【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单克隆抗体制备，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗猪cadm1单克隆抗体与应用。
技术介绍
1、细胞黏附分子(cell adhesion molecules，cams)是存在于细胞外基质或细胞表面的一类分子，多为糖蛋白。细胞黏附分子1(cell adhesion molecules 1,cadm1)是cams之一，作为跨膜糖蛋白免疫球蛋白超家族的一员，具有多种功能。最初研究发现，cadm1转染的非小细胞肺癌细胞表现生长减缓，这种黏附分子已被确认为肿瘤的抑制基因，在多种恶性肿瘤(如肝细胞癌、卵巢癌、神经母细胞瘤、膀胱癌等)中，高表达cadm1可抑制恶性肿瘤增殖、侵袭和转移，同时促进肿瘤细胞凋亡。除了在肿瘤细胞中发挥作用，cadm1与骨的发育、稳态相关。在皮肤成分或相关细胞中，角质形成细胞上的cadm1充当免疫细胞的支架分子；血管内皮细胞上的cadm1促进内皮屏障的修复；免疫细胞(如dc、t细胞、自然杀伤细胞和肥大细胞)上的cadm1有助于其免疫功能的发展。cadm1在皮肤cd141+dc上表达，表现出tlr3的高表达，并产生炎性细胞因子白介素(interleukins,ils)-12p70和干扰素β(interferon-β,ifn-β)，此外，该dc亚群具有更强的诱导th1型免疫应答的能力。
2、目前，针对cadm1的市售抗体多为多克隆抗体，产品质量不稳定，批次稳定性差，特异性较低，难以应用于免疫检测的分析需求。且当前仍缺乏针对抗猪cadm1单克隆抗体的研究。鉴于cadm1应用于科研的良好潜力，有必要
技术实现思路
1、针对上述现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗猪cadm1单克隆抗体与应用，使该抗猪cadm1单克隆抗体具有较高的特异性，能够和猪的组织或细胞中天然的cadm1蛋白发生特异性反应，以便将其应用于免疫印迹、免疫组织化学检测和免疫荧光检测。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株cadm1-2c7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c202412。
3、本专利技术还提供了一种抗猪cadm1单克隆抗体，由杂交瘤细胞株cadm1-2c7分泌得到。
4、作为本专利技术的进一步改进，所述抗猪cadm1单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:2所示。
5、作为本专利技术的进一步改进，编码所述重链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no:3所示，编码所述轻链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no:4所示。
6、本专利技术还提供了上述抗猪cadm1单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：
7、s1、猪cadm1蛋白的表达与纯化；
8、s2、采用纯化后的猪cadm1蛋白免疫小鼠；
9、s3、进行细胞融合，并筛选出阳性杂交瘤细胞进行亚克隆，得到杂交瘤细胞株cadm1-2c7；
10、s4、向小鼠腹腔注射所述杂交瘤细胞株cadm1-2c7，得到抗猪cadm1单克隆抗体。
11、作为本专利技术的进一步改进，在步骤s1中，采用原核表达的方式制备猪cadm1蛋白。
12、作为本专利技术的进一步改进，在步骤s2中，采用纯化后的猪cadm1蛋白免疫小鼠后，根据血清效价筛选出血清效价最高的小鼠进行冲击免疫与细胞融合。
13、作为本专利技术的进一步改进，在步骤s3中，采用elisa和间接免疫荧光法筛选出阳性杂交瘤细胞进行亚克隆。
14、本专利技术还提供了上述抗猪cadm1单克隆抗体在检测猪cadm1中的应用。
15、作为本专利技术的进一步改进，所述检测猪cadm1的方法包括免疫印迹法、免疫组织化学法和免疫荧光法。
16、本专利技术的有益效果是：
17、本专利技术提供的抗猪cadm1单克隆抗体具有高特异性，能特异性识别表达猪cadm1蛋白的细胞或组织样本，不仅与重组表达的cadm1蛋白具有良好的亲和反应能力，而且能够和猪的组织或细胞中天然的cadm1蛋白发生特异性反应，适用于天然猪cadm1蛋白的免疫学检测，且特别适用于免疫印迹、免疫组织化学检测和免疫荧光检测，检测结果具有较高的准确性和良好的可靠性，为猪免疫学研究提供了工具，在科研应用上具有重要的意义。
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1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为杂交瘤细胞株CADM1-2C7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202412。
2.一种抗猪CADM1单克隆抗体，其特征在于：由权利要求1所述的杂交瘤细胞株CADM1-2C7分泌得到。
3.根据权利要求2所述的抗猪CADM1单克隆抗体，其特征在于：所述抗猪CADM1单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。
4.根据权利要求3所述的抗猪CADM1单克隆抗体，其特征在于：编码所述重链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码所述轻链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
5.一种权利要求2～4中任一权利要求所述的抗猪CADM1单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的抗猪CADM1单克隆抗体的制备方法，其特征在于：在步骤S1中，采用原核表达的方式制备猪CADM1蛋白。
7.根据权利要求5所述的抗猪C
8.根据权利要求5所述的抗猪CADM1单克隆抗体的制备方法，其特征在于：在步骤S3中，采用ELISA和间接免疫荧光法筛选出阳性杂交瘤细胞进行亚克隆。
9.一种权利要求2～4中任一权利要求所述的抗猪CADM1单克隆抗体在检测猪CADM1中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述检测猪CADM1的方法包括免疫印迹法、免疫组织化学法和免疫荧光法。
...【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为杂交瘤细胞株cadm1-2c7，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c202412。
2.一种抗猪cadm1单克隆抗体，其特征在于：由权利要求1所述的杂交瘤细胞株cadm1-2c7分泌得到。
3.根据权利要求2所述的抗猪cadm1单克隆抗体，其特征在于：所述抗猪cadm1单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如seq id no:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq idno:2所示。
4.根据权利要求3所述的抗猪cadm1单克隆抗体，其特征在于：编码所述重链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no:3所示，编码所述轻链可变区的氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no:4所示。
5.一种权利要求2～4中任一权利要求所述的抗猪cadm1单克隆抗体的...
【专利技术属性】
技术研发人员：司有辉，冯雨祥，曹胜波，解冉，叶静，朱碧波，艾青，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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