一种简单的用可注射软骨细胞进行同源软骨细胞移植的方法技术

本发明专利技术是关于一种用移植可注射软骨细胞来进行同源软骨细胞移植的方法。为此本发明专利技术提供了一种用移植可注射软骨细胞来进行同源软骨细胞移植的方法，包括当向软骨损伤区注射基质时，用注射器前端混合动物软骨细胞主要组分：血纤维蛋白、透明质酸和胶原蛋白作为基质。进一步说，发明专利技术提供了一种用移植可注射软骨细胞来进行同源软骨细胞移植的方法，包括：将１号瓶（红色）内的软骨细胞培养物１ｍｌ放入１ｍｌ灭菌注射器中，将注射器垂直插入装有白色或浅黄色血纤蛋白原冻干粉末的２号瓶（蓝色），并将软骨细胞培养物注入２号瓶，纤维蛋白源的最终浓度范围是１０ｍｇ／ｍＬ至２００ｍｇ／ｍＬ；将注射器垂直插入３号瓶中，缓慢的将１ｍｌ１号瓶（红色）中的细胞培养物（红色液体）注入含有白色冻干粉末（凝血酶）的３号瓶（红色，小瓶）中；用１ｍｌ注射器从含有１ｍｌ内容物的３号瓶（红色，小瓶）中收集０．１ｃｃ内容物，然后注入４号瓶（黄色）的底部，凝血酶的浓度范围是ＩＵ／ｍＬ至２００ＩＵ／ｍＬ；用１ｍｌ灭菌注射器将两个小瓶中的软骨细胞悬浮物全部加入４号瓶（黄色）中，然后用注射器将其反复混合２－３次；确认２号瓶（蓝色）中的物质完全溶解后将其全部注入１ｍｌ注射器中；将４号瓶（黄色）中混合好细胞治疗剂注入１ｍｌ注射器中，将两支装满２号瓶（蓝色）和４号瓶（黄色）内容物的１ｍｌ注射器置于固定的支架上，并将一个螺旋头置于注射器上，当要将最终混合物通过注射移植到动物损伤的软骨区域时，使用注射器前端的螺旋头混合注射器内的物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术是关于通过注射来移植软骨治疗剂(Chondron:体外培养可用于 同源软骨细胞移植的软骨细胞)的一种方法。更明确的说，本专利技术是一种移 植软骨治疗剂的方法，包括混合并移植包含有血纤维蛋白、透明质酸和胶原 蛋白等构成软骨的主要成分的基质，从而解决了传统的骨骨膜移植方法的不 便，使治疗大范围软骨缺损及更严重的关节炎成为可能，这种简单的外科手 术方法减轻病人的负担，更加迅速有效的促进了软骨的再生并使消费者更加 满意。
技术介绍
近来，众所周知分子生物学、细胞生物学、发育生物学和组织工程学在 对损伤组织和器官的功能改进、维持和恢复方面，通过改进方法对提高人们 的健康和生活水平作出了巨大的贡献。组织工程是通过控制细胞粘附力、细胞生长和细胞分化，分裂活性以及 细胞基质间相互作用的生长因素来制造组织替代物从而分泌细胞内的信号传 导物质。早期的组织工程工作主要只关注细胞的利用或者利用基质复合物制 造细胞的细胞治疗，因此在应用上有很大的局限，所以发展更高级的组织替 代物已成为迫切的需要，由此引发了利用软骨细胞和基质混合物来进行软骨 治疗方法的发展。已经证明关节和半月板加速磨损以及关节表面的损伤都具有不稳定性。 此外，关节软骨一旦损伤，在体内是不能完全再生的。损伤的关节软骨在慢 性刺激下会引发关节痛并且进一步限制了关节的活动，最终导致更严重的退 化性关节炎。软骨细胞在体内没有增生性，通过体外调节培养条件而实现分 化增殖可有效的用于关节再生。结果，移植的软骨细胞获得了像正常关节软 骨一样的组织和机械特性，并且大于90%的病人没有观察到移植排异和組织破坏。其中，同源软骨细胞移植(ACT)是一种有效的治疗关节软骨损伤的方 法。其他传统治疗方法，例如磨损关节形成术、钻孔和微破裂、骨膜和软 骨膜自体移植等是用不具备透明软骨的坚固特性的纤维软骨或纤维软骨组织 替代损伤的关节软骨。不管用何种方法，与其他传统技术相比同源软骨细胞 移植(ACT)最重要的优点就是使用了透明软骨。尽管有如此卓越的优势，同源软骨细胞移植技术依然受到技术和理论难 点的限制，如图1所示首先，这种同源软骨细胞移植技术需要较大的外科切口用于收集骨膜。 这种较大的切口会导致术后的剧烈疼痛并减少了膝部的运动性。第二、在软骨损伤区域的边界缝合骨膜补片需要非常复杂的外科技术， 有报道称有时会导致骨膜过度增大和关节内粘联。缝合骨膜在引导同源软骨 细胞移植的外科手术中是最耗时的程序。此外，再复原过程中，例如外科手术后的膝部练习时，可能会发生软 骨细胞从移植位点的泄漏，移植的软骨细胞在移植位点呈液相，并且由于重 力的作用停留在一侧，这会导致其不平均的分配和软骨的异类生长，这是同 源软骨细胞移植的不利之处。为了解决以上问题，在利用具有生物降解性和生物兼容性的聚合物作为 载体或手脚架方面进行了大量的研究。例如关于软骨的体内、体外的组织 工程学大量研究被积极展开，利用自然形成的聚合物(例如胶原蛋白、透 明酸和血纤维蛋白)作为生物材料，或者利用聚乳酸或聚乙醇酸等合成材料。手脚架通过保持气孔结构在细胞生长繁殖和软骨细胞显型方面起到非常 重要的作用。正如上面所提到的，血纤维蛋白和透明酸是非常适合用于手脚 架的材料。血纤维蛋白是自然产生的物质，是非常适合用于作为软骨细胞移 植的生物载体。此外，曾有报道血纤维蛋白具有生物兼容性、生物降解性和 结合软骨(在结构上临近软骨下方)的优点。而且血纤维蛋白能被很容易的 改进成所需的形状用于注射。同时，透明酸是一种润滑剂，它被发现存在于 润滑关节的液体中，行使控制关节内容物湿度的作用。然而，依然有一个问题存在。既然大部分用于组织工程的手脚架是固相 的，例如补片、海绵体和薄片，用于组织工程治疗的软骨很难与其临近的 自然软骨结合。这是一个非常重要的事实，软骨治疗在软骨损伤区域的移植 使区域边界处不能完全彻底治愈。
技术实现思路
本专利技术是提供一种通过注射来软骨治疗移植方法，以解决现有技术中等 问题。因此，本专利技术的首要目的是通过混合并移植包含有血纤维蛋白、透明质 酸和胶原蛋白等构成软骨的主要成分的基质，解决了传统的骨膜移植方法的 不便。第二个目的是通过利用可注射的软骨治疗剂可迅速凝胶的特性(大约1-5分钟)，提供了一种方便的原位移植方法。第三本专利技术能够使移植位点与临近的自身软骨完全结合，因此可广泛用 于各种软骨损伤以及严重的关节炎治疗。第四个目的是通过简单的外科手术减轻患者的负担。第五个目的是本专利技术可更加快速有效的促进软骨再生，从而通过简单的 外科手术提高客户的满意度。根据本专利技术的一方面所述，上文所提及的目的可通过对同源软骨细胞移 植可注射的软骨细胞来实现，包括用注射器的前端混合构成动物软骨主要成 分的血纤维蛋白、透明质酸和胶原蛋白作为基质，并将其注入损伤的软骨区 域。根据本专利技术的另 一方面所述，对同源软骨细胞进行可注射的软骨细胞移 植包括将1号瓶(红色)内的软骨细胞培养物lml放入lml灭菌注射器中，将 注射器垂直插入装有白色或浅黄色血纤蛋白原冻干粉末的的2号瓶(蓝色)， 并将软骨细胞培养物注入2号瓶；将注射器垂直插入3号瓶中，緩慢的将lml 1号瓶(红色)中的细胞培养 物(红色液体)注入含有白色冻干粉末(凝血酶)的3号瓶(红色，小瓶)中；用lml注射器从含有lml内容物的3号瓶(红色，小瓶)中收集0.1cc内 容物，然后注入4号瓶(黄色)的底部；用lml灭菌注射器将两个小瓶中的软骨细胞悬浮物全部加入4号瓶(黄 色)中，然后用注射器将其反复混合2-3次；确认2号瓶(蓝色)中的物质完全溶解后将其全部注入lml注射器中。将4号瓶(黄色)中混合好细胞治疗剂注入lml注射器中，将两支装满2 号瓶(蓝色)和4号瓶(黄色)内容物的lml注射器置于固定的支架上，并 将一个螺旋头置于注射器上，当要将最终混合物通过注射移植到动物损伤的 软骨区域时，使用注射器前端的螺旋头混合注射器内的物质。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点本专利技术通过混合并移植由软骨主要成分纤维蛋白、透明质酸和胶原蛋白 组成的基质，解决了传统骨膜移植的不便之处；可广泛用于治疗软骨损伤和 严重关节炎；通过简单的外科手术方法减轻患者负担；更加快速有效的促进 软骨再生从而提高客户满意度。附图说明图1是移植软骨治疗剂常规方法的图片；图2是本专利技术移植可注射的软骨治疗剂方法的图片；图3是本专利技术移植软骨治疗剂方法的图片；图4是本专利技术通过注射器来移植可注射的软骨治疗剂方法的图片；图5是本专利技术所涉及的可注射软骨治疗剂的物理属性的图片；图6是本专利技术治疗的犬类软骨再生3个月的图片；图7是电子显樣t镜下软骨治疗剂移植8周后的图片；图8是电子显微镜下软骨治疗剂移植12周后的图片；图9是本专利技术治疗的犬类软骨再生12周的图片；图10是采用本专利技术的软骨治疗后的组织学检查结果的图片；图11是本专利技术的软骨治疗后的免疫组织学检查结果的图片。具体实施方式图2至12展示了本专利技术通过注射来进行软骨治疗剂移植的各个环节。本专利技术中与消费者或者制造者意图不同的用于解释功能的术语将被描 述。因此，这里的术语是基于本专利技术整篇说明书来定义的。本专利技术的特征在于用注射器的前端混合构成动物软骨主要成分的血纤维 蛋白、透明质酸和胶原蛋白作为基质，并将其注入损伤的软骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用可注射软骨细胞进行同源软骨细胞移植的方法，其特征在于，包括：　　　　当向软骨损伤区域注射基质时，用注射器前端的混合头混合构成动物软骨主要组分的纤维蛋白、透明质酸和胶原蛋白做为基质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：高畅权，李恩永，崔正龙，张在德，张晶皓，金评敏，
申请(专利权)人：世源世龙股份有限公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]