【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于转基因药剂，尤其涉及一种二斑叶螨取食相关基因及其对应的dsrna序列与应用。
技术介绍
1、二斑叶螨tetranychus urticae是一种在世界范围内广泛分布重要的农业害螨，可危害1000多种寄主植物，尤其对我国蔬菜和花卉等经济作物造成了严重的经济损失。由于二斑叶螨个体微小、发育历期短、繁殖力强及药剂的不科学使用等原因，致使其抗性发展迅速，种群数量急剧增长，在农作物生产季节极易短期爆发成灾，使其防治日益困难。而目前对二斑叶螨的防治仍以化学药剂为主，造成了更为严重的环境压力和抗药性问题。因此，急需探寻开发新型的叶螨绿色防控技术。
2、rna干扰(rna inerference，rnai)是一种保守的转录后的特异性基因沉默机制，主要由内源或外源的双链rna引发的mrna降解，导致特异性阻碍靶标基因表达的现象，rnai具有高效性、特异性、无污染及可供选择的靶标基因多等优点，可有效的应用于害螨的防治，也被认为是新一代的杀虫剂。通过沉默叶螨特异性的靶基因，通过降低害螨的存活率以达到防治害螨的目的，其中能达到rnai防治害螨的靶标有以下几种：致死基因、生长发育基因、抗性和免疫基因以及取食消化基因等，大多数致死、抗性和生长发育基因在昆虫或螨中具有较强的保守性，可能会对益虫也产生危害。而与叶螨取食相关的未注释基因具有叶螨特异性，与其他食性不同的益虫等物种的基因同源性极低，是重要的天然选择性rnai靶标。目前，已有较多的刺吸式口器昆虫通过rnai技术干扰取食相关的基因，可显著导致害虫死亡率增加及种群数量减少。目前，
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种二斑叶螨取食相关基因及其对应的dsrna序列与应用。
2、本专利技术通过叶螨转录组数据筛选到一种二斑叶螨取食相关的未注释基因tetur08g02970(secreted salivary glandpeptide，ssgp2970)，且该基因仅存在与叶螨中，与天敌捕食螨等其他物种无同源基因，是天然的叶螨特异性rnai靶标。ssgp2970在二斑叶螨的取食阶段的表达量显著高于卵期和静止期，且与取食寄主植物类型及时长有关。体外合成靶标基因ssgp2970的dsrna，通过人工装置饲喂二斑叶螨dsrna，可有效沉默二斑叶螨的ssgp2970基因，在将二斑叶螨雌成螨转至寄主植物上取食过程中，其取食量与存活率显著降低。解决了没有针对叶螨有效而对益虫无效的高效杀螨dsrna，对研发新型rnai杀螨农药和培育抗螨植物具有重要的应用价值。
3、进一步，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的核苷酸序列：
4、atgaagattctcttagccttatttacaatctccttttgtttcattacattgaatgctgacaaaaagaagtcgccgaaaccaactagtgaagatataactgaaaaaaacgcaaccgcatgtgaaataactttgaatcaaacggcaactctcattgaaccagctttacttgttggatatcaagaatggccatctacactggaagagattgataaacattgcgatcttggagcaaaggtctataaaagcattagacgctatggtcgatgtacaactggattatctcgtcaatcactgaacatctttttgcgtggactgaaaaaattcatgcaaaacatttgttcatccaacaagaggaaacaagacacggctgatatattgaaatgtgcctccaatggaaccaacgcaggctggagtaaatgcctgaaagaaactaattcacgacttgatattacctcgacaaatgccagtgacccggccatggttggtaatatttgctgtgcttattcctcgttagttaattgtatcaacaccaataccggtacaaaatctgaatgtgataaaagcaaagatacaacgtttttcctccaatcatccatggcactggttataaaagatttaacagacttgctgtgtaccaattatgaatctaaggaatcctgtgagattcatgattcacaaagatctgacattttacaatcaattgccgaaggtaaacatgtttttaaaggagctttcttaatgacacctttaataaaagcagcaagtcaactgggtaaaatccatgctgatgatatttga。
5、进一步，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的氨基酸序列：
6、mkillalftisfcfitlnadkkkspkptsediteknataceitlnqtatliepallvgyqewpstleeidkhcdlgakvyksirrygrcttglsrqslniflrglkkfmqnicssnkrkqdtadilkcasngtnagwskclketnsrlditstnasdpamvgniccaysslvncintntgtksecdkskdttfflqssmalvikdltdllctnyeskesceihdsqrsdilqsiaegkhvfkgaflmtplikaasqlgkihaddi。
7、进一步，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的克隆全长引物的序列为：
8、ssgp2970-f：atgaagattctcttagcctta
9、ssgp2970-r：tcaaatatcatcagcatgg。
10、进一步，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的干扰引物的序列为：
11、dsssgp2970-f:taatacgactcactataggg
12、attgcgatcttggagcaaagg dsssgp2970-r:taatacgactcactatagggcccagttgacttgctgctttt。
13、进一步，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的定量引物的序列为：
14、qssgp2970-f:agaagtcgccgaaaccaact
15、qssgp2970-r:acctttgctccaagatcgca。
16、本专利技术的另一目的在于提供一种与所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970对应的dsrna序列，所述dsrna序列的片段：
17、attgcgatcttggagcaaaggtctataaaagcattagacgctatggtcgatgtacaactggattatctcgtcaatcactgaacatctttttgcgtggactgaaaaaattcatgcaaaacatttgttcatccaacaagag本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因为SSGP2970。
2.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因SSGP2970的核苷酸序列：
3.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因SSGP2970的氨基酸序列：
4.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因的克隆SSGP2970全长引物的序列为：
5.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因的干扰引物的序列为：
6.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因SSGP2970的定量引物的序列为：
7.一种与权利要求1～6任意一项所述二斑叶螨取食相关基因对应的dsRNA序列，其特征在于，所述dsRNA序列的片段：
8.一种降低二斑叶螨的存活率的方法，其特征在于，所述降低二斑叶螨的存活率的方法饲喂权利要求7所述dsRNA序列，将二斑叶螨雌成螨挑至模拟叶
9.一种用于转基因抗螨植物的制剂，其特征在于，所述用于转基因抗螨植物的制剂包含权利要求7所述dsRNA序列。
10.一种杀螨剂，其特征在于，所述杀螨剂包含权利要求7所述dsRNA序列。
...【技术特征摘要】
1.一种二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因为ssgp2970。
2.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的核苷酸序列：
3.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因ssgp2970的氨基酸序列：
4.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因的克隆ssgp2970全长引物的序列为：
5.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二斑叶螨取食相关基因的干扰引物的序列为：
6.如权利要求1所述的二斑叶螨取食相关基因，其特征在于，所述二...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙勤哲，王森山，宋丽雯，刘磊，刘欢，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：
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