用于骨折愈合的半固体混合纤维蛋白成骨细胞成分及其制备方法技术

本发明专利技术是有关于一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备方法。该方法包括：从骨组织中分离成骨细胞，在ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄ　　Ｅａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）或者α－ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ　　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　　Ｍｅｄｉｕｍ，ＡｌｐｈａＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）中培育／增生分离的成骨细胞，制备成骨细胞悬浮液；及将成骨细胞悬浮液与凝固因子混合，制备成骨细胞治疗剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其 制备方法。本专利技术尤其涉及一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细 胞成分，其提供了一种含有成骨细胞和纤维蛋白混合物的治疗剂，可以注入 到患病区域使骨结合来治疗严重的骨折，及其制备方法。
技术介绍
一般地，简单的骨折可以通过固定几个星期骨折部位完全愈合，但是严 重的骨折或骨缺陷需要骨移植。大多数医生首选的骨移植方法是自体移植，包括从患者身体的某一部位 收集骨，尤其是髂脊，接下来移植到患者的患病区域。由于移植的是患者自 己的骨骼，这种方法能得到极好的结果。然而，这种自体移植的缺点是这种 手术方法会伴随有严重的疼痛，并且存在多种潜在问题，在骨接受区可能出 现敏感度和感觉降低，为了骨移植需要额外的手术，长时间的住院治疗，痊 愈医疗费用增加。另外，在身体里没有足够的额外骨骼用于移植，这种自体 移植为了保护贡献部位需克服许多困难。据报道如果脊髓手术迫使大量骨移植，由于骨自体移植引起的并发症发病率高达23%。为了缓解自体移植上述缺点的异体移植，主要是从尸体获得骨，不必为 了骨移植做额外二次手术，但是具有致命的缺点，例如在灭菌过程中骨强度 降低，出现移植排斥，具有被传染性疾病感染的可能性，例如肝炎和艾滋病。 另外，异体移植具有以下缺点低骨形成作用，免疫反应，骨吸收及相关骨 骼再骨折，应用范围窄。因此，这种手术方法由于食品药品监督部门为了抵 制感染加强骨组织库管理乂人1993年底开始减少。同时，骨髓注射是基于Huggins(1931),Friedenstein (1973),和Ashton (1980) 声明的技术，其中来自骨髓的骨原细胞促进并推动骨形成。骨髓注射在治疗骨折时通常单独使用，但也在骨移植中使用。与其它骨移植技术不同，这用 骨髓注射供体不需切开皮肤，有利于降低供体发病率，没有并发症或副作用。 其后，尽管大量临床应用病例获得好结果被报道，骨髓注射的缺点是不 具有健全的理论基础，获得的相当一部分结果间不具有一致性，从一个位置 收集的骨髓数量是有限的，骨髓中的骨原细胞的数量是相当有限的。
技术实现思路
因此，基于上述问题本专利技术的目的在于提供一种用于骨结合含有纤维蛋 白的半固体成骨细胞成分及其制备方法，通过向骨结合的部位注射成骨细胞 和纤维蛋白的混合物，无临床移植排异，通过注射适于一定程度的这用成分 可以获得有效、快速的骨结合，为了减轻由于注射的成骨细胞从骨结合区域 逃逸而造成的非必要区域骨组织形成及成骨细胞通过血流增生的问题，这个 问题是由于单独注射成骨细胞悬浮液而造成的。本专利技术的另 一个目的是提供一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成 骨细胞成分及其制备方法，当成骨细胞和纤维蛋白的混合物注射到骨结合部 位时，进行外科手术只需一个最小的切口，通过筒单有效地注射成骨细胞和 纤维蛋白的混合物获得骨结合，利用放射线无需在相关受损区域切口 。与本专利技术的一个方面一致，上述及其它目的通过提供一种制备用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分来实现，包括从骨组织中分离成 骨细胞，在DMEM(Dulbecco，s Modified Eagle's Medium)或者a-MEM (Minimum Essential Medium, Alpha Modification)中培养/增生分离的成骨细胞， 制备成骨细胞悬浮液；及将成骨细胞悬浮液与凝固因子混合制备成骨细胞治疗剂。其中，凝固因子是凝血酶和纤维蛋白原的混合物。其中，治疗剂的制备步骤包括冻干的凝血酶溶解在液体DMEM或者cx -MEM中，将l - 100IU/mL的溶解凝血酶与成骨细胞混合溶液混合；冻干的纤 维蛋白原溶解在液体DMEM或者oc -MEM中，将20 - 100mg/mL的溶解纤维蛋 白原与含有凝血酶的成骨细胞混合溶液混合。与本专利技术的另 一个方面 一致，提供了 一种上述方法制备的成骨细胞成分，与现有技术相比，本专利技术具有以下优点与本专利技术一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制 备方法相一致，如上所述，能够使骨移植，通过向骨结合的部位注射成骨细 胞和纤维蛋白的混合物，无临床移植排异，通过注射适合的一定程度的成分 可以获得有效、快速的骨结合，为了减轻由于注射的成骨细胞从骨结合区域 逃逸而造成的非必要区域骨组织形成及成骨细胞通过血流增生的问题，这个 问题是由于单独注射成骨细胞悬浮液而造成的。另外，本专利技术可以使骨移植，当成骨细胞和纤维蛋白的混合物注射到骨 结合部位时，进行外科手术只需一个最小的切口，通过简单有效地注射成骨 细胞和纤维蛋白的混合物获得骨结合，利用放射线无需在相关受损区域切口 。附图说明图1是纤维蛋白聚合级联作用图； 图2是纤维蛋白基质聚合作用示意图；图3是本专利技术制备用于骨结合的半固体成骨细胞成分方法流程图； 图4是在兔前臂大小为15mm的骨折部位注射纤维蛋白和成骨细胞混合 物的照片；图5是在兔前臂大小为15mm的骨折部位注射含有纤维蛋白和成骨细胞 混合物的治疗剂6周后的X光照片；图6是在兔前臂大小为15mm的骨折部位注射含有纤维蛋白和成骨细胞 混合物的治疗剂6周后用苏木精-曙红染色的组织切片照片。图7是在兔前臂大小为15mm的骨折部位注射纤维蛋白和成骨细胞混合 物6周后用曼森氏三色法(Masson， sTrichrome)染色的组织切片照片。图9 是在回圏中消耗所剩余的反应电动势突波曲线示意图。具体实施方式本专利技术一种用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分及其制备 方法将参考附图做进一 步详细描述。为了克服骨相关错乱和疾病传统治疗方法的不足，例如移植和骨移植， 通过培育成骨细胞，自体成骨细胞移植技术作为最后的治疗方法在受损部位 无副作用，与传统治疗方法的改进共同发展。然而，为了获得早期骨结合，需要将成骨细胞与基质混合来治疗多种病 变，因此，没有分享治疗的益处，注射仅仅由液体成骨细胞构成的成骨细胞 悬浮液可能治疗多种骨疾病。可以这样说，含有成骨细胞和纤维蛋白混合物的半固体成骨细胞治疗剂 是一种更先进的基于细胞治疗用于液体成骨细胞悬浮液注射方法的产品。传 统的液体成骨细胞悬浮液注射方法，包括单独移植成骨细胞，仅仅可以治疗 有限类型的骨缺陷，并且要遭受一些由于注入的成骨细胞从骨形成位点逃逸， 骨组织在非必要区域形成，及经过血流在其它位点增生的相关问题。相反地， 本专利技术含有纤维蛋白的半固体成骨细胞治疗剂由成骨细胞和纤维蛋白的混合 物组成，因此可以快速有效地治疗较大范围的骨折和严重的骨疾病。具报道，纤维蛋白胶在动物模型中可以促进新血管形成(Schlag G. Clinical Orthopedics, 1988)，可有效提高在骨替换中用于移植方法的移植材料的适应 性，例如去除矿物质的骨粉末、生物活性玻璃、羟磷灰石及珊瑚颗粒，用于 移植手术的材料。另外，纤维蛋白胶是一种用于骨基质的有效生物活性剂运载工具。上述 举例的生物活性剂可以由TGF-卩-1 (Transforming growth factor-beta-1)和 TGF-(3-related BMP (Transforming growth factor-beta related Bone morphogenetic pr本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备用于骨结合的含有纤维蛋白的半固体成骨细胞成分的方法，其特征在于，包括：　　　　从骨组织中分离成骨细胞，在ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　　Ｅａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ）或者α－ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ　　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　　Ｍｅｄｉｕｍ，Ａｌｐｈａ　　Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）中培育／增生分离的成骨细胞，制备成骨细胞悬浮液；及　　　　将成骨细胞悬浮液与凝固因子混合，制备成骨细胞治疗剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴炫信，张在德，张晶皓，郑修真，李玺邦，高畅权，
申请(专利权)人：世源世龙股份有限公司，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]