本发明专利技术涉及生物制药技术领域，尤其涉及一种靶向人肿瘤坏死因子α的纳米抗体及其应用。本发明专利技术使用重组的TNFα对条纹斑竹鲨进行免疫，外周血淋巴细胞总RNA反转录得到cDNA为模板扩增纳米抗体序列，最终分离获得4种纳米抗体，分别命名为aTNF
【技术实现步骤摘要】
一种靶向人肿瘤坏死因子
α
的纳米抗体及其应用
[0001]本专利技术涉及生物制药
，尤其涉及一种靶向人肿瘤坏死因子α的纳米抗体及其应用。
技术背景
[0002]肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha，TNFα)是由巨噬细胞产生的一类炎症因子，是宿主防御的重要组成部分。机体在受到刺激或产生创伤时迅速释放大量肿瘤坏死因子，释放后TNFα在体内首先与细胞表面的肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor，TNFR)相结合，进而介导细胞内一系列生物学反应，如诱导细胞凋亡、激活NF
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κB通路从而促进炎症相关蛋白的表达等，此细胞通路同时也介导拮抗细胞凋亡，所以体内正常的TNFα表达对机体的免疫调节具有重要意义，例如维持细胞稳态、抗感染等。但当肿瘤坏死因子持续分泌过量时则会导致免疫病理的产生，包括自身免疫性疾病和多种慢性炎症。
[0003]自身免疫性疾病(Autoimmune Diseases)是由于自身抗原免疫耐受缺失导致的一类慢性异质性疾病，可累及特定的靶器官或多个系统，不能正确识别抗原而导致攻击自身受体从而造成机体损害。自身免疫性疾病分为器官特异性自身免疫病和系统性自身免疫病，例如凸眼性甲状腺肿及重症肌无力、系统性红斑狼疮及类风湿性关节炎等。因此中和体内过量表达的TNFα是预防或治疗自身免疫性疾病的一种策略，通过拮抗结合过量浓度的TNFα，下调其与细胞表面受体结合浓度，从而减少与TNFα
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TNFR介导病症相关症状，在一定程度上缓解自身免疫性疾病进程。
[0004]目前针对TNFα过表达所研发的治疗模式存在一定弊端，例如抗药性的产生，副作用明显等。能够靶向TNFα的生物小分子抑制剂是有望解决TNFα过表达的新途径。纳米抗体是存在于骆驼科和软骨鱼类体内的一种仅重链抗体，具有分子量小、结构简单、高特异性、高亲和力、便于与融合蛋白偶联及被标记物标记等优点，目前针对TNFα的纳米抗体尚无相关报导。
技术实现思路
[0005]为了解决现有技术中的问题，本专利技术的目的之一在于提供一种靶向人肿瘤坏死因子α的纳米抗体，所述纳米抗体为aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15、aTNF
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21中的任意一种，所述aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15和aTNF
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21均包含三个抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中：
[0006]所述aTNF
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6的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列同源性大于等于80％，优选为至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列；
[0007]所述aTNF
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9的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列同源性大于等于80％，优选为至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列；
[0008]所述aTNF
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15的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列同源性大于等于80％，优选为至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列；
[0009]所述aTNF
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21的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列同源性大于等于80％，优选为至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列。
[0010]上述同源性序列也包含与序列表所示序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换、插入或缺失)的氨基酸序列。
[0011]优选的，aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15和aTNF
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21的氨基酸序列分别如下：
[0012]aTNF
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6的氨基酸序列：
[0013][0014]aTNF
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9的氨基酸序列：
[0015][0016]aTNF
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15的氨基酸序列：
[0017][0018]aTNF
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21的氨基酸序列：
[0019][0020]上述纳米抗体的三个抗原互补决定区氨基酸序列CDR1、CDR2和CDR3分别如加粗画线部分所示，即：
[0021]aTNF
‑
6的抗原互补决定区氨基酸序列：
[0022]CDR1:ILKGSSCALGSTHWY(SEQ ID NO:1)
[0023]CDR2:SDTKNTASKSF(SEQ ID NO:2)
[0024]CDR3:EAYTAGYCGGILYSYS(SEQ ID NO:3)
[0025]aTNF
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9的三个抗原互补决定区氨基酸序列：
[0026]CDR1:VLRDSSCVLDSTDWY(SEQ ID NO:4)
[0027]CDR2:AETVNKASKSF(SEQ ID NO:5)
[0028]CDR3:KAYPDGRYCRSWGSYI(SEQ ID NO:6)
[0029]aTNF
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15的三个抗原互补决定区氨基酸序列：
[0030]CDR1:VLRDSSCALDSTDWY(SEQ ID NO:7)
[0031]CDR2:AETVNKASKSL(SEQ ID NO:8)
[0032]CDR3:KVYPDGRYCRNWGSYI(SEQ ID NO:9)
[0033]aTNF
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21的三个抗原互补决定区氨基酸序列：
[0034]CDR1:VLRDSSCVLDSTDWH(SEQ ID NO:10)
[0035]CDR2:AETVNKASKSF(SEQ ID NO:11)
[0036]CDR3:KAYPDGRYCRYWGSYI(SEQ ID NO:12)
[0037]本专利技术还提供一种靶向人肿瘤坏死因子α的抗体，其具有如上所述的aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15、aTNF
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21中的任意一种纳米抗体以及Fc结构域。
[0038]优本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种靶向人肿瘤坏死因子α的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体为aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15、aTNF
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21中的任意一种，所述aTNF
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6、aTNF
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9、aTNF
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15和aTNF
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21均包含三个抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中：所述aTNF
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6的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列同源性大于等于80％的氨基酸序列；所述aTNF
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9的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列同源性大于等于80％的氨基酸序列；所述aTNF
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15的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列同源性大于等于80％的氨基酸序列；所述aTNF
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21的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别为与SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列同源性大于等于80％的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的一种靶向人肿瘤坏死因子α的纳米抗体，其特征在于，所述aTNF
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6的三个抗原互补决定区氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；aTNF
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9的三个抗原互补...
【专利技术属性】
技术研发人员：尚玉花，刘思雨，黄晓雪，杨芸茹，
申请(专利权)人：安徽金百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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