一种快速检测乳粉中三聚氰酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测乳粉中三聚氰酸的方法，通过称取０．５克乳粉于离心管中，加入１０ｍＬ按ｖ／ｖ计０．０５％－１．０％乙酸溶液提取样品中的三聚氰酸，在８０℃－９０℃水浴中加热５ｍｉｎ－１０ｍｉｎ，取出振摇，离心，滤液经Ｃａｒｂ／Ｃ１８双相固相萃取柱净化，氮气吹干，硅烷化衍生，气相色谱－质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量。从而建立了一种测定乳粉中三聚氰酸简便、快速、灵敏、准确、低成本、耐用的确证和定量方法，广泛应用于乳粉为代表的食品中三聚氰酸的检测技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是涉及领域。
技术介绍
三聚氰酸(C/Mi/r/c ac/忒CYA )，学名2, 4， 6-三羟基-1， 3， 5-三噪(2， 4, 6-7WArtfro;r广1，3, 5-7Wsz/y7e)，简称氰尿酸、异氰脲酸等。是一种三溱类含氮杂环化合物，重要的有机化工原料，广泛用于塑料、树脂、抗氧剂、涂料、粘合剂、消毒剂、阻燃剂、除草剂和药物的生产。三聚氰酸常作为水处理中的杀菌剂、消毒剂，它也是除草剂西玛津(s/鹏z/'/ e)、阿特拉津(Wrsz/刀e)的降解产物。三聚氰酸和三聚氰胺是同系物，在三聚氰胺生产过程中同时存在三聚氰酸，三聚氦胺在强酸或强碱环境下，会发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺C4/ffiffe//77e)、三聚氰酸一酰胺(^ /^//^)、最后生成三聚氰酸。三聚氰胺和和三聚氰酸可紧密结合形成不溶于水的三聚氰胺氰尿酸盐(船7^/力e<^a/7"ra,e, MCA),在肾细胞中沉淀从而形成肾结石，堵塞肾小管，最终造成肾衰竭反刍动物(包括牛、绵羊、山羊等)可消化三聚氰酸，因此三聚氰酸可作为非蛋白氮类飼料添加剂，美国食品药品管理局(FDA)允许添加到反刍动物铜料中，规定三聚氰酸和1，3-二-氨基甲酖尿素的最高含量不得超过30%。但不允许添加到猪、鸡、鱼及水产养殖饲料中。2008年11月28日，美国食品和药物管理局(FDA)公布了美国生产的婴儿配方奶粉检测结果，国际某品牌生产的婴儿配方奶粉检出三聚氰酸，最高值为412jag/kg,显示出三聚氰酸带给人们食品中的不安全因素，由于三聚氰酸可能从环境、飼料等途径进入到食品中，建立快速，灵壽史、准确、专一、耐用的检测食品中三聚氰酸的方法已成为国际维护食品安全重要的需求。目前，三聚氰酸的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色i普-串联质谦法(HPLC-MS/MS) 。 HPLC的灵敏度较低且无法提供结构信息， 一般常作为筛选方法，GC-MS、 HPLC-MS/MS能够进行确证分析。HPLC-MS/MS 法文献需采用内标基质匹配法来定性和定量，才喿作步骤繁瑣，内标物昂贵，-险测成本高。GB/T22288-2008《植物源产品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸的测定气相色谙-质谱法》规定了三聚氰酸的测定方法，该法三聚氰酸的测定低限为2mg/kg。在实际的4t睑工作中，发现该方法不适用于奶粉尤其是婴幼儿配方奶粉中三聚氰酸的检测，方法的灵敏度、专一性不符合有关规定。国内外也未见有关高灵敏、专一的测定乳粉中三聚氰酸的方法的报道。因此，探索和研究快速，灵敏、准确、专一、耐用的检测食品中三聚氰酸的方法，对于维护食品安全，保护人民的身体健康和消费者的合法权益，促进食品行业的快速发展均具有重要意义。
技术实现思路
针对GB/T22288-2008《植物源产品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸的测定气相色语-质镨法》方法不适用于奶粉，也未见有关测定乳粉中三聚氰酸的快速，灵敏、准确、专一、耐用确证和定量方法的报道，尤其是该方法不适应婴幼儿配方奶粉中三聚氰酸的检测，方法的灵敏度、专一性不符合有关规定的缺陷。本专利技术的目的在于提供了一种测定乳粉中三聚氰酸的快速，灵敏、准确、专一、耐用的确证和定量方法。本专利技术具体提供了一种测定乳粉中三聚氰酸的确证和定量方法。本专利技术的技术方案通过建立了 GC-MS法测定乳粉中三聚氰酸的方法，在在84。C条件下，用0. 5°/ 乙酸溶液提取样品中的三聚氰酸，离心，滤液经Carb/C18双相固相萃取柱净化，氮气吹干，硅烷化衍生，气相色谱-质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量。本专利技术具体提供了一种快速测定乳粉中三聚氰酸的方法，乳粉经前处理后，气相色谱-质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，其特征在于，所述的前处理步骤如下称取0.5克乳粉于离心管中，加入10mL0.05%-1.0%乙酸溶液，振摇，在80°C-卯。C水浴中加热5 min-10min,取出振摇，过滤后准确移取lmL-5 mL滤液于试管，加9mL-5 1^0.05%-1.0%乙酸溶液混匀，采用Carb/C18双相固相萃取柱净化，用二氯曱烷、曱醇、乙酸溶液活化。依次用乙酸溶液、水淋洗小柱，吹干，用4mL-10mL甲醇洗脱，收集洗脱液，通氮气緩緩吹干，加入吡啶和衍生化试剂，微波辅助衍生2min-8min，转移至样品瓶中，供气相色谱-质语测定。进一步，本专利技术测定乳粉中三聚氰酸的确证和定量方法，优选乳粉经前处理步骤如下称取0.5克乳粉于离心管中，加入10mL按v/v计0.5%乙酸溶液，振摇，在84。C水浴中加热5min，取出振摇，过滤后准确移取2mL滤液于试管，加8mL按v/v计0.5。/。乙酸溶液混匀，采用Carb/C18双相固相萃取柱净化，用二氯曱烷、曱醇、乙酸溶液活化。依次用乙酸溶液、水淋洗小柱，吹干，用6mL曱醇洗脱，收集洗脱液，通氮气緩緩吹干，加入吡咬和衍生化试剂，微波辅助衍生5min，转移至样品瓶中，供气相色谱-质镨测定。本领域所熟知，三聚氰酸在5g/L, 20。C条件下微溶于水，溶于热水、热醇、吡啶，也溶于氩氧化钠和氢氧化钾水溶液。本专利技术确定在80。C-9(TC条件下，按v/v计0.05-1.0%乙酸溶液提取样品中的三聚氰酸，加入乙酸有利于提高三聚氰酸萃取率，高温和酸性条件可使蛋白质变性，促进沉淀。同时，本专利技术技术方案确定，在离心技术环节中，采用尼龙滤膜能有效过滤乳粉中的蛋白质和部分脂肪，使提取液得到了初步净化，但采用尼龙滤膜过滤并不局限本专利技术的实施，采用其他过滤技术手段也可实现本专利技术的技术方案。质、脂肪、糖类等营养成分。采用气相色语-质语法测定三聚氰酸时，蛋白质、脂肪、糖类等营养成分对测定有很大的干扰，为准确定性和定量，降低检出限和测定低限，必须对其进一步净化。现有才艮道的净化方法主要有高速离心、过滤、液-液萃取法和固相萃取法等，其提取方法只去除了蛋白质和部分脂肪，提取液含有的部分脂肪对测定有很大的干扰，需要除去。本专利技术选择Carb/C18双相柱为净化柱，去除干扰的效果最好，洗脱物比较干净，基质背景和基线噪音低，可获得稳定、满意的回收率和较好的重现性。本专利技术充分考虑到，固相萃取净化时的上样体积对三聚氰酸的回收率有明显的影响，本专利技术采用上样体积为1-5 mL, 4-10mL曱醇为洗脱液，获得回收率高，净化效果好，方法灵敏度高。本专利技术通过对选择离子监测模式(SIM)离子选择的优化，有效提高方法的选捧性和抗干扰能力、降低^r测限和测定低限；三聚氰酸的特征离子为147、 188、330、 345、 346、 347,经对乳粉中加标样品的分析，样品基质中含有147、 188、347离子碎片，对定性定量测定干扰大，本专利技术最终选定三聚氰酸的特征离子为330、 345、 346,采用上述离子组合来定量和确证，获得抗干扰能力强，专一性强，灵敏度高，能准确地对三聚氰酸进行定性和定量分析。本领域熟知，衍生化反应一般为70。C下加热45min，本专利技术经过反复试验确定采用在微波800W条件下，衍生化5min，大大缩短了反应时间。本专利技术确定在84本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定乳粉中三聚氰酸的方法，乳粉经前处理后，气相色谱－质谱测定，选择离子监测模式，外标法定量，其特征在于，所述的前处理步骤如下：　称取０．５克乳粉于离心管中，加入１０ｍＬ按ｖ／ｖ计０．０５％－１．０％乙酸溶液，振摇，在８０℃－９ ０℃水浴中加热５ｍｉｎ－１０ｍｉｎ，取出振摇，过滤后准确移取１ｍＬ－５ｍＬ滤液于试管，加９ｍＬ－５ｍＬ按ｖ／ｖ计０．０５％－１．０％乙酸溶液混匀，采用Ｃａｒｂ／Ｃ１８双相固相萃取柱净化，用二氯甲烷、甲醇、乙酸溶液活化。依次用乙酸溶液、水淋洗小柱，吹干，用４ｍＬ－１０ｍＬ甲醇洗脱，收集洗脱液，通氮气缓缓吹干，加入吡啶和衍生化试剂后经微波加热衍生化反应后转移至样品瓶中，供气相色谱－质谱测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李锋格，姚伟琴，田延河，苏敏，窦辉，朱慧萍，王昭妮，
申请(专利权)人：新疆出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]