液体酶制剂制造技术

本发明专利技术提供一种活性稳定性优异的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂。一种液体酶制剂，包含蛋白质脱酰胺酶和30w/v％以上的山梨醇，pH为5.5以上，该液体酶制剂能够提高蛋白质脱酰胺酶活性的稳定性。酶活性的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】液体酶制剂


[0001]本专利技术涉及一种液体酶制剂。更具体而言，本专利技术涉及活性稳定性优异的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂。

技术介绍

[0002]作为对蛋白质中的谷氨酰胺残基和天冬酰胺残基的γ
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酰胺基和β
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酰胺基进行脱酰胺的酶，如专利文献1等中记载的那样，已知有来源于粘金黄杆菌(Chryseobacterium gleum)JCM2410株的蛋白质谷氨酰胺酶和来源于解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)9670株的蛋白质谷氨酰胺酶。这样的蛋白质脱酰胺酶的酶制剂制品目前仅以粉末形态市售。
[0003]关于酶制剂，一般而言，如果考虑到除尘和处理这一点，则与粉末形态相比，优选为液体形态。因此，对各种酶研究将酶制剂以液态形态制剂化的技术。例如，专利文献2中提出了一种液体酶制剂，其特征在于，在多元醇
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水悬浊液中包含至少1种乳蛋白交联和/或修饰酶，所述多元醇
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水悬浊液包含25％～100％(w/w)的多元醇，具有4.4～5.1范围内的pH值。具体而言，在专利文献2中，发现在pH5.2中的转谷氨酰胺酶的稳定性低，基于该见解，公开了pH4.4～4.8的甘油
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水悬浊液中的转谷氨酰胺酶制剂、pH4.6的山梨醇
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水悬浊液中的转谷氨酰胺酶制剂的稳定性提高，与此同时，还公开了pH4.6的甘油
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水悬浊液中的谷氨酰胺酶制剂和pH4.6的甘油
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水悬浊液中的蛋白质谷氨酰胺酶制剂。现有技术文献专利文献
[0004]专利文献1：国际公开第2010/029685号专利文献2：国际公开第2013/064736号

技术实现思路

专利技术所要解决的技术问题
[0005]专利文献2中，对于转谷氨酰胺酶制剂的液体酶制剂研究了稳定性，另一方面，对于蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂，仅公开了制剂处方，对于该酶的稳定性没有进行充分的研究。
[0006]因此，本专利技术的目的在于提供一种活性稳定性优异的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂。用于解决技术问题的技术方案
[0007]本专利技术人进行了深入研究，结果发现，通过调整为pH5.5以上且配合30w/v％以上的山梨醇的新的配方，蛋白质脱酰胺酶的活性稳定性提高。本专利技术是基于该见解而完成的。本专利技术包括以下揭示的专利技术。
[0008]项1.一种液体酶制剂，其包含蛋白质脱酰胺酶和30w/v％以上的山梨醇，pH为5.5以上。
项2.根据项1所述的液体酶制剂，其中，所述山梨醇的含量为65w/v％以下。项3.根据项1或2所述的液体酶制剂，其中，所述液体酶制剂的pH为8.2以下。项4.根据项1～3中任一项所述的液体酶制剂，其中，所述液体酶制剂还包含亚硫酸盐、硫代硫酸盐和/或焦硫酸盐。项5.根据项1～4中任一项所述的液体酶制剂，其中，蛋白质脱酰胺酶活性为0.1～10000U/ml。项6.根据项1～5中任一项所述的液体酶制剂，其中，所述蛋白质脱酰胺酶来源于解朊金黄杆菌。项7.一种蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂的酶活性稳定剂，其包含山梨醇作为有效成分，在pH5.5以上的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂中以30w/v％以上的浓度使用。项8.根据项7所述的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂的酶活性稳定剂，其中，还包含亚硫酸盐、硫代硫酸盐和/或焦硫酸盐。项9.一种蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂的沉淀抑制剂，其包含山梨醇作为有效成分，在pH5.5以上的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂中以30w/v％以上的浓度使用。专利技术效果
[0009]根据本专利技术，提供一种活性稳定性优异的蛋白质脱酰胺酶的液体酶制剂。
附图说明
[0010]图1是试验例2中得到的蛋白质脱酰胺酶(蛋白质谷氨酰胺酶：PG)的液体酶制剂的活性稳定性的试验结果。
具体实施方式
[0011][1.液体酶制剂]本专利技术的液体酶制剂的特征在于，包含蛋白质脱酰胺酶和30w/v％以上的山梨醇，pH为5.5以上。以下，对本专利技术的液体酶制剂进行详细说明。
[0012][1
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1.蛋白质脱酰胺酶]蛋白质脱酰胺酶是显示不伴有肽键切断和蛋白质交联的分解蛋白质的含酰胺基的侧链的作用的酶，其种类和来源等没有特别限定。另外，只要上述作用为主要活性，也可以进一步具有伴随有肽键切断和蛋白质交联的分解蛋白质的含酰胺基的侧链的作用。作为蛋白质脱酰胺酶的例子，可举出将蛋白质中的谷氨酰胺残基进行脱酰胺化，转化为谷氨酸的酶(例如蛋白质谷氨酰胺酶)、以及将蛋白质中的天冬酰胺残基进行脱酰胺化，转化为天冬氨酸的酶(例如蛋白质天冬酰胺酶)。作为蛋白质脱酰胺酶的更具体的例子，可举出JP2000
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50887A、JP2001
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218590A、WO2006/075772A1中公开的来源于金黄杆菌(Chryseobacterium)属、黄杆菌(Flavobacterium)属、稳杆菌(Empedobacter)属、鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium)属、金杆菌属(Aureobacterium)属或类香味菌(Myroides)属的蛋白质脱酰胺酶，WO2015/133590中公开的来源于Luteimicrobium属、壤霉菌(Agromyces)属、微杆菌(Microbacterium)属、或赖氏菌(Leifsonia)属的蛋白质脱酰胺酶、以及来源于金黄杆菌属的蛋白质谷氨酰胺酶的市售品。作为这些蛋白质脱酰胺酶，可以单独使用1种，也可以组合使用多种。
[0013]在这些蛋白质脱酰胺酶中，从制成活性稳定性更优异的液体酶制剂的观点出发，优选举出来源于金黄杆菌属的蛋白质脱酰胺酶，更优选举出来源于金黄杆菌属的蛋白质谷氨酰胺酶，进一步优选举出来源于解朊金黄杆菌属的蛋白质谷氨酰胺酶。
[0014]蛋白质脱酰胺酶可由成为上述蛋白质脱酰胺酶的来源的微生物的培养液制备。作为具体的制备方法，可举出从上述微生物的培养液或菌体回收蛋白质脱酰胺酶的方法。例如，在使用蛋白质脱酰胺酶分泌型微生物的情况下，可根据需要预先通过过滤、离心处理等从培养液中回收菌体后，对酶进行分离和/或纯化。另外，在使用蛋白质脱酰胺酶非分泌型微生物的情况下，可根据需要预先从培养液回收菌体后，通过加压处理、超声波处理等破碎菌体而使酶露出后，对酶进行分离和/或纯化。作为酶的分离和/或纯化方法，可没有特别限制地使用公知的蛋白质分离和/或纯化方法，例如可举出离心分离法、UF浓缩法、盐析法、使用离子交换树脂等的各种色谱法等。
[0015]作为本专利技术的液体酶制剂中的蛋白质脱酰胺酶的含量，没有特别限定，例如可举出0.1～10000U/mL、1～5000U/mL、10～2500U/ml、50～1000U/ml，优选为100～800U/ml，更优选为150～700U/ml，进一步优选为250～600U/ml、250～500U/ml，更进一步优选为300～400U/ml。
[0016]关于蛋白质脱酰胺酶的活性，将苄氧羰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种液体酶制剂，其特征在于，包含蛋白质脱酰胺酶和30w/v％以上的山梨醇，pH为5.5以上。2.根据权利要求1所述的液体酶制剂，其中，所述山梨醇的含量为65w/v％以下。3.根据权利要求1或2所述的液体酶制剂，其中，所述液体酶制剂的pH为8.2以下。4.根据权利要求1～3中任一项所述的液体酶制剂，其中，所述液体酶制剂还包含亚硫酸盐、硫代硫酸盐和/或焦硫酸盐。5.根据权利要求1～4中任一项所述的液体酶制剂，其中，蛋白质脱酰胺酶活性为0.1～10000U/ml。6.根据权利要求1～5中任一项所述的液体酶制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：乘船沙纪，田中裕介，
申请(专利权)人：天野酶制品株式会社，
类型：发明
国别省市：