一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，属于质量检测技术领域。该方法主要包括了三个步骤：S1、系列标准工作液的配置；S2、待测样品溶液的配置；S3、HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法


[0001]本专利技术属于质量检测
，具体涉及一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法。

技术介绍

[0002]儿茶素和茶黄素分别是绿茶和红茶中主要的具有抗氧化作用的生物活性成分。茶多酚主要通过儿茶素表达其生物活性，茶叶被看做是“饮料之王”就是因为它含有丰富的儿茶素，且儿茶素是茶叶苦味和涩味的主要来源。茶黄素是红茶多酚的主要组成成分之一，其含量占红茶干物质的1％～5％，茶黄素对红茶的色、香、味等品质特征有较大的影响，是形成红茶“汤色亮”、“冷后浑”、“金圈”现象的原因，红茶的滋味也与茶黄素的收敛性有关。
[0003]现阶段国内外对儿茶素的研究多集中于对其生理活性的研究以及不同产地、种类茶叶间儿茶素含量的差异，对茶黄素的研究主要集中在其保健功能的开发以及作用机制的探究。对于儿茶素和茶黄素的定量分析方法有大量的研究报道，但是同时对儿茶素和茶黄素进行分离和定量分析的研究很少，在这些分析方法中，HPLC法是食品分析中应用最广泛的技术。色质联用法是在色谱的基础上连接了质谱，质谱在分析过程中可以提供丰富的结构信息，将其与色谱结合，能够有效的对物质进行分离、定性、定量，很好地解决了色谱定性能力差的问题。在质谱领域中，三重四极杆是最灵敏和定量重现性最好的仪器。使用HPLC
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MS/MS可以在单个分析中实现准确定量。因此，建立一种HPLC
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MS/MS方法用于同时检测茶叶中的儿茶素类和茶黄素类物质含量十分有必要。已经有研究学者采用HPLC
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MS/MS方法对茶叶中的儿茶素类和茶黄素类物质含量进行同时检测分析，但其所建立方法的回收率和稳定性均较差，且应用该方法测定的3种茶叶样品(红茶、乌龙茶和绿茶)含量结果远远低于茶叶中儿茶素和茶黄素的正常含量范围，方法本身的科学性有待于进一步研究与核实。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本专利技术提供了一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，使用本申请的方法可以准确的检测较低含量的8种儿茶素类物质和4种茶黄素类物质的含量。
[0005]本专利技术提供的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供了一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，所述方法包括：
[0007]S1、系列标准工作液的配置：精确称取8种儿茶素标准品溶解后逐级稀释得到儿茶素系列标准工作液，精确称取4种茶黄素的标准品溶解后逐级稀释得到茶黄素系列标准工作液；
[0008]S2、待测样品溶液的配置：取待测茶叶样品经提取、离心后，将上清液过水相滤膜，过滤后的提取液经稀释后即为待测样品溶液；
[0009]S3、HPLC
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MS/MS检测：将步骤S1的儿茶素系列标准工作液和茶黄素系列标准工作
液分别注入液相色谱质谱联用仪中，以8种儿茶素和4种茶黄素的多反应监测模式离子峰面积与其对应的浓度进行回归分析，得到标准工作曲线，在相同条件下，将S2的待测样品溶液注入液相色谱质谱联用仪中，得到8种儿茶素和4种茶黄素的多反应监测模式离子峰面积，代入标准工作曲线，即可求得样品中8种儿茶素和4种茶黄素的含量；
[0010]所述8种儿茶素为儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯；
[0011]所述4种茶黄素为茶黄素、茶黄素
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没食子酸酯、茶黄素
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3'
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没食子酸酯，茶黄素
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3,3'
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双没食子酸。
[0012]在本专利技术的一个具体实施方式中，步骤S1中溶解过程的溶剂和步骤S2中提取过程的提取液均为70％甲醇水溶液，步骤S1和步骤S2中，稀释过程用含2％抗坏血酸的70％甲醇水溶液。
[0013]在本专利技术的一个具体实施方式中，步骤S1中儿茶素系列标准工作液中，8种儿茶素的浓度为10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1000μg/L、2500μg/L、5000μg/L、10000μg/L；步骤S1中茶黄素系列标准工作液中，4种茶黄素的浓度为25μg/L、50μg/L、125μg/L、250μg/L、500μg/L、1250μg/L、2500μg/L、5000μg/L。
[0014]在本专利技术的一个具体实施方式中，步骤S2中，提取的具体步骤为：取待测茶叶样品加入70％甲醇水溶液，先涡旋混匀，然后于70℃下水浴20min，再取出涡旋混匀；离心是以7500r/min离心3min；水相滤膜的型号是0.22μm水相滤膜。
[0015]在本专利技术的一个具体实施方式中，待测茶叶样品与70％甲醇水溶液的质量体积比为1:100。
[0016]在本专利技术的一个具体实施方式中，步骤S2中，稀释的倍数分别为100倍、1000倍、5000倍，稀释100倍的待测样品溶液用于检测表没食子儿茶素、儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯、茶黄素、茶黄素
‑3‑
没食子酸酯、茶黄素
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3'
‑
没食子酸酯、茶黄素
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3,3'
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双没食子酸的含量，稀释1000倍的待测样品溶液用于检测没食子儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯的含量，稀释5000倍的待测样品溶液用于检测表没食子儿茶素没食子酸酯的含量。
[0017]在本专利技术的一个具体实施方式中，步骤S3中所述色谱的工作条件为：
[0018]色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18，2.1mm
×
100mm，1.8μm；
[0019]色谱柱温度：35℃；
[0020]流速：0.2mL/min；
[0021]进样量：2μL；
[0022]流动相：流动相A为0.1％甲酸水溶液、流动相B为乙腈；
[0023]流动相梯度洗脱程序表如下：
[0024]时间(min)流动相A(％)流动相B(％)090101087132570303029835298
35.19010459010。
[0025]在本专利技术的一个具体实施方式中，所述质谱的工作条件为：
[0026]离子源：电喷雾离子源；
[0027]扫描模式：正、负离子扫描模式；
[0028]检测方式：多反应监测模式；
[0029]干燥气：氮气；
[0030]雾化气：氮气；
[0031]雾化气压力：30psi；
[0032]离子喷雾电压：负离子模式：4000V，正离子模式：2500V；
[0033]干燥气温度：350℃；
[0034]干燥气流速：9L/min；
[0035]质谱采集参数见下表：
[0036][0037]在本专利技术的一个具体实施方式中，所述方法的8种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，其特征在于，所述方法包括：S1、系列标准工作液的配置：精确称取8种儿茶素标准品溶解后逐级稀释得到儿茶素系列标准工作液，精确称取4种茶黄素的标准品溶解后逐级稀释得到茶黄素系列标准工作液；S2、待测样品溶液的配置：取待测茶叶样品经提取、离心后，将上清液过水相滤膜，过滤后的提取液经稀释后即为待测样品溶液；S3、HPLC
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MS/MS检测：将步骤S1的儿茶素系列标准工作液和茶黄素系列标准工作液分别注入液相色谱质谱联用仪中，以8种儿茶素和4种茶黄素的多反应监测模式离子峰面积与其对应的浓度进行回归分析，得到标准工作曲线，在相同条件下，将S2的待测样品溶液注入液相色谱质谱联用仪中，得到8种儿茶素和4种茶黄素的多反应监测模式离子峰面积，代入标准工作曲线，即可求得样品中8种儿茶素和4种茶黄素的含量；所述8种儿茶素为儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯；所述4种茶黄素为茶黄素、茶黄素
‑3‑
没食子酸酯、茶黄素
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3'
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没食子酸酯、茶黄素
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3,3'
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双没食子酸。2.根据权利要求1所述的一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，其特征在于，步骤S1中溶解过程的溶剂和步骤S2中提取过程的提取液均为70％甲醇水溶液，步骤S1和步骤S2中，稀释过程用含2％抗坏血酸的70％甲醇水溶液。3.根据权利要求1所述的一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，其特征在于，步骤S1中儿茶素系列标准工作液中，8种儿茶素的浓度为10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1000μg/L、2500μg/L、5000μg/L、10000μg/L；步骤S1中茶黄素系列标准工作液中，4种茶黄素的浓度为25μg/L、50μg/L、125μg/L、250μg/L、500μg/L、1250μg/L、2500μg/L、5000μg/L。4.根据权利要求1所述的一种茶叶中儿茶素和茶黄素的液相色谱质谱联用的检测方法，其特征在于，步骤S2中，提取的具体步骤为：取待测茶叶样品加入70％甲醇水溶液，先涡旋混匀，然后于70℃下水浴20min，再取出涡旋混匀；离心是以7500r/mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶善蓉，冯德建，吴微，王智，孙羽婕，李椤颢，张云翔，
申请(专利权)人：中国测试技术研究院，
类型：发明
国别省市：