miRNA-203a-3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种miRNA

【技术实现步骤摘要】
miRNA
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203a
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及miRNA
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203a
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用。

技术介绍

[0002]特发性肺纤维化(idiopathic pμLmonary fibrosis,IPF)是特发性间质性肺炎最常见的形式，是一种慢性、进行性、纤维化的肺间质性疾病。发病原因不明，大多出现于中老年人(诊断时约为55～75岁)，确诊后中位生存时间约为3年。IPF的发病率逐年升高，由于经常被误诊和接受不恰当的免疫抑制治疗，死亡率居高不下。目前，IPF患者的治疗方案仅限于两种FDA批准的临床药物，吡非尼酮和尼达尼布。这两种药物虽然已被证明可减缓疾病进展，但不能阻止或逆转纤维化。最终，绝大多数IPF患者死于呼吸衰竭。因此，亟待需要探索IPF发生发展的关键分子机制，利用先进的基因组技术和系统生物学方法，为个性化诊断和靶向药物的开发提供理论依据。
[0003]肺泡上皮细胞的异常修复和肌成纤维细胞表型的持续激活(上皮细胞和成纤维细胞)是肺纤维化的主要特征。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类由22～25个核苷酸构成的内源性多功能非编码RNA，作用于靶mRNA的3
’‑
非编码区(3
’‑
UTR)在转录后水平调控基因表达。目前，有关miRNAs在IPF发病过程中的作用仍然知之甚少。
专利技术内容
[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种miRNA
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203a
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用，克服了现有特发性肺纤维化有效治疗手段匮乏、治疗效果不佳等问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]miRNA
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203a
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用。
[0007]进一步地，miRNA
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203a
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3p模拟物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。具体序列如下：
[0008]5’‑
GUGAAAUGUUUAGGACCACUAG
‑3’
(SEQ ID NO.1)
[0009]进一步地，miRNA
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3p模拟物为与如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有80％以上同源性，且表达相同功能蛋白的基因。
[0010]进一步地，miRNA
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3p模拟物可同时调控肺泡上皮细胞功能和成纤维细胞功能。
[0011]上述中的miRNA
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化的药物组合物中的应用，该药物组合物中包括miRNA
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3p模拟物和/或促进miRNA
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3p模拟物过表达的活性成分，以及佐剂。
[0012]上述中的miRNA
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3p模拟物在制备检测特发性肺纤维化疾病和/或预后判断
试剂中的应用。
[0013]本专利技术的有益效果：
[0014]本专利技术公开了一种用于治疗特发性肺纤维化的miRNA
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3p模拟物及其在相关治疗药物制备中应用，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，该miRNA
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3p模拟物通过抑制肺泡上皮细胞EMT过程和成纤维细胞激活，能够缓解肺组织胶原沉积和肺泡组织结构紊乱，表明其可应用于制备治疗特发性肺纤维化药物。
附图说明
[0015]图1为IPF患者肺组织中miRNA
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3p表达量的检测；
[0016]图2为miRNA
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3p模拟物过表达的A549细胞Transwell实验检测结果；
[0017]图3为miRNA
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3p模拟物过表达的A549细胞划痕实验检测结果；
[0018]图4为miRNA
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3p模拟物过表达对细胞中ZO
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1和Vimentin蛋白表达量的影响；
[0019]图5为miRNA
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3p模拟物过表达对细胞中Fibronectin和α
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SMA蛋白表达量的影响；
[0020]图6为miRNA
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3p模拟物过表达后细胞的H&E染色检测。
具体实施方式
[0021]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0022]实施例1 miRNA
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203a
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3p在IPF患者中的表达
[0023]根据GSE27430数据集中获得的肺组织样本，其中13个样本来自手术活检的残余部分，或来自接受肺移植的IPF患者的肺组织；12个样本来自切除标本的无病边缘正常肺组织。IPF的病理学诊断是基于与普通型间质性肺炎相一致的典型显微镜检查结果。数据集表达矩阵基于R语言Limma包分析，差异性miRNAs的筛选条件为adj.P.Val<0.05且|logFC|≥1，发现miRNA
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3p在IPF患者肺组织中显著低表达(图1)。提示，在肺组织过表达miRNA
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3p及其模拟物具有潜在治疗IPF的作用。
[0024]实施例2 miRNA
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203a
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3p模拟物的合成
[0025]1.提取small RNA
[0026](1)取出六孔板，弃去培养基，用预冷的PBS清洗一次。
[0027](2)每个孔中加入1mL RNAiso for small RNA，冰上静置10min。
[0028](3)将所获得的裂解液转移至1.5mL离心管中，加入200μL氯仿，盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈乳白色，冰上静置10min。
[0029](4)4℃离心，12000g，15min。离心后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miRNA
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3p模拟物在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA
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3p模拟物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA
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203a
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3p模拟物为与如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有80％以上同源性，且表达相同功能蛋白的基因。4.根据根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA
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203a
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【专利技术属性】
技术研发人员：龚琳婧，王新元，姜法明，赵悦安，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：