一种透明质酸的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种从透明质酸发酵液中分离提取透明质酸的方法，包括如下步骤：先将透明质酸发酵液调ｐＨ为４．０～６．０，再加入絮凝剂絮凝后，经过滤得透明质酸清液；然后将透明质酸清液经脱色、调ｐＨ６．０～６．５，再经乙醇沉淀；然后将乙醇沉淀物溶解后，再经络合剂进行络合沉淀，沉淀物用盐解离，过滤，滤液再经乙醇沉淀，最后沉淀物经脱水、干燥得到合格的透明质酸产品。该方法提取透明质酸的优点在于：提取收率高，产品纯度高，工艺简单操作简便，劳动强度小，对环境的污染小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从透明质酸发酵液中分离提取透明质酸的方法。
技术介绍
透明质酸(Hyaluronic Acid， HA)又名玻尿酸，是一种酸性粘多糖，以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，它具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子。它可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂，与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。 近年来，透明质酸在各个领域应用日益广泛，如化妆品和保健食品、关节疾病治疗、给药体系中的应用、眼科治疗中的应用等。 目前从透明质酸发酵液中提取透明质酸的方法主要是酒精沉淀法，只是后续处理 有所差异。比如，先将透明质酸发酵液由乙醇分离得到透明质酸提取物，然后向提取物中加 入由4.2g/L碳酸氢钠和5.3g/L碳酸钠以体积比为45 : 5组成的水溶液及胰蛋白酶进行 水解。水解后所得分离物在磷酸二氢钠含量为0. 45g/L，磷酸氢二钠含量为0. 05g/L及氯 化钠含量为11. 6g/L的水溶液中溶解，向其中加入3倍体积的95%乙醇，得到沉淀，绝干的 沉淀物中透明质酸质量比为98.9%。随后，经活性炭以及透析处理。最终透明质酸质量比 为99. 996%，相对分子量58万Da。但该法得到的透明质酸产品相对分子量小，操作繁琐， 且成本较高，不利于工业化生产。 和其他生物工程产品一样，透明质酸工业生产也常常会受到生产成本的制约，而 在生产成本的构成中，分离提取等下游工程的成本占有相当的比例。因此，研究透明质酸的 提取方法具有重要的理论意义和实用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从透明质酸发酵液中分离提取透明质酸的方法，该方法 具有提取收率高，产品纯度高，对环境的污染小等优点。 为了实现本专利技术目的，本专利技术的，包括如下步骤 1)先将透明质酸发酵液调pH为4. 0 6. O，再加入絮凝剂絮凝后，经过滤得透明 质酸清液； 2)然后将透明质酸清液经脱色、调p朋.0 6. 5，再经乙醇沉淀； 3)将乙醇沉淀物溶解后，再加络合剂进行络合沉淀，沉淀物用盐解离，过滤，滤液再经乙醇沉淀，最后沉淀物经脱水、干燥。 其中，所述透明质酸发酵液来自链球菌有氧发酵生产的发酵液，到发酵末期直接 放罐进行下游提取。 步骤l)中调pH多采用三氯乙酸。三氯乙酸在pH4.0 6.0的情况下可使蛋白质3变性，从而达到灭活透明质酸酶的作用，防止透明质酸分子量损失。 所述絮凝剂为聚丙烯酰胺，选用的絮凝剂型号为A856或A656。其添加量为10 30卯m/L，絮凝温度为50 90。C，絮凝时间为30 60min。 所述过滤采用板框过滤方式。也可用真空抽滤的过滤方式，但由于透明质酸发酵 液较粘稠，真空抽滤太慢， 一般不予采用。 步骤2)中所述脱色采用活性炭进行脱色，一般添加量为5 8g/L，脱色温度为 60 80。C，脱色时间为30 60min。 步骤2)中采用氢氧化钠调p朋.0 6. 5，氢氧化钠溶液浓度为1. 25 2. 5mol/L。 乙醇沉淀采用95%乙醇，其用量为被处理液体积的2 4倍。 步骤3)中乙醇沉淀物采用盐溶液溶解，比如O. lmol/L氯化钠溶液，其用量为发酵液等体积。 所述络合剂为氯代十六烷基吡啶(CPC)水溶液，其中，CPC水溶液浓度为5 15g/ L。 所述沉淀物用盐解离时，先需要采用0. lmol/L氯化钠溶液洗涤2 3次，然后再 与发酵液等体积的0. 5mol/L氯化钠溶液中搅拌解离15 20小时。 盐解离后采用真空抽滤方式进行过滤。 过滤后采用滤液3 4倍体积的乙醇沉淀2 4小时，所述乙醇采用95 %的乙醇。 所述脱水采用无水乙醇脱水。 所述干燥采用真空干燥，干燥温度为40 60°C，干燥时间2 4小时。 本专利技术从透明质酸发酵液中提取透明质酸的方法，其优点在于1)提取收率高， 达到75 85% ;2)产品质量好，蛋白含量为0. 5 1%，分子量为100 130万Da;3)选 用试剂来源广泛，价格低廉，4)对环境的污染小。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。 实施例1 30L 3.99g/L链球菌有氧发酵生产的透明质酸发酵液(注以下实施例中均为 链球菌有氧发酵生产的透明质酸发酵液)，用三氯乙酸调pH至4. 62，加热至7(TC后添加 300ml 10ppm/L絮凝剂聚丙烯酰胺A856，保温30min后真空抽滤，得到29L清液，清液加热 至8(TC后添加150g白云山粉末活性炭缓慢搅拌脱色30min，脱色液29L，用2. 5mol/L氢氧 化钠溶液调pH至6. 5，加87L 95%乙醇沉淀，沉淀用30L0. lmol/L氯化钠溶液溶解，在搅拌 下加入10g/L CPC水溶液络合，静置1小时后母液上排，沉淀再用0. lmol/L氯化钠溶液洗 涤3次后，置于30L 0. 5mol/L氯化钠溶液中搅拌解离16小时，真空抽滤，滤液加90L95%乙 醇沉淀3小时，用无水乙醇脱水后，于旋转式真空干燥器中，在干燥温度为6(TC下，真空干 燥3小时，得到102g透明质酸产品，收率为85. 2% 。 实施例2 20L 3.97g/L透明质酸发酵液用三氯乙酸调pH至4. 58，加热至8(TC后添加 200mll0ppm/L絮凝剂聚丙烯酰胺A856，保温30min后真空抽滤，得到19L清液，清液加热至 8(TC后添加120g白云山粉末活性炭缓慢搅拌脱色40min，脱色液20L，用1. 25mol/L氢氧化4钠溶液调pH至6. 45，加60L 95%乙醇沉淀，沉淀用20L 0. lmol/L氯化钠溶液溶解，在搅拌 下加入10g/L CPC水溶液络合，静置1小时后母液上排，沉淀再用0. lmol/L氯化钠溶液洗 涤2次后，置于20L 0. 5mol/L氯化钠溶液中搅拌解离15小时，真空抽滤，滤液加60L 95% 乙醇沉淀2小时，用无水乙醇脱水后，于旋转式真空干燥器中，在干燥温度为5(TC下，真空 干燥4小时，得到66. 4g透明质酸产品，收率为83. 6% 。 实施例3 20L 4.1g/L透明质酸发酵液用三氯乙酸调pH至4.60，加热至70。C后添加 200mll0ppm/L絮凝剂聚丙烯酰胺A656，保温60min后真空抽滤，得到20L清液，清液加热至 8(TC后添加160g白云山粉末活性炭缓慢搅拌脱色50min，脱色液20L，用氢氧化钠溶液调pH 至6. 32，加60L95%乙醇沉淀，沉淀用20L 0. lmol/L氯化钠溶液溶解，在搅拌下加入10g/ LCPC水溶液络合，静置1. 5小时后母液上排，沉淀再用0. lmol/L氯化钠溶液洗涤3次后， 置于20L 0. 5mol/L氯化钠溶液中搅拌解离20小时，真空抽滤，滤液加60L 95%乙醇沉淀4 小时，用无水乙醇脱水后，于旋转式真空干燥器中，在干燥温度为4(TC下，真空干燥4小时， 得到71. 2g透明质酸产品，收率为86. 8% 。 实施例4 30L 4. Og/L透明质酸发酵液用三氯乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种透明质酸的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：　　１）先将透明质酸发酵液调ｐＨ为４．０～６．０，再加入絮凝剂絮凝后，经过滤得透明质酸清液；　　２）然后将透明质酸清液经脱色、调ｐＨ６．０～６．５，再经乙醇沉淀；　　３）将乙醇沉淀物溶解后，再加络合剂进行络合沉淀，沉淀物用盐解离，过滤，滤液再经乙醇沉淀，最后沉淀物经脱水、干燥。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣杰，尚海涛，崔刚，潘声龙，
申请(专利权)人：安徽丰原发酵技术工程研究有限公司，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]