【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物学，具体地涉及蚂蚁共生放线菌及其发酵产物在抑制病原真菌中的应用。
技术介绍
1、烟曲霉(aspergillusfumigatus)、白色念珠菌(candida albicans)、新生隐球菌(cryptococcus neoformans)是引起人体真菌感染疾病危害最为严重的几种致病真菌。目前用于临床的抗真菌药物种类和数量很少，主要有四大类：唑类、棘白菌素类、多烯类和氟胞嘧啶类。这造成了在治疗疾病的过程中，极易引发病原菌的耐药性产生。另外，这三种真菌在环境中十分常见，一些农用抗生素的种类与临床用药的种类相同，使得耐药菌株更容易产生，造成了真菌感染和真菌病害的防控困难。因此发现新的抗真菌化合物是目前新药开发的关键。
2、蚂蚁作为一种社会性昆虫，其生活方式复杂，包括树栖、土栖或是无固定巢穴等，这也造就了其食性的复杂，甚至一些蚂蚁会自己种植真菌作为食物。在面对复杂的自然环境下，蚂蚁就必须与微生物进行互利共生，来抵御来自外部的病原真菌威胁。链霉菌属(streptomyces)的放线菌是土壤中最为常见的一类放线菌，与蚂蚁接触的几率非常高，这使得链霉菌与蚂蚁容易形成互利共生的关系。目前已有研究发现了一些与蚂蚁共生的放线菌，不仅能产生高活性的抗真菌天然产物，毒副作用也比较低，如cyphomycin就是从一种与蚂蚁共生的链霉菌中发现的一个新颖的抗真菌活性天然产物，其体外活性与现有的抗真菌药物相当，在进行动物实验后，也未发现任何毒副作用，是一种有开发前景的化合物。这也说明了与蚂蚁共生的放线菌是一种不错的抗真菌天然产
3、目前大多数产抗真菌化合物的链霉菌都是从土壤中分离到的，其次是作为植物内生菌被发现的，而从昆虫中发现有抗真菌活性的研究和报道还相对较少。我们基于已有的文献报道，综合考虑后，选择了几种不同生境和种类的蚂蚁，最终从拟光腹弓背蚁中分离筛选出这一株放线菌，不仅菌株来源上与大多数菌株存在较大差异，并且该菌株产生的抗真菌活性化合物比较新颖，仅有个别文献对该活性成分(somamycind)有过简单的报道。经测序和比对后，我们初步将分离到的菌株鉴定为streptomyces sp.。活性测定和初步研究后，发现该化合物对多种动物病原真菌有较好的抑制活性。因此，该菌株产生的somamycind具有作为新型抗真菌化合物开发的潜质。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种能抑制多种动物病原真菌的放线菌went9(streptomyces sp.)及其活性成分somamycin d的分离和制备,化合物somamycin d一方面具有很好的抗真菌活性，另一方面具有较好的生物安全性。
2、为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、蚂蚁共生放线菌菌株went9(streptomyces sp.)，其保藏编号为gdmcc no.64177，保藏日期：2023年12月19日，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)。
4、进一步说明，该菌株在活性初筛时使用的是高氏一号培养基。
5、本专利技术还提供一种上述的蚂蚁共生放线菌菌株went9的代谢产物。
6、本专利技术还提供一种具有抑制病原真菌的化合物，所述化合物由蚂蚁共生放线菌菌株went9的发酵产物中分离获得，所述蚂蚁共生放线菌菌株went9的保藏编号为gdmccno.64177。
7、进一步说明，所述化合物为somamycin d；所述化合物somamycin d的结构式如下：
8、
9、进一步说明，所述病原真菌为烟曲霉和/或白色念珠菌和/或新生隐球菌。
10、本专利技术还提供一种抗病原真菌的药物，包含如上所述的化合物somamycin d作为活性成分。
11、进一步说明，所述化合物somamycin d抗真菌的浓度为2-4μg/ml。
12、本专利技术还提供一种制备上述具有抑制病原真菌的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
13、1)将菌株went 9于yag培养基中活化培养后，转接至高氏一号固体培养基28℃培养14天，用刀将菌体连培养基切成小块；
14、2)将所切成的小块用混合有机溶剂(乙酸乙酯:甲醇:乙酸＝80:15:5,v:v:v)浸提，减压浓缩蒸干得到粗提物浸膏；
15、3)所得到的浸膏进行硅胶柱层析分段，采用二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，得到5个洗脱组分fr.1-fr.5；
16、4)综合运用重结晶、硅胶/凝胶柱层析、tlc制备薄层色谱、快速柱层析、hplc制备色谱等分离技术对所得组分fr.1-fr.5进行分离纯化，利用现代波谱技术手段分别得到化合物somamycin d。
17、进一步说明，所述yag培养基的配方为：2％葡萄糖，0.5％酵母提取物，0.1％的1000×trace element和1.6％琼脂；1000×trace element：znso4·7h2o 2.2g,h3bo31.1g,mncl2·4h2o 0.5g,feso4·7h2o 0.5g,cocl2·5h2o 0.16g,cuso40.16 g,(nh4)6mo7o24·4h2o 0.11g,edta 5.0g,超纯水100ml；所述高氏一号培养基的配方为：可溶性淀粉20g、kno31 g、k2hpo40.5 g、mgso4·7h2o 0.5g、nacl 0.5g、feso4·7h2o 0.01g，琼脂15g，蒸馏水1l
18、本专利技术具有如下有益效果：
19、本专利技术采用稀释平板法从南宁地区(北22°51′7″，东108°14′10″)采集到的拟光腹弓背蚁(camponotuspseudoirritans)中分离到48株共生放线菌，通过平板对峙法对所得菌株进行筛选，最终筛选得到一株对烟曲霉有极好拮抗作用的菌株went9，通过dna提取，16srna扩增和测序，对测序结果在ncbi中进行比对分析后，初步将菌株鉴定为streptomyces sp.。
20、本专利技术对筛选出的菌株went9的代谢产物somamycin d进行测试，发现了该代谢产物somamycin d对动物病原真菌烟曲霉、白色念珠菌、新生隐球菌的mic，结果发现该代谢产物somamycin d对这3种动物病原真菌均有极好的抑制活性，其mic值在2-4μg/ml，是具有开发价值的抗真菌化合物。
21、为了确保化合物的生物安全性，本专利技术在确认了化合物的抗真菌活性后，以秀丽隐杆线虫为模式生物，测试了化合物对秀丽隐杆线虫的致死效果，结果显示在所选的处理浓度(0-16μg/ml)下，该化合物对秀丽隐杆线虫均未表现出致死作用，说明该化合物在生物安全性上有保障。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.蚂蚁共生放线菌菌株went9(Streptomyces sp.)，其保藏编号为GDMCC No.64177，保藏日期：2023年12月19日，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)。
2.如权利要求1所述的蚂蚁共生放线菌菌株went9(Streptomyces sp.)，其特征在于，该菌株在活性初筛时使用的是高氏一号培养基。
3.如权利要求1所述的蚂蚁共生放线菌菌株went9(Streptomyces sp.)的代谢产物。
4.具有抑制病原真菌的化合物，其特征在于，所述化合物由蚂蚁共生放线菌菌株went9的发酵产物中分离获得，所述蚂蚁共生放线菌菌株went9的保藏编号为GDMCC No.64177。
5.如权利要求4所述的抑制多种动物病原真菌的化合物，其特征在于，所述化合物为somamycin D；所述化合物somamycin D的结构式如下：
6.如权利要求4所述的抑制病原真菌的化合物，其特征在于，所述病原真菌为烟曲霉和/或白色念珠菌和/或新生隐球菌。>
7.一种抗病原真菌的药物，其特征在于，包含如权利要求4所述的化合物somamycin D作为活性成分。
8.如权利要求7所述的药物，其特征在于，所述化合物somamycin D抑制真菌的浓度为2-4μg/mL。
9.制备如权利要求4所述具有抑制病原真菌的化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述YAG培养基的配方为：2％葡萄糖，0.5％酵母提取物，0.1％的1000×Trace Element和1.6％琼脂；1000×trace element：ZnSO4·7H2O2.2g,H3BO31.1 g,MnCl2·4H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.5g,CoCl2·5H2O 0.16g,CuSO40.16 g,(NH4)6Mo7O24·4H2O 0.11g,EDTA 5.0g,超纯水100mL；所述高氏一号培养基的配方为：可溶性淀粉20g、KNO31 g、K2HPO40.5 g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O0.01g，琼脂15g，蒸馏水1L。
...【技术特征摘要】
1.蚂蚁共生放线菌菌株went9(streptomyces sp.)，其保藏编号为gdmcc no.64177，保藏日期：2023年12月19日，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)。
2.如权利要求1所述的蚂蚁共生放线菌菌株went9(streptomyces sp.)，其特征在于，该菌株在活性初筛时使用的是高氏一号培养基。
3.如权利要求1所述的蚂蚁共生放线菌菌株went9(streptomyces sp.)的代谢产物。
4.具有抑制病原真菌的化合物，其特征在于，所述化合物由蚂蚁共生放线菌菌株went9的发酵产物中分离获得，所述蚂蚁共生放线菌菌株went9的保藏编号为gdmcc no.64177。
5.如权利要求4所述的抑制多种动物病原真菌的化合物，其特征在于，所述化合物为somamycin d；所述化合物somamycin d的结构式如下：
6.如权利要求4所述的抑制病原真菌的化合物，其特征在于，所述病原真菌为烟曲霉和/或白色念珠菌和/或新生隐球菌。
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