【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药，尤其涉及一种新型冠状病毒重组亚单位抗原及其制备方法和应用。
技术介绍
0、技术背景
1、新型冠状病毒(sars-cov-2，以下简称sars2)识别表达ace2受体的上皮细胞，进入宿主细胞的过程如下：s1-s2边界上的多基序在病毒在感染细胞中成熟时被裂解，但s2′位点则在血管紧张素转换酶2(ace2)与靶细胞结合后被裂解。病毒与ace2结合会引起s1亚基的构象变化，并暴露出s2亚基中的s2′裂解位点。s2′位点的裂解都会暴露出融合肽(fp)，s1与s2的解离会导致s2亚基的构象发生巨大变化，尤其是hr1，从而推动融合肽向前进入目标膜，启动膜融合。病毒膜和细胞膜之间的融合会形成一个融合孔，病毒rna通过该孔释放到宿主细胞的细胞质中进行脱衣和复制。
2、sars-cov-2感染人的呼吸道上皮细胞后可诱导宿主产生体液和细胞免疫反应。受感染的上皮细胞降解病毒颗粒并将其呈递给细胞毒性cd8+t细胞。cd8+t通过tcr-mhc i相互作用识别病毒蛋白，释放颗粒酶b和穿孔素等细胞毒性颗粒，作用受感染的细胞。此外，抗原提呈细胞通过tcr-mhc ii相互作用将病毒多肽呈递给cd4+t细胞(th0)。一旦识别抗原多肽，th0细胞主要向th1极化，释放ifn-γ以消除病毒，并释放th2触发针对sars-cov-2病毒的体液介导的免疫反应和抗体分泌。
3、目前，疫苗接种是预防新型冠状病毒感染最行之有效的公共干预措施。目前全球对疫苗的研发路线主要包括以下几种：由灭活疫苗和减毒活疫苗为代表的病
4、为了应对sars-cov-2病毒的不断变异，研发更加安全有效的sars-cov-2疫苗是目前较为紧迫的问题。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中的问题，本专利技术的目的之一在于提供一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
2、本专利技术采用了以下技术方案：
3、一种新型冠状病毒重组亚单位抗原，所述抗原为新型冠状病毒重组蛋白，命名为hr1 910-1011-l6-hr2p，其氨基酸序列如seq id no:1所示，核苷酸序列如seq id no:2所示。
4、本专利技术目的之二在于提供一种表达载体，其包含如上所述的核苷酸序列。
5、本专利技术目的之三在于提供一种宿主细胞，其包含如上所述的表达载体。
6、本专利技术目的之四在于提供上述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备预防新型冠状病毒原始株和/或变异株的疫苗中的应用。
7、本专利技术目的之五在于提供上述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒中的应用。
8、本专利技术目的之六在于提供一种疫苗，其包含如上所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
9、本专利技术目的之七在于提供一种用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒，其包含如上所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
10、本专利技术最后提供一种如上所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原的制备方法，包括以下步骤：
11、步骤1.将hr1 910-1011-l6-hr2p的核苷酸序列作为目的基因与pet30a质粒进行组装，然后转入rosetta感受态细胞，得到含目的基因的表达菌；所述hr1910-1011-l6-hr2p的核苷酸序列如seq id no:2所示；
12、步骤2.含目的基因的表达菌经iptg诱导后破碎，层析纯化即得到所需新型冠状病毒重组蛋白。
13、优选的，所述步骤1中，将目的基因插入到pet30a质粒的酶切位点sal i和not i之间，方法为：将目的基因pcr回收产物和pet30a质粒pcr回收产物按物质的量之比4:1混匀，加入gibson assembly酶，50℃水浴条件下孵育15min。
14、优选的，所述步骤2中，iptg诱导过程为：含目的基因的表达菌在含kana的lb中摇菌培养4-5h后，按500μl菌液:1mm iptg的量加入iptg后继续摇菌培养3-4h，然后吸取菌液离心获得诱导后菌体。
15、本专利技术的有益效果在于：
16、本专利技术提供的新型冠状病毒重组蛋白针对冠状病毒以及新冠突变株具有高度的保守性，并含有丰富的有效t细胞表位，免疫原性好，可刺激机体产生抗原特异性的抗体和细胞免疫反应。
17、本专利技术的重组蛋白可利用原核表达系统作为表达载体，具有产量高、生产成本低、蛋白纯度高且状态同生理状态类似等优点，适用于大规模制备新冠疫苗。
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1.一种新型冠状病毒重组亚单位抗原，其特征在于，所述抗原为新型冠状病毒重组蛋白，命名为HR1 910-1011-L6-HR2P，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，核苷酸序列如SEQID NO:2所示。
2.一种表达载体，其包含如权利要求1所述的核苷酸序列。
3.一种宿主细胞，其包含如权利要求2所述的表达载体。
4.权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备预防新型冠状病毒原始株和/或变异株的疫苗中的应用。
5.权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒中的应用。
6.一种疫苗，其包含如权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
7.一种用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒，其包含如权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
8.一种如权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，将目的基因插
10.如权利要求8所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，IPTG诱导过程为：含目的基因的表达菌在含Kana的LB中摇菌培养4-5h后，按500μL菌液:1mM IPTG的量加入IPTG后继续摇菌培养3-4h，然后吸取菌液离心获得诱导后菌体。
...【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒重组亚单位抗原，其特征在于，所述抗原为新型冠状病毒重组蛋白，命名为hr1 910-1011-l6-hr2p，其氨基酸序列如seq id no:1所示，核苷酸序列如seqid no:2所示。
2.一种表达载体，其包含如权利要求1所述的核苷酸序列。
3.一种宿主细胞，其包含如权利要求2所述的表达载体。
4.权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备预防新型冠状病毒原始株和/或变异株的疫苗中的应用。
5.权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原在制备用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒中的应用。
6.一种疫苗，其包含如权利要求1所述的一种新型冠状病毒重组亚单位抗原。
7.一种用于诊断新型冠状病毒感染的试剂盒，其包含如权利要求1所述的一种新型冠状...
【专利技术属性】
技术研发人员：尚玉花，杨芸茹，
申请(专利权)人：安徽金百奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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