一种猪前体脂肪细胞的分离培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞工程和组织领域，具体而言，涉及一种猪前体脂肪细胞的分离培养方法。本发明专利技术通过对现有的分离培养方法进行了改进，在Ⅰ型胶原酶消化后，采用冷消化技术处理细胞，通过加入研磨珠的方式充分分离前体脂肪细胞，并且取消了尼龙筛过滤、离心和红细胞裂解的操作，从而取得了提高实验的时间进行自由度、前体脂肪细胞分离程度更彻底以及简化操作流程、减小污染几率、降低对前体脂肪细胞的损伤等技术效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞工程和组织领域，具体而言，涉及一种猪前体脂肪细胞的分离培养方法。
技术介绍
从脂肪组织中分离培养的细胞多称为“前体脂肪细胞”。前体脂肪细胞是一类具有增殖分化能力的脂肪细胞前体，在体内多种因素的影响下聚脂分化而成为成熟脂肪细胞。前体脂肪细胞的体外培养不仅能完整地认识脂肪组织发生和增生的全过程，并且可以直接观察各种因素对这个过程的调控。此外，脂肪细胞增殖和分化失控会导致肥胖，并与糖及脂肪代谢、机体能量平衡、肥胖症、II型糖尿病等有非常密切的关系。因此，选择合适的动物模型在体外重现前体脂肪细胞增殖肥大的全过程对于探讨上述生命和疾病过程具有重要意义。猪是肥胖程度最高的动物，脂肪沉积最迅速，且与啮齿类哺乳动物及禽类的脂肪沉积部位及沉积模式啮齿类哺乳动物及禽类的脂肪沉积部位及沉积模式存在显著差异，与人的更为接近，因而猪的脂肪细胞增殖与分化模式为研究人类机体脂肪沉积提供了一个理想模型，同时为研究不同动物的脂肪沉积模式提供参考。目前，国内己成功建立了大鼠、小鼠、人、棋牛和兔的前体脂肪细胞体外分离培养模型，但猪前体脂肪细胞培养体系的建立还不够成熟，目前仍然存在着猪前体脂肪细胞操作繁本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、分离3～5日龄仔猪皮下脂肪组织并去除脂肪组织中可见的血管和结缔组织；漂洗并将组织剪碎后与研磨珠一起加入到盛有Ⅰ型胶原酶溶液的容器中进行消化得到消化液；2)、消化结束后通过加入细胞培养液混匀后静置分层的方法除去Ⅰ型胶原酶溶液；摇动所述容器使得研磨珠将剩余的组织研碎后接种到培养瓶中进行培养；3)、待细胞培养至融合度为75％～85％后对细胞进行消化并接种于培养板中培养备用。

【技术特征摘要】
1.一种猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、分离3～5日龄仔猪皮下脂肪组织并去除脂肪组织中可见的血管和结缔组织；漂洗并将组织剪碎后与研磨珠一起加入到盛有Ⅰ型胶原酶溶液的容器中进行消化得到消化液；2)、消化结束后通过加入细胞培养液混匀后静置分层的方法除去Ⅰ型胶原酶溶液；摇动所述容器使得研磨珠将剩余的组织研碎后接种到培养瓶中进行培养；3)、待细胞培养至融合度为75％～85％后对细胞进行消化并接种于培养板中培养备用。2.如权利要求1所述的猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，在步骤1)中，去除脂肪组织中可见的血管和结缔组织之前还包括：用含双抗的PBS缓冲液浸泡仔猪皮下脂肪组织8min～15min。3.如权利要求1所述的猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，在步骤1)中，所述漂洗具体为用含双抗的PBS缓冲液漂洗2～3次。4.如权利要求1所述的猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，所述将组织剪碎具体为将组织剪成0.5mm3～1.5mm3的小块。5.如权利要求1所述的猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，所述研磨珠为氧化锆珠、钢珠、玻璃珠、陶瓷珠中的一种或多种。6.如权利要求1所述的猪前体脂肪细胞的分离培养方法，其特征在于，在步骤1)中，所述Ⅰ型胶原酶溶液中Ⅰ型胶原酶的质量百分数为0.08％～0.12％；Ⅰ型胶原酶溶液的体积为剪碎后组织的2～4倍；所述消化的条件为：2℃～6℃消化10h～16h...

【专利技术属性】
技术研发人员：张国华，卢建雄，陈妍，臧洪伟，
申请(专利权)人：西北民族大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62