siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病的药物中的应用。本发明专利技术通过使用线粒体特异性基因编码的氧化还原荧光探针，观察到线粒体在细胞恶变过程中经历了还原应激。并利用siRNA干预实验(NRF2siRNA)发现线粒体还原应激促进砷致细胞恶变过程。NRF2靶向糖代谢重组诱导(线粒体)还原应激促进砷致细胞恶变，认为线粒体氧化能力的特异性增强可能是一种未来的癌症预防和治疗策略提供基础数据。疗策略提供基础数据。疗策略提供基础数据。

【技术实现步骤摘要】
siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病的药物中的应用


[0001]本专利技术生物医药
，尤其是指一种siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病的药物中的应用。

技术介绍

[0002]砷致细胞恶变过程中的氧化应激引起了广泛关注；然而，还原应激(reductive stress)在化学致癌中的作用在很大程度上仍是未知的，虽然无机砷化合物是IARC确认的人类致癌物，但其致癌的分子机制研究长期滞后。氧化应激假说在砷致癌作用机制的众多假说中，被广泛认可和关注。最近研究表明，低剂量砷暴露(<5.0μmol/L)早期主要引起蛋白质毒性应激而非氧化应激，慢性砷暴露导致细胞恶性转化是由于适应性抗氧化反应而非氧化应激；在某些情况下，抗氧化途径的持续性激活和活性氧水平(ROS)的降低有助于慢性砷中毒发生发展。早期，大样本的流行病学调查还发现通过膳食额外补充抗氧化剂，不仅未能预防癌症反而增加其发生风险。进一步实验结果显示，抗氧化剂可以促进肿瘤发生。细胞的氧化还原调控是空间与时程依赖的精准调控，因此，对砷致癌氧化应激机制需要重新认识。
[0003]“还原应激”一词最早由Wendel于1987年在一项关于铁氧化还原循环代谢起始的研究中提出，这一概念已得到广泛发展。简而言之，它指的是电子压异常升高或等效物减少(如：GSH/GSSG、NADH/NAD
+
、NADPH/NADP
+
或半胱氨酸)，可能与抗氧化系统的广泛激活和/或氧化活性的抑制有关。许多研究表明，还原性应激是疾病的一个重要因素。例如，人类αB
‑
晶体突变导致小鼠的还原应激和蛋白质聚集相关的心肌病。此外，与野生型大鼠相比，糖尿病大鼠内质网中的蛋白质处于更为还原的状态，大鼠慢性高血糖症的发病机制涉及从还原应激向氧化应激的转变。慢性还原应激诱导的氧化应激可能与不育患者的精子功能障碍有关。载脂蛋白E(APOE)4等位基因是阿尔茨海默病(AD)的一个风险因素，而患有APOE4的个体在疾病发作之前，甚至在轻度认知损害发生之前，就表现出了还原应激。还原应激是缺氧诱导的氧化应激的关键因素，因为它增加了线粒体中NADH/NAD
+
的比率。然而，化学致癌过程中(砷致细胞恶变过程中)是否且如何发生还原应激以及还原应激在化学致癌过程中的作用仍不清楚。
[0004]不同细胞器的氧化还原状态不同，细胞质、线粒体和溶酶体处于相对还原状态，而内质网和细胞膜处于相对氧化状态。不同细胞器中不同的氧化还原变化可能对细胞恶变做出不同的贡献。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病的药物中的应用。通过使用线粒体特异性基因编码的氧化还原荧光探针，观察到线粒体在细胞恶变过程中经历了还原应激。并利用siRNA干预实验(NRF2 siRNA和G6PD siRNA)发现线粒体还原应激促进砷致细胞恶变过程。在机制上，NRF2靶向糖代谢重组
诱导(线粒体)还原应激促进砷致细胞恶变，认为线粒体氧化能力的特异性增强可能是一种未来的癌症预防和治疗策略提供基础数据。
[0006]本专利技术的第一个目的在于提供一种siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病药物中的应用，其中，所述siRNA为Nrf2 siRNA，Nrf2 siRNA选自sc
‑
37030A、sc
‑
37030B和sc
‑
37030C中的一种或多种。
[0007]其中，sc
‑
37030A:
[0008]正义链:5
′‑
GCAUGCUACGUGAUGAAGAtt
‑3′
[0009]反义链:5
′‑
UCUUCAUCACGUAGCAUGCtt
‑3′
；
[0010]sc
‑
37030B:
[0011]正义链:5
′‑
CUCCUACUGUGAUGUGAAAtt
‑3′
[0012]反义链:5
′‑
UUUCACAUCACAGUAGGAGtt
‑3′
；
[0013]sc
‑
37030C:
[0014]正义链:5
′‑
GUGUCAGUAUGUUGAAUCAtt
‑3′
[0015]反义链:5
′‑
UGAUUCAACAUACUGACACtt
‑3′
。
[0016]在本专利技术的一个实施例中，所述细胞选自HaCaT。
[0017]在本专利技术的一个实施例中，所述疾病为皮肤基底细胞癌或皮肤鳞状细胞癌。
[0018]在本专利技术的一个实施例中，所述药物至少存在以下功用之一：(1)下调Nrf2蛋白的表达；(2)下调糖代谢相关关键酶HK
‑
2、PFKFB3、PDK1、PGD和G6PD的表达；(3)上调乙酰辅酶A水平。
[0019]本专利技术的第二个目的在于提供一种重组载体，包括能够转录所述Nrf2siRNA的序列，所述序列嵌入载体。
[0020]本专利技术的第三个目的在于提供一种药物组合物，包括所述的药物或所述的重组载体。
[0021]在本专利技术的一个实施例中，还包括药学上或药理上可接受的载体。
[0022]在本专利技术的一个实施例中，所述载体选自崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂、湿润剂、矫味剂、助悬剂、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种。
[0023]本专利技术的第四个目的在于提供一种试剂盒，包括所述药物、所述重组载体、所述的药物组合物。
[0024]本专利技术的第五个目的在于提供所述的试剂盒在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病药物中的应用。
[0025]本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0026]本专利技术对T
‑
HaCaT转染Nrf2 siRNA后发现，软琼脂克隆形成能力和细胞迁移能力降低，细胞倍增时间升高，细胞恶性指标被逆转。
[0027]本专利技术对T
‑
HaCaT细胞转染Nrf2 siRNA之后发现，过氧化氢和超氧化物水平明显升高，Nrf2通过增强细胞抗氧化能力而降低细胞中活性氧的水平。Nrf2激活能够促进抗氧化，而Nrf2的持续活化能够促进癌症的发生发展。本专利技术对T
‑
HaCaT转染Nrf2 siRNA后发现，软琼脂克隆形成能力和细胞迁移能力降低，细胞倍增时间升高，细胞恶性指标被逆转，表明氧化还原敏感的核转录因子Nrf2的持续活化能够促进癌症的发生发展。随着对氧化还原敏感的核转录因子Nrf2作用的深入研究发现，Nrf2信号通路参与细胞代谢，可能是介导
癌细胞中代谢重组的关键转录因子，通过调节细胞能量代谢途径中的关键酶参与代谢重组。
[0028]本专利技术对T本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA在制备治疗由Nrf2活化导致细胞恶性转化的疾病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞选自HaCaT。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述疾病为皮肤基底细胞癌或皮肤鳞状细胞癌。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物至少存在以下功用之一：(1)下调Nrf2蛋白的表达；(2)下调糖代谢相关关键酶HK
‑
2、PFKFB3、PDK1、PGD和G6PD的表达；(3)上调乙酰辅酶A水平。5.一种重组载体，其特征在于，包括能够转录权利要求1
‑
4任一项所述siRNA的序列，所述序列嵌入载体。6.一种药物组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：安艳，杨乾磊，张晓云，严锐，孔齐，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：