一种高得率人原代软骨细胞制备方法技术

本发明专利技术属于细胞体外培养领域，具体公开了一种高得率人原代软骨细胞制备方法。所述方法包括以下步骤：获取软骨组织，以眼科剪刀将软骨组织剪碎；加入胰酶消化，吸弃上清液；加入II型胶原酶消化过夜后，过滤，加入培养基终止消化，1000‑1500rpm离心5min，获取软骨细胞沉淀后种植于培养皿中培养，得到高得率人原代软骨细胞。本发明专利技术主要在于软骨组织块的剪碎和离心速度上进行改进。本发明专利技术通过将离心转速提高至1000‑1500rpm，既不至于破坏软骨细胞，又极大地提高了软骨细胞的得率。与传统的软骨细胞制备方法相比，本发明专利技术方法在软骨细胞的得率上提高了约3.55倍，且经实验验证所得软骨细胞有良好的细胞形态。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞体外培养领域，涉及一种人原代软骨细胞的制备方法，具体涉及一种高得率人原代软骨细胞制备方法。
技术介绍
在机体中，软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞类型，在筛选防治骨关节炎药物时，需要在体外培养人原代软骨细胞。然而，通常人原代软骨细胞在体外培养经过3-4次传代后，细胞形态逐渐变得肥大，软骨细胞特异性基因II型胶原和蛋白多聚糖等表达丢失，因而其表型和体内软骨细胞表型差异较大，因此不适合用于科研研究需要。为保证药物筛选实验等科研研究的顺利开展，通常取传代1-3次的细胞进行实验，这就需要大量的软骨细胞。传统的软骨细胞培养方法，一般包括以下步骤：取做膝关节置换手术病人的关节软骨，DPBS清洗干净，眼科剪刀剪碎成细小碎片，加入0.25％(m/v)胰酶于37℃消化30min，然后吸弃上清液，再加1mL的0.02％(m/v)II型胶原酶消化过夜，消化后将细胞悬液用100μm细胞滤网过滤，加入含10％(v/v)FBS(胎牛血清)的高糖DMEM培养基终止消化，800rpm离心5min得软骨细胞沉淀，将软骨细胞培养于含10％(v/v)FBS高糖DMEM培养基中，置于37℃，5％(v/v)C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高得率人原代软骨细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：取做膝关节置换手术病人的关节软骨，剔除干净软组织，剩余透明的软骨组织，然后放入盛有DPBS缓冲液的离心管中，振荡清洗，直至残留的血液漂洗干净；步骤(2)：以眼科剪刀将软骨组织剪碎成1mm×1mm碎片；步骤(3)：加入胰酶消化，吸弃上清液；然后加入0.02％(m/v)II型胶原酶，消化过夜后，细胞悬液过滤，加入含10％(v/v)FBS(胎牛血清)的高糖DMEM培养基终止消化，1000‑1500rpm离心5min，获取软骨细胞沉淀；步骤(4)：将软骨细胞沉淀种植于培养皿中，培养于含10％(v/v)FBS的高糖DMEM培养基中，...

【技术特征摘要】
1.一种高得率人原代软骨细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：取做膝关节置换手术病人的关节软骨，剔除干净软组织，剩余透明的软骨组织，然后放入盛有DPBS缓冲液的离心管中，振荡清洗，直至残留的血液漂洗干净；步骤(2)：以眼科剪刀将软骨组织剪碎成1mm×1mm碎片；步骤(3)：加入胰酶消化，吸弃上清液；然后加入0.02％(m/v)II型胶原酶，消化过夜后，细胞悬液过滤，加入含10％(v/v)FBS(胎牛血清)的高糖DMEM培养基终止消化，1000-1500rpm离心5min，获取软骨细胞沉淀；步骤(4)：将软骨细胞沉淀种植于培养皿中，培养于含10％(v/v)FB...

【专利技术属性】
技术研发人员：许学猛，
申请(专利权)人：广东省第二中医院，
类型：发明
国别省市：广东;44