基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法及应用。该方法利用TALENs系统特异性切割斑马鱼的cyp17a1，阻断斑马鱼的性类固醇激素合成通路，获得有效突变的F1代cyp17a1杂合子鱼，并进行自交，通过酶切鉴定筛选出F2代cyp17a1缺失纯合子鱼，其Vtgs显著下调表达，可作为通过检测Vtgs的表达来评估环境雌激素的敏感型生物传感器。通过对本发明专利技术提供的cyp17a1缺失纯合子斑马鱼进行雌激素类化学物质和非雌激素化学物质药浴实验，证明其对雌激素类化合物具有高敏感性、高反应力，能有效反映环境雌激素是否存在。本发明专利技术提供的方法应用性强，在环境科学领域的应用中有广泛的扩展性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程与环境科学，尤其涉及一种基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器及其制备方法与应用。

技术介绍

1、环境雌激素(environmentalestrogens，ees)是一种具备干扰内分泌系统，继而破坏维持机体稳定性和调控功能的化合物。ees是一类典型的具有雌激素活性的内分泌干扰物(eds)，分为天然的(雌二醇(e2)、雌酮(e1)、雌三醇(e3)等)、合成的(双酚a(bpa)、17α-乙烯雌二醇(ee2)、己烯雌酚(des)、双酚s(bps)等)和其他。ees广泛存在于自然界中并对生物体生殖及消化系统造成严重危害，导致内分泌失调、新陈代谢紊乱、生殖系统损伤、癌症等。随着世界范围内环境的恶化，ees变得更加普遍，它们对物种的内分泌系统造成了越来越大的伤害，引起人们广泛关注。

2、目前，ees检测技术主要包括传统的检测方法，如色谱法、光学法和电化学检测法，以及快速检测方法，如胶体金免疫法、抗体检测法、核酸诱导剂法。但这些方法操作复杂，灵敏度较低，如何更加简便高效地对环境雌激素进行检测已成为当前的研究重点。</p>

3、由于本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：采用基因编辑技术敲除斑马鱼的性类固醇激素合成通路的催化酶编码基因，获得肝脏卵黄原蛋白显著下调的雄鱼，实现环境雌激素敏感型生物传感器的制备。

2.根据权利要求1所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：在步骤S1中，所述基因编辑技术为采用TALENs系统特异性切割斑马鱼的cyp17a1基因，具体包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的基于基因编辑的环境雌...

【技术特征摘要】

1.一种基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：采用基因编辑技术敲除斑马鱼的性类固醇激素合成通路的催化酶编码基因，获得肝脏卵黄原蛋白显著下调的雄鱼，实现环境雌激素敏感型生物传感器的制备。

2.根据权利要求1所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：在步骤s1中，所述基因编辑技术为采用talens系统特异性切割斑马鱼的cyp17a1基因，具体包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：所述斑马鱼的cyp17a1基因编辑靶位点位于cyp17a1基因第一个外显子上，以所述第一个外显子上靠近起始密码子的一个18bp dna序列为中间序列；所述左臂的基因序列为ctttcaggacctgcagaaga，所述右臂的基因序列为gtgggagcccatcatgaggg，所述中间序列的基因序列为aatacggagatctgtatt。

5.根据权利要求2所述的基于基因编辑的环境雌激素敏感型生物传感器的制备方法，其特征在于：在步骤s2中，获得有效突变的f1代cyp17a1杂合子斑马鱼的过程为：对f1代基因组进行目的检测片段扩增和测序，检测f1代突变情况，筛选出有效突变的f1代cyp17a1杂合子斑马鱼；进行所述目的检测片段扩增和测序的引物中，正向引物的序列为gcagtgctgttcagaagagct，反向引物的序列为ggcagttcattctgctctga。

6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷战，贾景怡，翟刚，贺江燕，舒婷婷，石生持，刘聪颖，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：