一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基-4-羟基茴香醚的方法技术

本发明专利技术公开了一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基

【技术实现步骤摘要】
一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚的方法


[0001]本专利技术涉及化学分析检测
，具体为一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚的方法。

技术介绍

[0002]叔丁基对苯二酚（TBHQ）是一种常用的油脂抗氧化剂，有较强的抗氧化能力。对植物油而言，抗氧化能力顺序为TBHQ>PG>BHT>BHA；对动物油脂而言，抗氧化能力顺序为TBHQ>PG>BHA>BHT。TBHQ对其他的抗氧化剂和螯合剂有增效作用，在其他酚类都不起作用的油脂中，它还是有效的。TBHQ除具有抗氧作用外还有一定的抑菌作用。对细菌、酵母的最低抑菌浓度为0.005%~0.01%，对霉菌为0.005%~0.028%。然而，过量摄入TBHQ可能会对机体造成一系列有害影响，包括畸形、癌症等。目前，我国对其在食用油中的最高法律限量为0.2 g/kg。因此，有必要对食用油中TBHQ的添加量进行严格监控。目前，现行有效的国家标准 GB/T 5009.30
‑
2003 规定糕点和植物油等食品中TBHQ的检测方法，该方法中需要制备层析柱净化后用溶剂解析，相关步骤繁琐，试剂耗材损耗量大，回收率低等。
[0003]纳米酶是具有酶活性的纳米材料，由于其稳定性高、易储存、制备简单等优点，被广泛应用于生物分析、医学治疗和食品分析等领域。漆酶是一类广泛存在于细菌、真菌、高等植物和昆虫中的多铜氧化酶超家族，能催化多种无机阳离子、芳香族物质和脂肪胺的氧化。与漆酶类似，多金属氧酸盐（POMs）具有与这些酶相似的尺寸，它们还能够利用氧气作为电子受体，辅助去除水体中的内分泌干扰物。但仅只能作为一种辅酶，同时现有报道模拟漆酶能氧化的酚类物质有限。纳米酶的重要优点是其活性可以通过表面修饰来调节，例如调节尺寸、形状、掺杂剂和表面电荷。针对目前研究的漆酶纳米酶催化能力及氧化底物的局限性的现状，本专利技术通过合成超小尺寸的含铜磷钼钨酸纳米酶（Cu
‑
PTWs），通过掺杂二甲基咪唑制备含铜漆酶纳米酶，大大提高了漆酶纳米酶活性及对底物氧化的选择性。同时，在样品测定中，结合液液微萃取技术，既消除干扰，又提高检测灵敏度。

技术实现思路

[0004]本专利技术公开了一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚的方法，该方法以磷钼钨酸及氯化铜为前驱，微波法合成具有类漆酶纳米酶活性的含铜磷钼钨酸纳米酶（Cu
‑
PTWs），将二甲基咪唑（DMIM）作为第二配体掺杂到Cu
‑
PTWs纳米酶中，形成一种新型的漆酶模拟酶（Cu
‑
PTWs/DMIM）。通过比较，Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶具有优异的模拟漆酶活性和催化动力学性质。二甲基咪唑的掺入加快了电子传递速率，从而达到增强催化活性的目的。Cu
‑
PTWs/DMIM选择性氧化叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚（TBHQ）为醌类化合物，再与4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）络合形成红色醌亚胺染料，从而建立了高灵敏TBHQ的快速比色检测方法，将本方法应用于食用油脂中TBHQ的检测分析，结合分散液液微萃取，消除干扰，提高检测灵敏度，结果与GB5009.32
‑
2016 食品安全国家标准食品中9种抗氧化剂测定的结果相
符；本专利技术方法只能选择性快速氧化TBHQ，同类合成酚类抗氧化剂没有干扰，检出限达0.005 mg/kg，方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。
[0005]本专利技术涉及纳米酶检测食用油脂中叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚的方法，包括以下步骤：包括以下步骤：在检测体系中加入TBHQ、4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）溶液、Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶，加入pH 6.8 MES缓冲溶液，反应5
‑
10 min，于500 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与TBHQ浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；提取检测样品中TBHQ，获得样品测定液，在Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶+4
‑
AP体系中，加入样品测定液及pH 6.8 MES缓冲溶液，反应5
‑
10 min，进行液液微萃取，于500 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中TBHQ含量；所述Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶制备包括：0.35
‑
0.40g磷钼钨酸、溶于35
‑
40mL纯水，加入0.35
‑
0.40g CuCl2，搅拌溶解，标记为溶液A；0.12
‑
0.15g二甲基咪唑（DMIM）溶于10mL纯水与3
‑
5mL甲醇混合液中，标记为溶液B；将A溶液与B溶液混合，常温搅拌30
‑
40 min后，转移到聚四氟乙烯罐中，置于微波消解仪中，160℃加热4
‑
5 h，冷却至室温，离心，过0.22μm滤膜，得到滤液，在60℃的条件下真空干燥24
‑
48 h，即得Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶。
[0006]所述的液液微萃取是在样品测定液中加入正戊醇为萃取剂，聚乙二醇三甲基壬基醚（TMN
‑
10）为分散剂，涡旋处理0.5
‑
1min，静置5
‑
10min，取出下层水相，上层有机相于500 nm波长处测定吸光度；正戊醇用量为0.3
‑
0.5mL/5mL，TMN
‑
10用量为0.1
‑
0.3mL/5mL。
[0007]所述的TBHQ溶液浓度范围在0.024
–
200.5
ꢁ
μg/mL，Cu
‑
PTWs/DMIM溶液的浓度为1 mg/mL，添加量为50
‑
100 μL；4
‑ꢀ
AP溶液浓度为50 mmol/L，添加量为20
‑
50 μL。
[0008]所述的离心是在8000
‑
10000 r/min下处理10
‑
15 min。
[0009]本专利技术的优点在于：1、本专利技术利用具有多功能物理和化学性质、独特螯合性能和化学可调性和独特的氧化还原行为的磷钼钨酸与Cu
2+
为及有机配合物二甲基咪唑原料制备纳米材料（Cu
‑
PTWs/DMIM），通过二甲基咪唑的引入，使其与磷钼钨酸形成共价键，提高了多金属氧酸盐的容量，从而提高了纳米材料漆酶模拟酶活性，使其能够氧化叔丁基
‑4‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米酶结合液液微萃取检测食用油脂中叔丁基
‑4‑
羟基茴香醚的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在检测体系中加入TBHQ、4
‑
氨基安替比林（4
‑
AP）溶液、Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶，加入pH 6.8 MES缓冲溶液，反应5
‑
10 min，于500 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与TBHQ浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；（2）提取检测样品中TBHQ，获得样品测定液，在Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶+4
‑
AP体系中，加入样品测定液及pH 6.8 MES缓冲溶液，反应5
‑
10 min，进行液液微萃取，于500 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中TBHQ含量；所述Cu
‑
PTWs/DMIM纳米酶制备包括：0.35
‑
0.40g磷钼钨酸、溶于35
‑
40mL纯水，加入0.35
‑
0.40g CuCl2，搅拌溶解，标记为溶液A；0.12
‑
0.15g二甲基咪唑（DMIM）溶于10mL纯水与3
‑
5mL甲醇混合液中，标记为溶液B；将A溶液与B溶液混合，常温搅拌30
‑
40 min后，转移到聚四氟乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨亚玲，李秋兰，杨德志，
申请(专利权)人：云南伦扬科技有限公司，
类型：发明
国别省市：