一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法技术

本发明专利技术提供一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法，由灯盏花素前体脂质体的制备、凝胶柱色谱或者离心分离其前体脂质体、高效液相色谱法检测其包封率各步骤组成，属药品技术领域。其前体脂质体含灯盏花素５－１０份，大豆磷脂１０－４０份，维生素Ｅ　０．５－２份，甘露醇或乳糖２０－８０份；凝胶柱色谱分离需脂质体混悬液０．５ｍｌ，离心分离需脂质体混悬液５ｍＬ，离心３０ｍｉｎ，转速１８０００ｒ／ｍｉｎ；检测包封率以甲醇－乙腈－４０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］（２０∶１０∶７０）为流动相；检测波长为３３５ｎｍ；理论板数按野黄芩苷计算不低于４０００。该方法大大节约了成本和节省了检测时间，操作简便，检测准确度和精确度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药品
，具体涉及灯盏花素前体脂质体的质量控制方法。
技术介绍
随着脂质体和前体脂质体在药剂学中的应用，脂质体和前体脂质体作为药物载体的研 究己成为热点，甜体脂质体克服了脂质体的稳定性较差、聚集、沉降、融合渗漏等缺陷， 因而甜体脂质体作为药物载体更受医药界的重视。包封率是脂质体制剂(包括前提脂质体) 的重要质量控制指标之一。脂质体包封率的测定方法较多，有透析法、大孔吸附树脂分离 法、鱼精蛋白沉淀法等，但这些包封率的测定方法存在需要的脂质体量大、耗时较长、分 离不完全等缺点。而本专利技术采用凝胶柱色谱法或离心法分离灯盏花素前体脂质体与游离药 物，操作简便易掌握，检测准确度和精确度高，增强了灯盏花素前体脂质体的可控性，建 立了灯盏花素前体脂质体包封率的分析方法。灯盏花素(6rew'sca贝'/7e)是从菊科飞蓬属植物短葶巨蓬(Kr&er朋 Z reKJ'scsp"s(Y朋t. y> #a/7f/-#朋》中提取的，以灯盏乙素(sci/z^Waw'/7)为主并含少量灯盏 甲素(spj>e/7&-7-0-^"c"r朋We)及其它黄酮类成分的混合物。灯盏花素的药品在治疗脑 梗塞、脑血栓形成、冠心病、心绞痛等心脑血管疾病的上有显著疗效。为提高灯盏花素的 生物利用度，对灯盏花素前体脂质体的研究已有一些报道。灯盏花素前体脂质体的制备方 法较多，但通常是将灯盏花素先制备成脂质体，再进行特殊处理而制成，如冻融法、重建 法、喷雾法、喷雾干燥法、旋转蒸发法。为了更好地控制灯盏花素前体脂质体的质量，本申请人(云南植物药业有限公司)针 对本公司生产的灯盏花素前体脂质体药品进行了质量控制方面的系统研究，其中包封率是 评价甜体脂质体内在质量(包括脂质体质量)的重要指标和发挥疗效的关键，在此关键技 术指标的质量控制方面，本申请人采用凝胶柱色谱法结合高效液相色谱法(HPLC法)或者 采用离心法结合高效液相色谱法(HPLC法)对药物进行分离及检测，建立了对灯盏花素前 体脂质体包封率的检测技术条件，研究出一套高质量和行之有效的灯盏花素前体脂质体的 质量控制方法，保证了本公司生产的灯盏花素前体脂质体药品的质量，也为灯盏花素前体 脂质体的质量控制提供了科学技术手段。
技术实现思路
本专利技术的目的针对包封率是评价灯盏花素前体脂质体药品的关键技术指标问题和克服 现有技术中存在包封率的测定需要的脂质体量大、耗时较长、分离不完全的缺陷，在包封率的检测方法上做了改进，提供一种高质量和行之有效的灯盏花素前体脂质体的质量控制 方法，增强灯盏花素前体脂质体的质量可控性，保证本公司生产的灯盏花素前体脂质体药 品的质量。本专利技术与现有技术相比的有益效果是-1、 本专利技术采用凝胶柱色谱法或离心法分离灯盏花素前体脂质体与游离药物，水化后的脂质体样品不用稀释即可进行分离，可降低稀释所带来的药物渗漏，分离时，凝胶柱色谱 法分离只需脂质体0. 5ml ，分离时间需2h，离心法分离只需脂质体5ml，分离时间需2h, 而透析法进行分离，需要的脂质体量大(50ml)，分离时间较长需8h，(赵远党，章一新， 钱云良等5-FU变形脂质体工艺的改进及其体外透瘢痕的实验研究.中国美容整形外科 杂志，2008， 4， 19(2) :96-99.)，因此本专利技术大大节约了成本，节省了检测时间。2、 本专利技术操作简便易掌握、快速、重现性好、检测准确度和精确度高，增强了灯盏花 素前体脂质体的可控性，更好地确保了灯盏花素前体脂质体的制剂合格。本专利技术方法的技术方案是由灯盏花素前体脂质体的制备、凝胶柱色谱分离灯盏花素 前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体、高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体 的包封率三个歩骤组成，按以下步骤进行1、 灯盏花素前体脂质体的制备按重量份数，精密称取灯盏花素5-10份，大豆磷脂10-40份，维生素E0.5-2份，甘 露醇或乳糖20-80份；将大豆磷脂、维生素E溶于无水乙醇50-2000mL中，将其注入至已 配好的灯盏花素水溶液0. 5-5L中，并用0. lmol/L的NaOH调PH6. 8使其溶解，搅拌30min， 同时减压至真空压为0.06kPa除去乙醇，之后加入甘露醇或乳糖搅拌溶解，即得灯盏花素 脂质体混悬液。将此混悬液按喷干条件为进口温度120。C，流速2.0ml ，min—、雾化压力 180 kPa进行喷干，即得干燥、流动性好的灯盏花素前体脂质体(粉末状态)。2、 凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体(粉末状态 是前体脂质体，水化后的混悬液即变成脂质体)采用凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体精密量取步骤1所制备的灯盏花素前体脂质体粉末加纯化水水化配制成10mg/ml的脂 质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液0. 5ral滴加在交联葡聚糖G50凝胶柱上，然后用PH6. 8 的磷酸盐缓冲液(PBS液)以lml/min的流速洗脱，连续收集80ml。将洗脱液在80。C的低 温蒸干，加甲醇lml使其溶解并转移至容量瓶中，用甲醇稀释IOO倍即得供试品溶液A,; 另^^精密量取上述脂质体混悬液0. 5ml用甲醇稀释1000倍即得供试品溶液A2。所得供试品5溶液A,和供试品溶液A2备用待检测(供试品溶液A,用于检测洗脱液中灯盏花素含量，即用于检测灯盏花素前体脂质体中包封的灯盏花素药物含量；供试品溶液&用于检测灯盏花素 前体脂质体中灯盏花素药物总含量)。 '或者采用离心分离灯盏花素甜体脂质体精密量取歩骤1所制备的灯盏花素前体脂质体粉末加纯化水水化配制成10mg/ml的脂 质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液5mL，离心30min，转速18000r/min，共离心3次， 每次间隔30min，取上清液，将沉淀脂质体用蒸馏水洗3次，每次4ml，其洗液与上清液 合并，将合并后的上清液在8(TC的低温蒸干，分别加甲醇lml使其溶解并转移至容量瓶中 用甲醇稀释100倍即得供试品溶液K:。另外精密量取上述脂质体混悬液0. 5ml用甲醇稀释 1000倍即得供试品溶液K2。所得供试品溶液K,和供试品溶液K2备用待检测(供试品溶液 Id用于检测上清液中的灯盏花素含量，即用于检测灯盏花素前体脂质体中未包封的灯盏花 素含量；供试品溶液K2用于检测母液中的灯盏花素含量，即检测灯盏花素甜体脂质体中灯 盏花素药物总含量)。3、高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体的包封率(1) 对照品溶液的配制精密称取纯度为99%以上的野黄芩苷(灯盏乙素)25mg，置 25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成含1000ug/ml的贮备液。精密吸取该贮备液0. 5ml， 置25ml容量瓶中，流动相为甲醇-乙腈-40mmol/L 10^04(磷酸调ffl2. 5)且其体积比为20:10: 70，加该流动相至刻度，摇匀，制成每lml含20txg的溶液，即得。(2) 色谱条件和系统适用性试验色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18 4.6rnmX250 mm，5^m;以甲醇-乙腈-40mmol/L KH2P04(磷酸调ra2.5) (20: 10: 70)为流动相；检测波长为 335nm;流速1. Oml/min;柱温35。C。理论板数按野黄芩苷计算不低于400本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灯盏花素前体脂质体的质量控制方法，由灯盏花素前体脂质体的制备、凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体、高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体的包封率三个步骤组成，其特征在于，按以下步骤进行：　（１）灯盏花素前 体脂质体的制备　按重量份数，精密称取灯盏花素５－１０份，大豆磷脂１０－４０份，维生素Ｅ　０．５－２份，甘露醇或乳糖２０－８０份；将大豆磷脂、维生素Ｅ溶于无水乙醇５０－２０００ｍＬ中，将其注入至已配好的灯盏花素水溶液０．５－５Ｌ中，并用 ０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调ＰＨ６．８使其溶解，搅拌３０ｍｉｎ，同时减压至真空压为０．０６ｋＰａ除去乙醇，之后加入甘露醇或乳糖搅拌溶解，即得灯盏花素脂质体混悬液；将此混悬液按喷干条件为：进口温度１２０℃，流速２．０ｍｌ.ｍｉｎ－１，雾化压力１８０ｋＰａ进行喷干，即得干燥、流动性好的灯盏花素前体脂质体；　（２）凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体或者离心分离灯盏花素前体脂质体　采用凝胶柱色谱分离灯盏花素前体脂质体，即精密量取步骤１所制备的灯盏花素前体脂质体粉末加纯化水水 化配制成１０ｍｇ／ｍｌ的脂质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液０．５ｍｌ滴加在交联葡聚糖Ｇ５０凝胶柱上，然后用ＰＨ６．８的磷酸盐缓冲液以１ｍｌ／ｍｉｎ的流速洗脱，连续收集８０ｍｌ；将洗脱液在８０℃的低温蒸干，加甲醇１ｍｌ使其溶解并转移至容量瓶中，用甲醇稀释１００倍即得供试品溶液Ａ１；另外精密量取上述脂质体混悬液０．５ｍｌ用甲醇稀释１０００倍即得供试品溶液Ａ２；所得供试品溶液Ａ１和供试品溶液Ａ２备用待检测；　或者采用离心分离灯盏花素前体脂质体，即精密量取步骤１所制备的灯盏花 素前体脂质体粉末加纯化水水化配制成１０ｍｇ／ｍｌ的脂质体混悬液，精密量取此脂质体混悬液５ｍＬ，离心３０ｍｉｎ，转速１８０００ｒ／ｍｉｎ，共离心３次，每次间隔３０ｍｉｎ，取上清液，将沉淀脂质体用蒸馏水洗３次，每次４ｍｌ，其洗液与上清液合并，将合并后的上清液在８０℃的低温蒸干，分别加甲醇１ｍｌ使其溶解并转移至容量瓶中用甲醇稀释１００倍即得供试品溶液Ｋ１；另外精密量取上述脂质体混悬液０．５ｍｌ用甲醇稀释１０００倍即得供试品溶液Ｋ２；所得供试品溶液Ｋ１和供试品溶液Ｋ２备用待检测；　 　（３）高效液相色谱法检测灯盏花素前体脂质体的包封率　①对照品溶液的配制，精密称取纯度为９９％以上的野黄芩苷２５ｍｇ，置２５ｍＬ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周敏，李文，黄春球，吕小波，
申请(专利权)人：云南植物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]