蔷薇属U6启动子及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种蔷薇属U6启动子及其应用，属于植物基因工程领域。本发明专利技术公开了一种活性较高的蔷薇属U6启动子，可用于蔷薇属植物的基因编辑技术领域。因编辑技术领域。因编辑技术领域。

【技术实现步骤摘要】
蔷薇属U6启动子及其应用


[0001]本专利技术涉及一种蔷薇属U6启动子及其应用，属于植物基因工程领域。

技术介绍

[0002]蔷薇属(Rosa L.)隶属于蔷薇科(Rosaceae)，世界各地约有200种。蔷薇属植物花期长，花色丰富，果实美丽，通常具有芳香，在全球范围内被广泛栽植和培育。
[0003]随着分子生物学技术的进步和植物遗传转化体系的完善，通过基因工程手段进行植物品质性状的定向改良已逐渐成为现实。利用基因编辑对植物进行定向诱变的技术发展迅速，CRISPR/Cas9是包括植物和作物在内的许多生物体基因组编辑的简单而有效的工具，已经在水稻、玉米、小麦和番茄等作物中得到验证和应用。
[0004]U6启动子被广泛用于CRISPR/Cas系统中sgRNA引导序列的启动表达，以保证引导序列的结构特征。U6启动子具有种属特异性，使用转化物种本身或接近物种的U6启动子能取得更高的启动效率。然而，蔷薇属物种中克隆的U6启动子十分有限，这阻碍了基因编辑技术在蔷薇属植物中的应用。
[0005]为解决上述问题，本专利技术筛选获得了13个适用于构建蔷薇属植物CRISPR/Cas系统的U6启动子，并通过鉴定筛选到一个活性较强的启动子。该启动子可为蔷薇属植物基因编辑技术的应用提供重要的启动子资源。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的之一在于提供一种蔷薇属U6启动子。
[0007]本专利技术的目的之二在于提供了包含上述启动子的基因表达盒、表达载体和宿主细胞。
[0008]本专利技术的目的之三在于公开上述启动子、基因表达盒、表达载体和宿主细胞在蔷薇属植物基因编辑
中的应用。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0010]本专利技术提供一种启动子，其特征在于，所述启动子的核酸序列如SEQ ID NO:8所示。
[0011]本专利技术还提供一种基因表达盒，其特征在于，所述表达盒含有上述的启动子。
[0012]本专利技术还提供一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有上述的表达盒。
[0013]本专利技术还提供一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有上述的表达载体。
[0014]在一些实施方案中，上述宿主细胞为原核生物细胞。
[0015]在一些实施方案中，上述宿主细胞为大肠杆菌或农杆菌细胞。
[0016]本专利技术还提供上述的启动子、基因表达盒、表达载体、宿主细胞在蔷薇属植物基因编辑中的应用。
[0017]与现有的技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术获得一系列蔷薇属U6启动子，通过活性鉴定筛选到一个活性较强的启动子，该启动子序列并未收录在公开的数据库中，可
用于蔷薇属植物基因编辑

附图说明
[0018]图1野蔷薇U6启动子与AtU6
‑
1启动子的转录活性比较。A：Rm U6启动子与AtU6
‑
1启动子的LUC/REN比值；B：Rm U6启动子与AtU6
‑
1启动子的LUC荧光检测；C：Rm U6启动子与AtU6
‑
1启动子在本氏烟草中的GUS染色；D：Rm U6启动子与AtU6
‑
1启动子在月季
‘
萨曼莎
’
中的GUS染色。CK：不含报告基因的空载对照。
具体实施方式
[0019]提供以下定义和方法用以更好地界定本申请以及在本申请实践中指导本领域普通技术人员。除非另作说明，术语按照相关领域普通技术人员的常规用法理解。本文所引用的所有专利文献、学术论文、行业标准及其他公开出版物等，其中的全部内容整体并入本文作为参考。
[0020]除非另有所指，核酸以5
’
至3
’
方向从左向右书写；氨基酸序列以氨基至羧基方向从左向右书写。氨基酸在本文可以用其通常所知的三字母符号或IUPAC
‑
IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来表示。同样地，可以用通常接受的单字母码表示核苷酸。数字范围包括限定该范围的数字。如本文所用，“核酸”包括涉及单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸多聚物，并且除非另有限制，包括具有天然核苷酸基本性质的已知类似物(例如，肽核酸)，所述类似物以与天然存在的核苷酸类似的方式与单链核酸杂交。如本文所用，术语“编码”或“所编码的”用于特定核酸的上下文时，指该核酸包含指导该核苷酸序列翻译成特定蛋白的必需信息。使用密码子表示编码蛋白的信息。如本文所用，涉及特定多核苷酸或其所编码的蛋白的“全长序列”指具有天然(非合成)内源序列的整个核酸序列或整个氨基酸序列。全长多核苷酸编码该特定蛋白的全长、催化活性形式。本文可互换地使用术语“多肽”、“多肽”和“蛋白”，以指氨基酸残基的多聚物。该术语用于氨基酸多聚物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学类似物。该术语还用于天然存在的氨基酸多聚物。本文可互换地使用术语“残基”或“氨基酸残基”或“氨基酸”，以指被并入蛋白、多肽或肽(统称“蛋白”)的氨基酸。氨基酸可以是天然存在的氨基酸，并且除非另有限制，可以包括天然氨基酸的已知类似物，所述类似物可以与天然存在的氨基酸相似的方式起作用。
[0021]“植物”包括对整株植物、植物器官、植物组织、种子和植物细胞以及它们的子代的标引。植物细胞包括但不限于来自种子、悬浮培养物、胚芽、分生区域、愈伤组织、叶、根、苗、配子体、孢子体、花粉和小孢子的细胞。“子代”包含植物的任何后续世代。
[0022]在本申请中，将词语“包括”、“包含”或其变体应理解为除所描述的元素、数或步骤外，还包含其它元素、数或步骤。“受试植物”或“受试植物细胞”是指遗传改造已经生效的植物或植物细胞，或者如此改造的植物或细胞的子代细胞，该子代细胞包含所述改造。“对照”或“对照植物”或“对照植物细胞”提供用于测量受试植物或植物细胞表型改变的参考点。
[0023]阴性或对照植物可以包括，例如：(a)野生型植物或细胞，即与遗传改造起始材料具有相同基因型的植物或细胞，所述遗传改造产生受试植物或细胞；(b)与所述起始材料具有相同基因型但已用空构建体(即用对目的性状无已知效果的构建体，诸如包含标物基因
J&Russell D W,Molecular cloning:alaboratory manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0029]实施例1蔷薇属U6启动子挖掘
[0030]本专利技术利用拟南芥保守的102bp U6 snRNA序列(Das G,Henning D,Reddy R.Structure,organization,and transcription of Drosophila U6 small nuclear RNA genes[J].Journal of Biological本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.启动子，其特征在于，所述启动子的核酸序列如SEQ ID NO:8所示。2.基因表达盒，其特征在于，所述表达盒含有权利要求1所述的启动子。3.表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的表达盒。4.宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体。5.根据权利要求4所述的宿主细...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蔚，苏健馨，覃语祺，包满珠，黄精华，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：