共递送TGF-βSIRNA和PDL1SIRNA用于治疗癌症制造技术

提供包含抗TGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】共递送TGF
‑
β
SIRNA和PDL1 SIRNA用于治疗癌症
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.
§
119(e)要求2020年9月12日提交的美国临时专利申请系列第62/899,535号的优先权，其整体内容通过引用并入本文。


[0003]提供了抗TGF
‑
β的siRNA分子和抗PDL1的siRNA分子的组合物，以及使用该组合物以治疗癌症的方法。

技术介绍

[0004]癌的生长和进展涉及生物体的免疫系统的抑制。恶性细胞通过不同的机制逃避免疫监视。
[0005]在存在生长的肿瘤时，由于针对肿瘤生长的炎症反应的诱导，肿瘤部位周围的TGF
‑
β水平通常上调。升高的TGF
‑
β作为屏障防止T细胞渗透到肿瘤附近组织和进入肿瘤本身。(参见Tauriello等人，Nature 554:538
–
543(2018)；Mariathasan 等人，Nature 554:544
–
548(2018))。因此，T细胞不能被抗原性启动(prime)以识别肿瘤细胞并杀伤(kill)它们。
[0006]肿瘤细胞还激活抑制抗肿瘤免疫反应的免疫检查点通路。这种通路的一个示例是PD
‑
L1/PD1轴(axis)。PD1受体存在于T细胞的表面，PD
‑
L1蛋白存在于许多肿瘤细胞的表面。PD1与PD
‑
>L1的结合阻止了T细胞激活，从而不释放降解并杀伤肿瘤细胞的酶(颗粒酶B和其他酶)。这些酶对肿瘤细胞的消化释放出一些其他肿瘤抗原，这些抗原可以促进T细胞介导的针对肿瘤的免疫。
[0007]免疫检查点抑制剂封闭检查点通路中的靶标。(参见Darvin等人，Experimental &Molecular Medicine 50:165(2018))。例如，结合PDL1或PD1从而阻断PDL1 和PD1之间结合的抗体已证明在许多肿瘤适应症(如霍奇金淋巴瘤和黑色素瘤) 的癌症患者中结果有所改善。然而，这些抗体对肝癌产生影响的能力要低得多。
[0008]RNA干扰(RNAi)是序列特异性RNA降解方法，其提供敲除(knockdown) 或沉默任何包含同源序列的基因的途径。在天然存在的RNAi中，双链RNA (dsRNA)被RNase III/解旋酶蛋白Dicer切割成小干扰RNA(siRNA)分子，即在3
’
端具有2
‑
nt突出(overhang)的19
‑
27个核苷酸(nt)的dsRNA。然后，siRNA 整合至称为RNA诱导沉默复合物(RNA
‑
induced
‑
silencing
‑
complex，RISC)的多组分核糖核酸酶中。siRNA的一条链保持与RISC相关联以将复合物引导至同源 RNA，该同源RNA具有与RISC中的向导(guider)ss
‑
siRNA互补的序列。这种siRNA引导(direct)的核酸内切酶消化RNA，导致目标RNA被截短和失活。最近的研究揭示了采用化学合成的21
‑
27nt的siRNA在哺乳动物细胞中表现出RNAi 的效果，并证明了siRNA杂交(在末端或中间)的热力学稳定性在决定分子功能方面起着核心作用。
[0009]重要的是，目前不可能高度可信地预测在许多可能的潜在靶向基因的mRNA 序列的候选siRNA序列中，哪些实际上会表现出有效的RNAi活性。相反，必须生成个体特异性的
候选siRNA多核苷酸或寡核苷酸序列，并将其在哺乳动物细胞培养物中测试，以确定是否发生对目标基因表达的预期干扰。
[0010]提供包含针对TGFβ的siRNA分子和针对PDL1的siRNA分子的siRNA分子的组合，以及使用这些组合来降低癌细胞对人或其他哺乳动物的免疫抑制的方法。

技术实现思路

[0011]提供的是包含抗TGF
‑
β的siRNA分子和抗PDL1的siRNA分子的组合物。抗 TGF
‑
β的siRNA分子可以包含抗TGF
‑
β1的siRNA分子。一种或两种分子可以包含长度为19个碱基对至25个碱基对的寡核苷酸，以及一种或两种分子可以经化学修饰以增加其稳定性。
[0012]抗TGF
‑
β1的siRNA分子可以具有在约0.1nM至10nM之间的IC50值，和/ 或可以选自表1中限定的siRNA分子。抗TGF
‑
β1的siRNA分子可以包含25mer 的以平末端结尾的分子。抗TGF
‑
β1的siRNA分子可以与在表1中限定的siRNA 分子的前7个位置中的6个相同，并且在其余位置也至少90％或95％相同。
[0013]抗PDL1的siRNA分子可具有在约0.1nM和10nM之间的IC50值和/或可选自表2中限定的siRNA分子。抗PDL1的siRNA分子可以包含3'末端有2碱基dTdT 突出的19mer分子，或25mer的平末端分子。抗PDL1的siRNA分子与在表2中限定的siRNA分子的前7个位置中的6个可以相同，并且在其余位置也至少90％或95％相同。
[0014]抗TGF
‑
β1的siRNA分子可以包含5'r(CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU)
‑3’
，抗PDL1的siRNA分子可以包含5
’‑
CUAUUUAUUUUGAGUCUGU
‑3’ꢀ
(PDL1 siRNA有义链序列)。
[0015]还提供包含含有两种或更多种不同抗TGF
‑
β1的siRNA分子以及两种或更多种不同抗PDL1的siRNA分子的组合物。
[0016]该组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。载体可以包含可溶性递送剂或纳米颗粒形成剂，以及载体可以包含，例如，选自盐水溶液、糖溶液、聚合物、肽、多肽、脂质、乳膏、凝胶、胶束材料、二氧化硅纳米颗粒、金属纳米颗粒、质粒和病毒载体的一种或多种组分。药学上可接受的载体还可以选自：葡萄糖溶液、聚阳离子粘合剂、阳离子脂质、阳离子胶束、阳离子多肽、亲水聚合物接枝聚合物、非天然阳离子聚合物、阳离子聚缩醛、亲水聚合物接枝聚缩醛、配体官能化阳离子聚合物、配体官能化
‑
亲水聚合物接枝聚合物和配体官能化脂质体。在其他实施方案中，载体可以包含一种或多种组分，其选自可生物降解的组氨酸
‑
赖氨酸聚合物、可生物降解的聚酯(例如，聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA) 和聚(乳酸
‑
共
‑
乙醇酸)(PLGA))、聚酰胺胺(PAMAM)树枝状聚合物、阳离子脂质(例如DOTAP、DOPE、DC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含抗TGF
‑
β的siRNA分子和抗PDL1的siRNA分子。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β的siRNA分子包含抗TGF
‑
β1的siRNA分子。3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中一种或两种分子包含长度为19个碱基对至25个碱基对的寡核苷酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述siRNA分子中的一种或两种已经经化学修饰以增加其稳定性。5.根据权利要求2至4中任一项所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子的IC
50
值介于约0.1nM至10nM之间。6.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子选自在表1中限定的siRNA分子。7.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子包含25mer的平末端结尾的分子。8.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子与表1中限定的siRNA分子的前7个位置中的6个相同，并且在其余位置也至少90％相同。9.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子与表1中限定的siRNA分子的前7个位置中的6个相同，以及在其余位置也至少95％相同。10.根据权利要求2至4中任一项所述的组合物，其中所述抗PDL1的siRNA分子的IC
50
值介于约0.1nM至10nM之间。11.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述抗PDL1 1的siRNA分子选自在表2中限定的siRNA分子。12.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述抗PDL1的siRNA分子包含在3'末端有2碱基dTdT突出的19mer的分子，或25mer的平末端分子。13.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述抗PDL1的siRNA分子与表2中限定的siRNA分子的前7个位置中的6个相同，并且在其余位置也至少90％相同。14.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述抗PDL1的siRNA分子与表2中限定的siRNA分子的前7个位置中的6个相同，并且在其余位置也至少95％相同。15.根据权利要求2所述的组合物，其中所述抗TGF
‑
β1的siRNA分子包含5
’‑
r(CCCAAGGGCUACCAUGCCAACUUCU)
‑3’
，以及抗PDL1的siRNA分子包含5
’‑
CUAUUUAUUUUGAGUCUGU
‑3’
(PDL1的siRNA有义链序列)。16.一种组合物，其包含两种或更多种不同的抗TGF
‑
β1的siRNA分子以及两种或更多种不同的抗PDL1的siRNA分子。17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其还包含药学上可接受的载体。18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含可溶性递送剂或纳米颗粒形成剂。19.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含一种或多种组分，其选自盐水溶液、糖溶液、聚合物、肽、多肽、脂质、乳膏、凝胶、胶束材料、二氧化硅纳米颗粒、金属纳米颗粒、质粒和病毒载体。20.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含一种或多种组
分，其选自葡萄糖溶液、聚阳离子粘合剂、阳离子脂质、阳离子胶束、阳离子多肽、亲水聚合物接枝聚合物、非天然阳离子聚合物、阳离子聚缩醛、亲水聚合物接枝聚缩醛、配体官能化阳离子聚合物、配体官能化
‑
亲水聚合物接枝聚合物和配体官能化脂质体。21.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含一种或多种组分，其选自可生物降解的组氨酸
‑
赖氨酸聚合物、可生物降解的聚酯(例如，聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)和聚(乳酸
‑
共
‑
乙醇酸)(PLGA))、聚酰胺胺(PAMAM)树枝状聚合物、阳离子脂质(例如DOTAP、DOPE、DC
‑
Chol/DOPE、DOTMA和DOTMA/DOPE)、或聚乙二醇化的PEI。22.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含组氨酸
‑
赖氨酸共聚物(HKP)。23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述HKP包含结构(R)K(R)
‑
K(R)
‑
(R)K(X)，其中R＝KHHHKHHHKHHHKHHHK、K＝赖氨酸和H＝组氨酸。24.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含分支组氨酸
‑
赖氨酸共聚物。25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述分支组氨酸
‑
赖氨酸聚合物具有式(R)K(R)
‑
K(R)
‑
(R)K(X)，其中R＝KHHHKHHHKHHHKHHHK、R＝KHHHKHHHKHHHHKHHHK或R＝KHHHKHHHNHHHNHHHN、X＝C(O)NH2、K＝赖氨酸、H＝组氨酸和N＝天冬酰胺。26.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含含有精胺
‑
脂质偶联物(SLiC)和胆固醇的脂质体。27.根据权利要求17所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体包含肽，其具有式Kp{[(H)
n
(K)
m
]}y或Kp{[(H)
n<...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：圣诺制药公司，
类型：发明
国别省市：