPO多肽的配制品。本公开文本还涉及包含EPO受体(EPOR)的细胞外结构域的多肽，以及其使用方法，例如用于治疗伴生动物中EPO的过量产生。

技术介绍

[0003]促红细胞生成素(EPO)(也称为生血素或造血素)是一种糖蛋白激素，其可以刺激红细胞生成(即，红细胞产生)。EPO用于治疗慢性肾病、炎性肠病(克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)以及化学疗法和放射疗法引起的脊髓发育不良导致的贫血。这些人障碍有时用重组EPO分子(例如，达贝泊汀(Aranesp
TM
和Epogen
TM
，Amgen)和Dynepo
TM
(Shire))来治疗。
[0004]伴生动物患有与人疾病(包括自身免疫性疾病和癌症)类似的许多疾病。虽然已经使用人蛋白质治疗伴生动物疾病，但应理解，具有显著人来源氨基酸序列含量的蛋白质对于所治疗的动物可能具有免疫原性。如果人药物在伴生动物中引发免疫应答，那么它可能无效。参见Mauldin等人,Aug.2010,21(4):373
‑
382。
[0005]伴生动物中的贫血目前是通过施用人促红细胞生成素药物(如Epogen
TM
或Aranesp
TM
)来治疗。然而，人EPO药物在被施用至伴生动物时可能会引发免疫原性反应。另外，人EPO药物可能不会以与其在人体中一样在伴生动物中提供同等有益的治疗效果的方式结合伴生动物EPO受体。
[0006]因此，对于可以用于治疗伴生动物(包括猫、狗和马)的贫血(例如，非难治性贫血)的方法和化合物，仍然存在未满足的需求。理想地，所述化合物将与EPO受体特异性结合并且在血浆中的半衰期足够长以适用于疗法，但是将具有物种特异性并且不具有高免疫原性。本文中描述具有增强的药代动力学的EPO多肽，以及施用那些EPO多肽或编码那些EPO多肽的核酸用于治疗伴生动物的贫血的方法。
[0007]EPO的过量产生也是个问题。例如，红细胞增多症可能是由肿瘤(例如，肾脏肿瘤)中EPO的过量产生和/或分泌，由JAK2中的非激活突变，或者由导致EPO过量产生的遗传学上遗传的失调而引起。包含EPOR的细胞外结构域的多肽，以及施用那些多肽或编码那些EPOR多肽的核酸用于治疗伴生动物的红细胞增多症的方法。

技术实现思路

实施方案1.一种促红细胞生成素(EPO)多肽，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列，但是存在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8中不存在的至少一个N
‑
连接的糖基化位点，其中所述N
‑
连接的糖基化位点包含序列天冬酰胺
‑
xaa
‑
丝氨酸或天冬酰胺
‑
xaa
‑
苏氨酸，其中xaa是除了脯氨酸以外的任何氨基酸，并且其中一个N
‑
连接的糖基化位点与另一个N
‑
连接的糖基化位点不重叠。实施方案2.根据实施方案1所述的EPO多肽，其中所述至少一个N
‑
连接的糖基化位点中的每一个存在于：a)选自以下的位置：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置47
‑
49、55
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57、56
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58、60
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62、61
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63、79
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81、81
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83、82
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117、116
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143、142
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144、143
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145、144
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146、145
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147、146
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148、147
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149、148
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150、149
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151、150
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152、161
‑
163、162
‑
164、184
‑
186和186
‑
188；或者b)选自以下的位置：SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO:8的位置21
‑
23、29
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31、30
‑
32、34
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36、35
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37、53
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55、55
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57、56
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58、65
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67、66
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68、71
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73、72
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74、73
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75、86
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88、87
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90、89
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124、123
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种促红细胞生成素(EPO)多肽，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列，但是存在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8中不存在的至少一个N
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丝氨酸或天冬酰胺
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连接的糖基化位点中的每一个存在于：a)选自以下的位置：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置47
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160和162
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164。3.根据权利要求1或权利要求2所述的EPO多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置113或位置148的位置或者在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置87或位置122的位置的除了脯氨酸以外的氨基酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的EPO多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置113或位置148的位置或者在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置87或位置122的位置的缬氨酸或谷氨酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置47的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置48的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置49的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置21的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置22的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置23的位置的丝氨酸或苏氨酸。6.根据权利要求1至5中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置55的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置56的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置57的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置29的天冬酰胺，在对应于
SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置30的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置31的位置的丝氨酸或苏氨酸。7.根据权利要求1至6中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置56的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置57的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置58的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置30的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置31的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置32的位置的丝氨酸或苏氨酸。8.根据权利要求1至7中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置60的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置61的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置62的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置34的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置35的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置36的位置的丝氨酸或苏氨酸。9.根据权利要求1至8中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置61的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置62的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、或SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:7的位置63的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置35的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置36的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置37的位置的丝氨酸或苏氨酸。10.根据权利要求1至9中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置79的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置80的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置81的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置53的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置54的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置55的位置的丝氨酸或苏氨酸。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置81的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置82的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置83的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置55的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置56的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置57的位置的丝氨酸或苏氨酸。12.根据权利要求1至11中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置82的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置83的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置84的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置56的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置57的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置58的位置的丝氨酸或苏氨酸。13.根据权利要求1至12中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置91的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置92的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:8的位置93的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置65的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置66的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置67的位置的丝氨酸或苏氨酸。14.根据权利要求1至13中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置92的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置93的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置94的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置66的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置67的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置68的位置的丝氨酸或苏氨酸。15.根据权利要求1至14中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置97的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置98的位置的除了脯氨酸以外的任
何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置99的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置71的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置92的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置73的位置的丝氨酸或苏氨酸。16.根据权利要求1至15中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置98的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置99的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置100的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置72的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置73的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置74的位置的丝氨酸或苏氨酸。17.根据权利要求1至16中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置99的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置100的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置101的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置73的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置74的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置75的位置的丝氨酸或苏氨酸。18.根据权利要求1至17中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置112的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置113的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置114的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置86的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置87的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置88的位置的丝氨酸或苏氨酸。19.根据权利要求1至18中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置113的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置114的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置115的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置87的天冬酰胺，在对应于
SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置88的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置89的位置的丝氨酸或苏氨酸。20.根据权利要求1至19中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置114的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置115的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置116的位置的丝氨酸或苏氨酸，以及任选地在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置113的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置88的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置89的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置90的位置的丝氨酸或苏氨酸，以及任选地在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置87的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸。21.根据权利要求1至20中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:7的位置115的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置116的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置117的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置89的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置90的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置91的位置的丝氨酸或苏氨酸。22.根据权利要求1至21中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置116的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置117的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置118的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置90的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置91的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置92的位置的丝氨酸或苏氨酸。23.根据权利要求1至22中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置137的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置138的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、或SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:7的位置139的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置111的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置112的位置的除了脯氨酸以外的任何氨
基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置113的位置的丝氨酸或苏氨酸。24.根据权利要求1至23中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置138的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置139的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置140的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置112的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置113的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置114的位置的丝氨酸或苏氨酸。25.根据权利要求1至24中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置140的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置141的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置142的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置114的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置115的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置116的位置的丝氨酸或苏氨酸。26.根据权利要求1至25中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置141的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置142的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置143的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置115的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置116的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置117的位置的丝氨酸或苏氨酸。27.根据权利要求1至26中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置142的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置143的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置144的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置116的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置117的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置118的位置的丝氨酸或苏氨酸。28.根据权利要求1至27中任一项所述的EPO多肽，其包含：
a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置143的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置144的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置145的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者a)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置117的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置118的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置119的位置的丝氨酸或苏氨酸。29.根据权利要求1至28中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置144的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置145的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置146的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者a)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置118的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置119的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置120的位置的丝氨酸或苏氨酸。30.根据权利要求1至29中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置145的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置146的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置147的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置119的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置120的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置121的位置的丝氨酸或苏氨酸。31.根据权利要求1至30中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置146的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置147的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置148的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置120的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置121的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置122的位置的丝氨酸或苏氨酸。32.根据权利要求1至31中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置147的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置148的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置149的位置的
丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置121的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置122的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置123的位置的丝氨酸或苏氨酸。33.根据权利要求1至32中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置148的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置149的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置150的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置122的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置123的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置124的位置的丝氨酸或苏氨酸。34.根据权利要求1至33中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置149的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置150的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置151的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置123的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置124的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置125的位置的丝氨酸或苏氨酸。35.根据权利要求1至34中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置150的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置151的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置152的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置124的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置125的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置126的位置的丝氨酸或苏氨酸。36.根据权利要求1至35中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置161的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置162的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置163的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置135的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置136的位置的除了脯氨酸以外的任何氨
基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置137的位置的丝氨酸或苏氨酸。37.根据权利要求1至36中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置162的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置163的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置164的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置136的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置137的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置138的位置的丝氨酸或苏氨酸。38.根据权利要求1至37中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置184的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置185的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置186的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置158的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置159的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置160的位置的丝氨酸或苏氨酸。39.根据权利要求1至38中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置186的位置的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置187的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置188的位置的丝氨酸或苏氨酸；或者b)在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置162的天冬酰胺，在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置163的位置的除了脯氨酸以外的任何氨基酸，以及在对应于SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置164的位置的丝氨酸或苏氨酸。40.根据权利要求1至39中任一项所述的EPO多肽，其包含SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:112、SEQ ID NO:113、SEQ ID NO:114、SEQ ID NO:115、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:118、SEQ ID NO:119、SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:121的氨基酸序列。41.一种EPO多肽，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列，但是存在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8中不存在的至少一个半胱氨酸。42.根据权利要求1至41中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置45、48、49、68、86、90、92、120、
143、144和/或172的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置19、22、23、42、60、64、66、94、117、118和/或146的半胱氨酸。43.根据权利要求41或权利要求42所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置45和172的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置19和146的半胱氨酸。44.根据权利要求41至43中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置48和120的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置22和94的半胱氨酸。45.根据权利要求41至44中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置49和172的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置23和146的半胱氨酸。46.根据权利要求41至45中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置68和92的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置42和66的半胱氨酸。47.根据权利要求41至46中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置90和144的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置64和118的半胱氨酸。48.根据权利要求41至47中任一项所述的EPO多肽，其包含：a)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的位置86和143的半胱氨酸；或者b)在SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:8的位置60和117的半胱氨酸。49.根据权利要求1至48中任一项所述的EPO多肽，其包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32的氨基酸序列。50.根据权利要求1至49中任一项所述的EPO多肽，其包含在对应于SEQ ID NO:7的位置165的位置或在对应于SEQ ID NO:8的位置139的位置的并非半胱氨酸的氨基酸。51.一种EPO多肽，其包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列，但是在SEQ ID NO:7的位置165或在SEQ ID NO:8的位置139存在并非半胱氨酸的氨基酸。52.根据权利要求50或51所述的EPO多肽，其中所述并非半胱氨酸的氨基酸是苏氨酸、丝氨酸或丙氨酸。53.根据权利要求1至52中任一项所述的EPO多肽，其中所述N
‑
连接的糖基化位点包含氨基酸衍生物。54.根据权利要求53所述的EPO多肽，其中所述氨基酸衍生物是天冬酰胺衍生物、丝氨酸衍生物或苏氨酸衍生物。55.根据权利要求1至54中任一项所述的EPO多肽，其中所述EPO多肽被糖基化。56.根据权利要求1至55中任一项所述的EPO多肽，其包含附接至所述N
‑
连接的糖基化位点的至少一个聚糖部分。57.根据权利要求1至56中任一项所述的EPO多肽，其中所述EPO多肽被聚乙二醇化。58.根据权利要求1至57中任一项所述的EPO多肽，其中所述EPO多肽在聚糖处被聚乙二
醇化。59.根据权利要求1至58中任一项所述的EPO多肽，其中所述EPO多肽在伯胺处被聚乙二醇化。60.根据权利要求1至59中任一项所述的EPO多肽，其中所述EPO多肽在N末端α胺处被聚乙二醇化。61.一种邻接多肽，其包含根据权利要求1至60中任一项所述的EPO多肽，其中所述邻接多肽包含IgG Fc多肽。62.根据权利要求61所述的邻接多肽，其中所述IgG Fc多肽是野生型IgG Fc多肽。63.根据权利要求61所述的邻接多肽，其中所述IgG Fc多肽是变体IgG Fc多肽。64.根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：金德雷德生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：