【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有核苷类似物的寡核苷酸
[0001]本申请要求以下美国临时申请的优先权：2019年10月2日提交的62/909526；2019年10月29日提交的62/927500；以及2020年2月17日提交的62/977,630，其各自的内容通过引用整体并入本文。
技术介绍
[0002]SiRNA是由有义链和互补反义链组成的双链RNA分子。这些分子可能是每条链上19
‑
29个碱基长的平末端分子，或者它们可能表现出两个碱基突出(通常为dTdT)。
[0003]siRNA的每条链通常在合成仪上通过以下制备：将所需序列中的下一个碱基偶联至前一个的与增长中的寡核苷酸相连的碱基。亚酰胺化学或其他合成方法在本领域中是众所周知的。当合成完成时，之后两条链彼此退火以形成双链体。
[0004]已经证明，针对癌细胞内选定靶标的siRNA可以能够降低由被沉默的基因靶标所编码的蛋白的表达。因此，沉默这些基因可以抑制该细胞的生长。如果细胞具体地是siRNA可以接近(access)的疾病细胞(例如，癌细胞)，那么siRNA可以作为治疗剂发挥作用。此外，在某些情况下，已经发现，可以通过沉默选择的通路中的基因来增强目前作为治疗“金标准”的选择性疗法(小分子抑制剂、单克隆抗体等)的用途。
[0005]吉西他滨(2',2'
‑
二氟2'
‑
脱氧胞苷)是基于嘧啶的核苷类似物，其在全身施用时被核苷转运蛋白摄取，通过脱氧胞苷激酶进行三磷酸化而激活，之后可以掺入RNA或DNA中。其在DNA复制期间(细胞分裂期间)...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种寡核苷酸，其包含核苷酸和一个或多个抗癌核苷类似物。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸包含脱氧核糖核苷酸。3.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸包含核糖核苷酸。4.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸包含脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸，其中所述一个或多个抗癌核苷类似物连接至分子的末端。6.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸，其中所述一个或多个抗癌核苷类似物位于分子内。7.根据权利要求1至4中任一项所述的寡核苷酸，其中所述一个或多个抗癌核苷类似物作为环连接或位于分子的2条链之间的环内。8.根据权利要求1至7中任一项所述的寡核苷酸，其中所述一个或多个抗癌核苷类似物取代了一个或多个与它或与它们为类似物的核苷酸。9.根据权利要求1至8中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有1至10个抗癌核苷类似物。10.根据权利要求1至9中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含siRNA。11.根据权利要求1至9中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含miRNA。12.根据权利要求1至9中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含反义寡核苷酸(ASO)。13.根据权利要求1至9中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含DNA适体或RNA适体。14.根据权利要求10至12中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸靶向并沉默或降低癌细胞内特定基因的表达。15.根据权利要求10所述的寡核苷酸，其中所述siRNA沉默靶标或沉默基因，所述靶标在被沉默时增强所述抗癌核苷在癌细胞内的作用，所述基因在被沉默时增强所述抗癌核苷在杀伤细胞中的作用。16.根据权利要求1至15中任一项所述的寡核苷酸，其中寡核苷酸链包含化学修饰的核苷酸以提高针对核酸酶的稳定性。17.根据权利要求16所述的寡核苷酸，其中对所述寡核苷酸的修饰是2'
‑0‑
甲基或2'
‑
氟代或硫代磷酸酯类似物。18.根据权利要求1至17中任一项所述的寡核苷酸，其中所述抗癌核苷类似物选自吉西他滨、阿糖胞苷、5
‑
FU、5
‑
脱氧
‑5‑
氟尿苷、氟达拉滨、卡培他滨、克拉屈滨、曲沙他滨或氯法拉滨、氮杂胞苷和5
‑
脱氧氮杂胞苷。19.根据权利要求1至17中任一项所述的寡核苷酸，其中所述抗癌核苷类似物包含吉西他滨。20.根据权利要求19所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸包含含有连续多个吉西他滨核苷的polyGEM序列。21.根据权利要求1至20中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸靶向并沉默或降低癌细胞内特定基因的表达。
22.根据权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述基因选自ATR、ATM、WEE1、CHK1、CHK1A、CHK1B、CHK2、RAD17、BCL2、胞苷脱氨酶和BCLXL。23.根据权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述基因是CHK1或CHK2。24.根据权利要求21所述的寡核苷酸，其中所述基因是CHK1或RAD17。25.根据权利要求1至24中任一项所述的寡核苷酸，其还包含靶向配体。26.根据权利要求25所述的寡核苷酸，其中所述配体特异于癌细胞上的受体或蛋白并且其中所述配体结合至所述细胞。27.根据权利要求26所述的寡核苷酸，其中所述受体在癌细胞上的表达水平高于在非癌细胞上。28.根据权利要求24至27中任一项所述的寡核苷酸，其中所述靶向配体选自肽、小分子、蛋白、适体、抗体、纳米抗体、ScFv片段和碳水化合物部分。29.根据权利要求28所述的寡核苷酸，其中所述碳水化合物部分包含GalNac。30.根据权利要求24至27中任一项所述的寡核苷酸，其中所述靶向配体包含靶向在肿瘤细胞上上调的特定受体的肽。31.根据权利要求30所述的寡核苷酸，其中所述受体包含整合蛋白受体。32.根据权利要求31所述的寡核苷酸，其中所述整合蛋白受体包含α5β3或α5β6，并且所述配体在这两种受体之间表现出不同的亲和力。33.根据权利要求32所述的寡核苷酸，其中所述靶向配体来源于口蹄疫病毒(FMV)结合肽。34.根据权利要求33所述的寡核苷酸，其中所述靶向配体包含FMDV20肽序列(NAVPNLRGDLQVLAQKVART)的10至20个氨基酸。35.根据权利要求34所述的寡核苷酸，其中所述肽在第一个和最后一个位置被修饰以包含D
‑
氨基酸而不是标准的L
‑
氨基酸({D
‑
ASN}AVPNLRGDLQVLAQKVAR{D
‑
THR})。36.根据权利要求35所述的寡核苷酸，其中所述肽在分子上的某点被聚乙二醇化以提高溶解度和/或PK性质(例如PEG
‑
{D
‑
ASN}AVPNLRGDLQVLAQKVAR{D
‑
THR})。37.根据权利要求36所述的寡核苷酸，其中所述肽序列共价连接至寡核苷酸
‑
polyGEM分子。38.根据权利要求37所述的寡核苷酸，其中所述肽将所述寡核苷酸
‑
polyGEM分子递送至过表达相关受体的哺乳动物组织或器官中的癌细胞。39.根据权利要求38所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸
‑
PolyGem分子通过胞吞作用被摄入到所述癌细胞中。40.根据权利要求39所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸杀伤所述癌细胞。41.一种包含核苷酸和一个或多个抗癌核苷类似物的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含siRNA、miRNA、ASO、DNA适体或RNA适体，并且所述一个或多个抗癌核苷类似物包含吉西他滨。42.根据权利要求41所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含siRNA或miRNA，并且所述一个或多个抗癌核苷类似物包含吉西他滨。43.根据权利要求41或权利要求42所述的寡核苷酸，其中一个或多个吉西他滨核苷取代所述siRNA分子或所述miRNA分子的序列内的胞嘧啶分子。
44.根据权利要求43所述的寡核苷酸，其中一个或多个吉西他滨核苷被掺入到所述siRNA的有义链或反义链中。45.根据权利要求41或权利要求42所述的寡核苷酸，其中一个或多个吉西他滨或一个或多个其他抗癌核苷类似物在所述寡核苷酸在所述癌细胞的细胞质内降解时释放。46.根据权利要求41至45中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是siRNA并且所述吉西他滨在所述siRNA的有义链上，所述有义链在所述癌细胞内的RISC复合物摄取反义链时被释放到细胞质中。47.根据权利要求46所述的寡核苷酸，其中所述反义siRNA链沉默目的基因。48.根据权利要求41至47中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸是siRNA或miRNA，并且释放到细胞质中的吉西他滨增强所述siRNA或miRNA的沉默效应的活性，从而在所述癌细胞内产生治疗效果，例如，阻止复制或生长或积极杀伤癌细胞。49.根据权利要求41至47中任一项所述的寡核苷酸，其中所述siRNA或miRNA使靶标基因沉默，所述靶标基因在被沉默时增强所述吉西他滨在杀伤所述癌细胞中的作用。50.根据权利要求49所述的寡核苷酸，其中所述靶标基因选自ATR、ATM、WEE1、CHK1、CHK1A、CHK1B、CHK2、RAD17、BCL2、胞苷脱氨酶和BCLXL。51.根据权利要求49所述的寡核苷酸，其中所述靶标基因是CHK1或RAD17。52.根据权利要求49所述的寡核苷酸，其包含使在小鼠和人细胞中具有序列同一性的CHK1沉默的siRNA序列，并且相较于存在于针对CHK1的CHK_Az siRNA序列上的2个胞嘧啶，所述siRNA序列具有更多数量的可以被GEM取代的胞嘧啶部分(序列：SS：5
’‑
AAGAAAGAGAU[GEM]UGUAU[GEM]AAU
‑
dTdT
‑
3'：不包含Gem的AS链5
’‑
AUUGAUACAGAUCUCUUUCUU
‑
dTdT
‑3’
)。53.根据权利要求41至52中任一项所述的寡核苷酸，其中所述siRNA分子包含以下序列：SS＝5
’‑
CCU GUG GAA UAG UAC UUA CUG CAA U
‑3’
CHK1 siRNA有义链AS＝5
’‑
A UUG CAG UAA GUA CUA UUC CAC AGG
‑3’
CHK1 siRNA反义链。54.根据权利要求53所述的寡核苷酸，其中吉西他滨取代有义链内的选定胞嘧啶部分：SS＝5
’‑
CCU GUG GAA U...
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