含HSP70启动子和GFP的四膜虫转基因载体及制备方法和应用技术

技术编号：3827637 阅读：478 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种含ＨＳＰ７０启动子和ＧＦＰ的四膜虫转基因载体及制备方法和应用。利用质粒ｒＤＮＡ－ＧＦＰ，通过酶切和ＰＣＲ酶切位点突变等方法，构建质粒Ｔ－ＧＦＰ；利用嗜热四膜虫基因组ＤＮＡ，通过ＰＣＲ扩增和克隆等方法，构建质粒Ｔ－ＨＳＰ７０２；利用质粒Ｔ－ＧＦＰ、Ｔ－ＨＳＰ７０２和ｐＤ５Ｈ８，通过酶切和连接最终构建得到质粒ＨＳＰ７０２－ＧＦＰ－ｐＤ５Ｈ８。该载体含有ＨＳＰ７０２启动子，能实现外源基因高效表达；该载体上含有可替换的外源基因ｇｆｐ，通过替换不同的外源基因，以实现四膜虫成为一个外源基因表达系统；在巴龙霉素药物筛选作用下，该载体替换掉四膜虫体内原有的绝大部分ｒＤＮＡ，使外源基因在四膜虫体内大量倍增，以实现目标基因的遗传转化。本发明专利技术方法易行，操作方便，该载体在转染进四膜虫中可用于环境中三丁基锡的检测。