用于治疗病毒性疾病的含有核苷的siRNA制造技术

提供含有一种或多种抗病毒的核苷类似物的寡核苷酸，包括siRNA双链体分子。类似物可位于寡核苷酸序列内，或可以附加到该寡核苷酸的一个或多个末端。提供了含有该寡核苷酸的药物组合物，以及使用该组合物治疗病毒感染的方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗病毒性疾病的含有核苷的siRNA
[0001]优先权
[0002]本申请要求于2020年10月2日提交的美国临时申请63/087,165的优先权，其全部内容通过引用并入本文。


[0003]提供用于抑制病毒感染相关的感兴趣基因表达的分子、药物组合物以及制造和使用方法。

技术介绍

[0004]已经开发出针对多种病毒性疾病的抗病毒的核苷和核苷酸类似物。类似物通过掺入核酸链并终止这些链的合成来发挥其抗病毒作用。
[0005]siRNA是由有义链和互补反义链组成的双链RNA分子。这些分子可以是每条链都是19
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29个碱基长的平末端分子，或者这些分子可以表现出两个碱基突出(通常为dTdT)。每条siRNA链通常通过固相合成制备：将期望序列中的连续碱基偶联至前一个与正在延长的寡核苷酸相连的碱基。当合成完成后，两条链彼此退火以形成双链体。酰胺化学或其他合成方法在本领域中是众所周知的，商业服务提供合成的siRNA合成。
[0006]例如，已显示针对癌细胞内选定靶标的siRNA，降低了由被沉默的基因靶标编码的蛋白质的表达。因此，沉默这些基因可以抑制该细胞的生长。如果细胞特别是siRNA可以接近(access)的疾病细胞(例如，被病毒感染的细胞)，那么siRNA可以作为治疗剂发挥作用。此外，在某些情况下，可以通过使用siRNA方法以沉默在选择通路中的基因来增强目前作为治疗“金标准”的选择性疗法(小分子抑制剂、单克隆抗体等)的用途。
[0007]之前已经表明，基于嘧啶的非天然核苷类似物吉西他滨(2',2'
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二氟2'
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脱氧胞苷)(“GEM”)可以取代siRNA序列中的某些碱基。GEM在全身施用时被核苷转运蛋白摄取，通过脱氧胞苷激酶进行三磷酸化而激活，之后可以掺入RNA或DNA中。其在DNA复制(细胞分裂)过程中取代核酸胞苷。

技术实现思路

[0008]提供在基因沉默中的分子、药物组合物和制造方法以及用途(例如，在受试者的治疗中)的公开的实施方案。该组合物包含吉西他滨和一种或多种核酸如siRNA或miRNA，封装在组氨酸
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赖氨酸共聚物中，其组合形成纳米颗粒。使用方法包括使用药物组合物治疗受试者中的各种病毒相关的感染，包括，例如HBV感染。
[0009]特别地，所提供的是包含核苷酸和一种或多种抗病毒的核苷类似物的寡核苷酸分子。核苷酸可以包含脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸。寡核苷酸有利地是siRNA双链体。
[0010]一种或多种抗病毒的核苷类似物可以连接到分子的3'或5'末端，或可以存在于分子内。核苷类似物可以选自阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛韦(Acyclovir)、阿德福韦(Adefovir)、西多福韦(Cidofovir)、克拉夫定(Clevudine)、阿糖胞苷(cytarabine)、去羟
肌苷、去羟肌苷(ddI)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩曲他滨(Emtricitabine)、恩替卡韦(Entecavir)、泛昔洛韦(Famciclovir)、加利昔韦(galidesivir)、更昔洛韦(Ganciclovir)/缬更昔洛韦(Valganciclovir)、吉西他滨、GS
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441524、碘苷、拉米夫定(lamivudine)(3TC)、莫努匹韦、瑞德西韦、利巴韦林(Ribavirin)、索非布韦(Sofosbuvir)、司他夫定(stavudine)(d4T)、替比夫定(Telbivudine)、替诺福韦(Tenofovir)、三氟尿苷(trifluridine)、伐昔洛韦(Valacyclovir)、阿糖腺苷(vidarabine)、扎西他滨(zalcitabine)(ddC)和齐多夫定(Zidovudine)。
[0011]还提供了药物组合物，其包含如上所述的寡核苷酸，任选地包含组氨酸
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赖氨酸共聚物。
[0012]进一步提供了通过向受试者施用有效量的如上所述的药物组合物，以治疗受试者中的病毒感染的方法。受试者可以是哺乳动物，如人。
附图说明
[0013]参考以下附图中所示的实施方案，更容易理解所公开的实施方案。
[0014]图1显示可以用于所公开的一些实施方案中的组氨酸
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赖氨酸共聚物的示例。
[0015]图2显示可以用于所公开的一些实施方案中的核苷类似物的示例。
[0016]图3显示可以用于所公开的一些实施方案中的前药核苷的示例。
[0017]图4显示可以用于所公开的一些实施方案中的经FDA批准或在临床试验中的羰基氧甲基核苷酸前药的示例。
[0018]图5显示了拉米夫定的HepDirect前药的合成。
具体实施方式
[0019]已经发现，抗病毒的核苷类似物可以取代靶向病毒(例如，乙肝)相关mRNA的siRNA序列中的某些核苷酸。病毒基因表达的沉默增强了从siRNA释放的核苷的活性。
[0020]当反义链(“AS”)被释放并结合到RNA诱导的沉默复合物(“RISC复合物”)以诱导基因沉默时，可以将类似物加入至，例如，siRNA的有义链(“SS”)上。抗病毒的核苷类似物也可以添加到AS链中，而不影响AS链在基因沉默中的活性。多种核苷类似物可以替换在siRNA序列中天然存在的核苷。或者，可以将类似物添加到SS和AS链的3'或5'末端，当siRNA在细胞的细胞质中加工时，类似物会从SS和AS链的3'或5'末端释放。在SS和AS上的类似物组合显示出更大的疗效。
[0021]在一些实施方案中，提供用于制备药物组合物的方法，所述药物组合物包含HKP、HKP(+H)或任何其他组氨酸
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赖氨酸共聚物和siRNA溶液，其在混合时自发地形成纳米颗粒。可以通过siRNA沉默在病毒中存在的特定基因靶标，以调节病毒性疾病。例如，针对HBV的siRNA也可以包含核苷类似物拉米夫定作为靶向HBV基因的siRNA的有义链(或AS链)结构的一部分。因此，当将siRNA施用于HBV驻留的肝脏中的肝细胞时，有义链从双链siRNA中释放出来，并被细胞的细胞质中存在的核酸酶降解。AS链参与RISC，并监视mRNA(或病毒RNA)序列，通过切割与AS链具有同一性的序列而产生沉默。
[0022]提供了在由病毒感染引起的疾病和病症中用于沉默基因的分子、组合物和方法。该组合物包含一种或多种核酸(如siRNA或miRNA)和组氨酸
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赖氨酸共聚物，其中核酸通过
存在一种或多种核苷类似物而被修饰。当使用微流体混合器混合组合物的组分时形成纳米颗粒。该方法可以用于阻断多种病毒基因的表达、抑制病毒复制，以及提供改善或根除病毒感染的方法。
[0023]定义
[0024]小干扰RNA(siRNA)：短的双链RNA的双链体寡核苷酸，其在分子被引入细胞中后干扰该细胞中基因的表达。例如，其靶向并结合单链靶标RNA分子中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种寡核苷酸分子，其包含核苷酸和一种或多种抗病毒的核苷类似物。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸分子，其中所述核苷酸包含脱氧核糖核苷酸。3.根据权利要求1所述的寡核苷酸分子，其中所述核苷酸包含核糖核苷酸。4.根据权利要求1所述的寡核苷酸分子，其中所述核苷酸包含脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸分子，其中所述一种或多种抗病毒的核苷类似物连接至所述分子的一个末端。6.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸分子，其中所述一种或多种抗病毒的核苷类似物在所述分子内。7.根据权利要求1至6中任一项所述的寡核苷酸，其中所述核苷类似物选自阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿德福韦、西多福韦、克拉夫定、阿糖胞苷、去羟肌苷、去羟肌苷(...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：圣诺制药公司，
类型：发明
国别省市：