用于刺激和维持治疗部位处的免疫系统应答性的纳米颗粒系统技术方案

纳米颗粒系统，所述纳米颗粒系统在体内对单核细胞/巨噬细胞进行遗传修饰以(1)将额外的免疫细胞募集至治疗部位；(2)在所述治疗部位保持活化，从而向其他免疫细胞提供持续刺激信号；以及(3)分泌结合所述治疗部位的目标细胞上的抗原并且还结合并活化所述募集的免疫细胞以破坏所结合的细胞的双特异性免疫细胞衔接抗体。所述系统还能够抑制转化生长因子β(TGFβ)的活性。(TGFβ)的活性。(TGFβ)的活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于刺激和维持治疗部位处的免疫系统应答性的纳米颗粒系统
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年12月31日提交的美国临时专利申请号62/956,033的优先权，所述专利申请如同在本文中完全阐述一样以引用的方式整体并入本文。


[0003]本公开提供了纳米颗粒系统，所述纳米颗粒系统在体内对单核细胞/巨噬细胞进行遗传修饰以(1)将额外的免疫细胞募集至治疗部位；(2)在所述治疗部位保持活化，从而向其他免疫细胞提供持续刺激信号；以及(3)分泌结合所述治疗部位处的靶向细胞上的抗原并且还结合并活化募集的免疫细胞以破坏所结合的细胞的多特异性免疫细胞衔接分子。所述系统还可抑制转化生长因子β(TGFβ)的活性。
[0004]专利技术背景
[0005]巨噬细胞是大量浸润癌性组织的关键免疫效应细胞。然而，在肿瘤微环境内，巨噬细胞经历从活化的杀肿瘤状态到实际上促进肿瘤生长和转移的免疫抑制表型的转变。Pollard,Nat Rev Cancer 4,71
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78(2004)；Mantovani等人,Nat Rev Clin Oncol(2017)。
[0006]认识到肿瘤微环境内免疫抑制的巨噬细胞促进癌症生长和转移，因此已经投入了很多精力来开发靶向免疫抑制性肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的疗法。用于解决TAM的许多努力一直集中于杀伤TAM以减轻肿瘤微环境中的免疫抑制。然而，通过这种方法，在肿瘤环境中，TAM仅被新出现的巨噬细胞替代。此外，即使在成功杀伤一些TAM时，迄今为止开发的大多数疗法仍不能充分渗透到肿瘤微环境中。尽管一些小分子药物和抗体已显示出一定的成功，但这些方法抑制了体内所有的巨噬细胞，从而诱导危险的副作用。Bowman和Joyce,Immunotherapy 6,663
‑
666(2014)。因此，正如受癌症影响的每个人所理解的那样，迫切需要具有更少副作用的更有效的治疗策略。
[0007]在对免疫系统的T细胞进行遗传工程化以靶向并杀死目标细胞类型(如癌细胞)方面已经取得了重大进展。许多这些T细胞已进行遗传工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)。CAR是包含允许经遗传修饰的T细胞识别并杀死癌细胞的若干不同亚组分的蛋白质。所述亚组分至少包括细胞外组分和细胞内组分。所述细胞外组分包含特异性地结合标志物的结合结构域，所述标志物优先存在于目标细胞表面上。当所述结合结构域结合此类标志物时，所述细胞内组分向T细胞发出信号以破坏所结合的细胞。CAR另外包含可将所述细胞外组分连接至所述细胞内组分的跨膜结构域，以及可增加CAR功能的其他亚组分。例如，包含一个或多个接头序列(如间隔区)可允许CAR具有额外的构象柔性，从而通常增加结合结构域结合经靶向的细胞标志物的能力。
[0008]当常规治疗失败时，使用表达CAR的T细胞(CAR
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T)的临床试验显示在患有难治性大B细胞淋巴瘤的患者中的正向应答(Neelapu,等人2017N Engl J Med 377:2531
‑
2544)。然而，虽然经遗传工程化的CAR
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T细胞导致癌细胞破坏，但对于一些适应症它们未能提供延长的体内抗癌活性。这种失败的一种原因可能是基于肿瘤微环境的免疫抑制作用。
[0009]双特异性T细胞衔接抗体结合癌细胞上的癌症抗原和T细胞活化表位两者，目的是将T细胞带至癌细胞以破坏癌细胞。参见例如，US 2008/0145362。大多数现有双特异性T细胞衔接抗体治疗剂包含成对的单特异性抗体来源的结合结构域。一些人探索了组合使用此类抗体，所述抗体靶向两种不同的T细胞活化表位(例如，CD3和CD28)。然而，许多这些抗体具有短的体内半衰期，因此给药仍然是挑战。
[0010]几个小组已经探索了克服与施用双特异性T细胞衔接抗体相关的一些挑战的途径。例如，Stadler等人,(Nature.Medicine 23,815
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817)描述了注射纳米载体，所述纳米载体递送编码双特异性T细胞衔接抗体的核酸。通过在体内表达这些抗体，这种方法能够实现循环双特异性T细胞衔接抗体的持续水平，从而避免输液泵进行连续递送。尽管如此，循环双特异性T细胞衔接抗体不能有效地穿透实体瘤，并且募集至并进入肿瘤微环境的T细胞的活性受到髓样抑制细胞的抑制。
[0011]Choi等人,(Nature Biotechnology,37,1049
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1058,2019)探索了遗传工程化T细胞产生并分泌双特异性T细胞衔接抗体。事实上，Choi等人探索了遗传工程化T细胞表达CAR以及分泌双特异性T细胞衔接抗体。然而，这些T细胞需要离体遗传工程化。此外，CAR T细胞也不能有效地浸润实体瘤并在肿瘤部位处扩增(通常是由于髓样抑制细胞)。因此，尽管在癌症治疗策略方面取得了重大进展，但仍然存在重大挑战。
[0012]此外，转化生长因子β(TGF
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β)家族蛋白因子在实体瘤中被发现处于高水平，并促成肿瘤微环境中的免疫功能障碍。

技术实现思路

[0013]本公开提供系统和方法以使肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的免疫抑制性肿瘤支持状态逆转，并且将这些TAM转变为高度活化的杀伤肿瘤细胞的巨噬细胞。因此，本文公开的系统和方法不仅旨在杀伤TAM，而且使它们的活性从肿瘤促进转向肿瘤破坏。在特定实施方案中，所述系统和方法用作治疗剂以诱导杀伤癌细胞和/或减少或预防新的癌细胞的生长或发育。本文公开的数据表明，这些系统和方法能够完全根除并抑制卵巢癌，卵巢癌是非常难以控制的癌症类型。
[0014]已显示使用本文公开的TAM活化策略将免疫细胞募集至肿瘤部位。然而，许多募集的免疫细胞并不结合由肿瘤表达的癌症抗原，并且因此这些募集的细胞对抗癌应答提供比以其他方式可能实现的更少的益处。为了解决这个问题，本公开提供了对活化的TAM进行遗传工程化以表达多特异性免疫细胞衔接分子。然后，所述活化的TAM为本文所述的癌症疗法的成功提供了三个关键方面。它们(1)将免疫细胞募集至肿瘤部位；(2)在所述肿瘤部位保持活化，从而向其他免疫细胞提供持续刺激信号；以及(3)分泌结合所述肿瘤部位的癌症抗原并且还结合并活化募集的免疫细胞以破坏所结合的癌细胞的多特异性免疫细胞衔接分子。所描述的杀死癌细胞的方法也可应用于其他目标细胞类型，如患病细胞、自身反应性细胞、受感染细胞和微生物细胞，仅举几例。
[0015]特定实施方案通过利用纳米颗粒系统来递送编码活化调控因子如转录因子的核苷酸来改变或维持体内巨噬细胞的活化状态。特别有用的纳米颗粒具有正核和带中性或负电荷的表面并递送核苷酸，所述核苷酸编码(i)产生和/或维持巨噬细胞的活化状态的转录因子；(ii)激酶；和/或(iii)多特异性免疫细胞衔接分子。在优选的实施方案中，所述系统
将包含递送编码这些组分中的每一者的核苷酸的纳米颗粒。<130nm的纳米颗粒粒度确保肿瘤浸润。纳米颗粒可任选地包括TAM靶向配体，以指导TAM更选择性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种纳米颗粒，所述纳米颗粒包含：结合至专职吞噬细胞的靶向配体；和编码至少具有第一结合结构域和第二结合结构域的蛋白质分子的核酸，其中所述第一结合结构域对由免疫细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性，并且其中所述第二结合结构域对由癌细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性。2.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述靶向配体结合至由单核细胞、巨噬细胞或两者表达的细胞表面蛋白。3.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述靶向配体包含二
‑
甘露糖。4.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述核酸包括核糖核酸(RNA)。5.如权利要求4所述的纳米颗粒，其中所述RNA包括信使RNA(mRNA)。6.如权利要求5所述的纳米颗粒，其中所述mRNA包括合成RNA或体外转录的RNA(IVT RNA)。7.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述第一结合结构域对淋巴细胞的细胞表面蛋白具有特异性。8.如权利要求7所述的纳米颗粒，其中所述淋巴细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞。9.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述第一结合结构域对选自由以下组成的组的T细胞的细胞表面蛋白具有特异性：CD8+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK T细胞。10.如权利要求9所述的纳米颗粒，其中所述第一结合结构域对CD3具有特异性。11.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述蛋白质分子是双特异性T细胞衔接子。12.如权利要求11所述的纳米颗粒，其中所述蛋白质分子是EpCAM
‑
CD3双特异性T细胞衔接子。13.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述第二结合结构域对由所述癌细胞表达的抗原具有特异性。14.如权利要求1所述的纳米颗粒，所述纳米颗粒还包含编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的第二核酸。15.如权利要求1所述的纳米颗粒，所述纳米颗粒还包含肿瘤细胞增殖抑制剂或编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸。16.如权利要求15所述的纳米颗粒，其中所述核酸编码抗体或抗体的抗原结合片段。17.如权利要求15所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒包含编码CD40
‑
CD40L抑制剂或TGFβ抑制剂的核酸。18.如权利要求1所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒是脂质体、脂质体纳米颗粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米颗粒。19.一种组合物，所述组合物包含：第一多个纳米颗粒，其中所述第一多个纳米颗粒中的每一个包含：结合至专职吞噬细胞的靶向配体；和编码蛋白质分子的核酸，所述蛋白质分子具有对由免疫细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第一结合结构域和对由癌细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第二结合结构域。
20.如权利要求19所述的组合物，其中所述靶向配体结合至由单核细胞、巨噬细胞或两者表达的细胞表面蛋白。21.如权利要求19所述的组合物，其中所述靶向配体包含二
‑
甘露糖。22.如权利要求19所述的组合物，其中所述核酸包括RNA。23.如权利要求22所述的组合物，其中所述RNA包括mRNA。24.如权利要求23所述的组合物，其中所述mRNA包括合成RNA或IVT RNA。25.如权利要求19所述的组合物，其中所述第一结合结构域对淋巴细胞的细胞表面蛋白具有特异性。26.如权利要求25所述的组合物，其中所述淋巴细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、NK细胞和TIL细胞。27.如权利要求19所述的组合物，其中所述第一结合结构域对选自由以下组成的组的T细胞的细胞表面蛋白具有特异性：CD8+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK T细胞。28.如权利要求27所述的组合物，其中所述第一结合结构域对CD3具有特异性。29.如权利要求19所述的组合物，其中所述蛋白质分子是双特异性T细胞衔接子。30.如权利要求29所述的组合物，其中所述蛋白质分子是EpCAM
‑
CD3双特异性T细胞衔接子。31.如权利要求19所述的组合物，其中所述第二结合结构域对由所述癌细胞表达的抗原具有特异性。32.如权利要求19所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体。33.如权利要求编号19
‑
32中任一项所述的组合物，其中所述第一多个纳米颗粒的至少一个子集还包含(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸和(b)编码IKKβ的核酸中的一者或多者。34.如权利要求编号19
‑
32中任一项所述的组合物，所述组合物还包含：第二多个纳米颗粒，其中所述第二多个纳米颗粒的至少一个子集包含(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸和(b)编码IKKβ的核酸中的一者或多者。35.如权利要求编号19
‑
34中任一项所述的组合物，所述组合物还包含肿瘤细胞增殖抑制剂。36.如权利要求编号19
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35中任一项所述的组合物，其中所述第一或第二多个纳米颗粒的至少一个子集还包含编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸。37.如权利要求34中任一项所述的组合物，其中所述第一或第二多个纳米颗粒的至少一个子集还包含编码肿瘤细胞增殖抑制剂的抗体的抗原结合片段的核酸。38.如权利要求编号19或34
‑
36中任一项所述的组合物，所述组合物还包含第三多个纳米颗粒，其中所述第三多个纳米颗粒的至少一个子集包含编码肿瘤细胞增殖抑制剂的抗体的抗原结合片段的核酸。39.如权利要求编号35
‑
38中任一项所述的组合物，其中所述肿瘤细胞增殖抑制剂是CD40
‑
CD40L抑制剂或TGFβ抑制剂。40.如权利要求38所述的组合物，所述组合物在不存在所述第二多个纳米颗粒的情况下包含所述第一多个纳米颗粒和所述第三多个纳米颗粒。41.如权利要求38所述的组合物，其中所述第一、第二和/或第三多个纳米颗粒包括脂
质体、脂质体纳米颗粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米颗粒。42.一种用于治疗人受试者的癌症的组合物，所述组合物包含：第一多个纳米颗粒，其中所述多个纳米颗粒中的每一个包含：(i)结合至单核细胞、巨噬细胞或两者的靶向配体；和(ii)编码蛋白质分子的mRNA，所述蛋白质分子至少具有对由淋巴细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第一结合结构域和对由癌细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第二结合结构域；其中所述第一多个纳米颗粒刺激或增强所述人受试者中的免疫应答，从而治疗癌症。43.如权利要求42所述的组合物，其中所述靶向配体包含二
‑
甘露糖。44.如权利要求42所述的组合物，其中所述mRNA包括合成RNA或IVT RNA。45.如权利要求42所述的组合物，其中所述第一结合结构域对淋巴细胞的细胞表面蛋白具有特异性。46.如权利要求42所述的组合物，其中所述淋巴细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、NK细胞和TIL细胞。47.如权利要求42所述的组合物，其中所述第一结合结构域对选自由以下组成的组的T细胞的细胞表面蛋白具有特异性：CD8+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK T细胞。48.如权利要求47所述的组合物，其中所述第一结合结构域对CD3具有特异性。49.如权利要求42所述的组合物，其中所述蛋白质分子是双特异性T细胞衔接子。50.如权利要求49所述的组合物，其中所述蛋白质分子是EpCAM
‑
CD3双特异性T细胞衔接子。51.如权利要求42所述的组合物，其中所述第二结合结构域对由所述癌细胞表达的抗原具有特异性。52.如权利要求42所述的组合物，所述组合物还包含药学上可接受的载体。53.如权利要求编号42
‑
52中任一项所述的组合物，其中所述第一多个纳米颗粒的至少一个子集还包含以下中的一者或多者：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的mRNA，(b)编码IKKβ的mRNA，或(c)编码一种或多种IRF的mRNA和编码IKKβ的mRNA，和(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的mRNA。54.如权利要求编号42
‑
53中任一项所述的组合物，所述组合物还包含：第二多个纳米颗粒，其中所述第二多个纳米颗粒中的每一个包含结合至单核细胞、巨噬细胞或两者的靶向配体，和以下中的一者或多者：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的mRNA，(b)编码IKKβ的mRNA，和(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的mRNA。55.如权利要求54所述的组合物，其中所述第二多个纳米颗粒包含编码肿瘤细胞增殖抑制剂的抗体的抗原结合片段的mRNA。56.如权利要求编号53
‑
55中任一项所述的组合物，其中所述肿瘤细胞增殖抑制剂是CD40
‑
CD40L抑制剂或TGFβ抑制剂。57.如权利要求54所述的组合物，其中所述第一和/或第二多个纳米颗粒包括脂质体、脂质体纳米颗粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米颗粒。58.一种用于治疗人受试者的癌症的方法，所述方法包括：
向所述人受试者施用包含第一多个纳米颗粒的组合物，其中所述第一多个纳米颗粒中的每一个包含：(i)结合至单核细胞、巨噬细胞或两者的靶向配体；和(ii)编码蛋白质分子的mRNA，所述蛋白质分子至少具有对由淋巴细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第一结合结构域和对由癌细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第二结合结构域；其中所述多个纳米颗粒刺激或增强所述人受试者中的免疫应答，从而治疗癌症。59.如权利要求58所述的方法，其中所述靶向配体包含二
‑
甘露糖。60.如权利要求58所述的方法，其中所述mRNA包括合成RNA或IVT RNA。61.如权利要求58所述的方法，其中所述淋巴细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、NK细胞和TIL细胞。62.如权利要求58所述的方法，其中所述第一结合结构域对选自由以下组成的组的T细胞的细胞表面蛋白具有特异性：CD8+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK T细胞。63.如权利要求62所述的方法，其中所述第一结合结构域对CD3具有特异性。64.如权利要求58所述的方法，其中所述蛋白质分子是双特异性T细胞衔接子。65.如权利要求64所述的方法，其中所述蛋白质分子是EpCAM
‑
CD3双特异性T细胞衔接子。66.如权利要求58所述的方法，其中所述第二结合结构域对由所述癌细胞表达的抗原具有特异性。67.如权利要求58所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的载体。68.如权利要求编号58
‑
67中任一项所述的方法，其中所述第一多个纳米颗粒的至少一个子集还包含以下中的一者或多者：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸，(b)编码IKKβ的核酸，和(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸。69.如权利要求编号58
‑
68中任一项所述的方法，所述方法还包括：向所述人受试者施用包含第二多个纳米颗粒的组合物，其中所述第二多个纳米颗粒中的每一个包含：结合至单核细胞、巨噬细胞或两者的靶向配体，和以下中的一者或多者：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的mRNA，和(b)编码IKKβ的mRNA。70.如权利要求68或69所述的方法，其中所述第一或第二多个纳米颗粒的至少一个子集还包含编码肿瘤细胞增殖抑制剂的mRNA。71.如权利要求编号58
‑
70中任一项所述的方法，所述方法还包括：向所述人受试者施用包含第三多个纳米颗粒的组合物，其中所述第三多个纳米颗粒中的每一个包含：结合至单核细胞、巨噬细胞或两者的靶向配体，和编码肿瘤细胞增殖抑制剂的mRNA。72.如权利要求70或71所述的方法，其中，编码肿瘤细胞增殖抑制剂的mRNA编码肿瘤细胞增殖抑制剂的抗体的抗原结合片段。73.如权利要求72所述的方法，其中所述肿瘤细胞增殖抑制剂是CD40
‑
CD40L抑制剂或
TGFβ抑制剂。74.如权利要求71所述的组合物，其中所述第一、第二和/或第三多个纳米颗粒包括脂质体、脂质体纳米颗粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米颗粒。75.如权利要求编号58或69所述的方法，其中施用包含所述第一多个纳米颗粒的组合物的步骤和施用包含所述第二多个纳米颗粒的组合物的步骤同时或依序进行。76.如权利要求编号58或69中任一项所述的方法，其中施用包含所述第一多个纳米颗粒的组合物的步骤在施用包含所述第二多个纳米颗粒的组合物的步骤之后进行。77.如权利要求71所述的方法，其中施用包含所述第三多个纳米颗粒的组合物的步骤与施用所述第一多个纳米颗粒的步骤同时或依次进行。78.如权利要求71所述的方法，其中施用包含所述第三多个纳米颗粒的组合物的步骤与施用所述第二多个纳米颗粒的步骤同时或依次进行。79.如权利要求69所述的方法，所述方法包括在不存在施用包含所述第二多个纳米颗粒的组合物的步骤的情况下施用包含所述第一多个纳米颗粒的组合物和施用包含所述第三多个纳米颗粒的组合物的步骤。80.一种经修饰的专职吞噬细胞，所述经修饰的专职吞噬细胞包含：负载有编码蛋白质分子的核酸的纳米颗粒，所述蛋白质分子至少具有对由免疫细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第一结合结构域和对由癌细胞表达的细胞表面蛋白具有特异性的第二结合结构域，其中所述纳米颗粒粘附于所述吞噬细胞的表面或者已被所述吞噬细胞内化。81.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述吞噬细胞是单核细胞或巨噬细胞。82.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述吞噬细胞是肿瘤相关巨噬细胞。83.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述核酸包括核糖核酸(RNA)。84.如权利要求83所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述RNA包括信使RNA(mRNA)。85.如权利要求84所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述mRNA包括合成RNA或体外转录的RNA(IVT RNA)。86.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述第一结合结构域对淋巴细胞的细胞表面蛋白具有特异性。87.如权利要求86所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述淋巴细胞选自由以下组成的组：T细胞、B细胞、NK细胞和TIL细胞。88.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述第一结合结构域对选自由以下组成的组的T细胞的细胞表面蛋白具有特异性：CD8+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK T细胞。89.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述第一结合结构域对CD3具有特异性。90.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述蛋白质分子是双特异性T细胞衔接子。91.如权利要求编号89
‑
90中任一项所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述蛋白质分
子是EpCAM
‑
CD3双特异性T细胞衔接子。92.如权利要求编号80
‑
91中任一项所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述纳米颗粒进一步负载有以下中的一者或多者：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸，(b)编码IKKβ的核酸，和(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸。93.如权利要求编号80
‑
92中任一项所述的经修饰的专职吞噬细胞，所述经修饰的专职吞噬细胞还包含：负载有以下中的一者或多者的第二纳米颗粒：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸，(b)编码IKKβ的核酸，和(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸，其中所述第二纳米颗粒粘附于所述吞噬细胞的表面或者已被所述吞噬细胞内化。94.如权利要求编号92或93所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述第一或第二纳米颗粒负载有编码肿瘤细胞增殖抑制剂的抗体或抗体的抗原结合片段的核酸。95.如权利要求94所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述肿瘤细胞增殖抑制剂是CD40
‑
CD40L抑制剂或TGFβ抑制剂。96.如权利要求80所述的经修饰的专职吞噬细胞，所述经修饰的专职吞噬细胞还包含以下中的至少一者：负载有以下中的一者或多者的第二纳米颗粒：(a)编码一种或多种干扰素调控因子(IRF)的核酸，(b)编码IKKβ的核酸，或(c)编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸；以及负载有编码肿瘤细胞增殖抑制剂的核酸的第三纳米颗粒，其中所述第二和第三纳米颗粒中的每一个粘附于所述吞噬细胞的表面或者已被所述吞噬细胞内化。97.如权利要求96所述的经修饰的专职吞噬细胞，其中所述第一、第二和/或第三纳米颗粒包括脂质体、脂质体纳米颗粒、脂质纳米颗粒或固体脂质纳米颗粒。98.一种纳米颗粒，所述纳米颗粒包含带正电荷的聚合物核心和围绕所述聚合物核心的带中性或负电荷的包衣，其中所述带正电荷的聚合物核心包封编码结合免疫细胞活化表位的至少一个结合结构域和/或结合癌症抗原的至少一个结合结构域的核苷酸。99.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒<130nm。100.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述带正电荷的聚合物包括聚(β
‑
氨基酯、聚(L
‑
赖氨酸)、聚(乙烯亚胺)(PEI)、聚
‑
(酰氨基胺)树枝状大分子(PAMAM)、聚(胺
‑
共
‑
酯)、聚(甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯)(PDMAEMA)、壳聚糖、聚
‑
(L
‑
丙交酯
‑
共
‑
L
‑
赖氨酸)、聚[α
‑
(4
‑
氨基丁基)
‑
L
‑
乙醇酸](PAGA)或聚(4
‑
羟基
‑
L
‑
脯氨酸酯)(PHP)。101.如权利要求100所述的纳米颗粒，其中所述带正电荷的聚合物包括聚(β
‑
氨基酯)。102.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述带中性或负电荷的包衣包含聚谷氨酸(PGA)、聚(丙烯酸)、藻酸或半琥珀酸胆固醇酯/1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
甘油基
‑3‑
磷酸乙醇胺。103.如权利要求102所述的纳米颗粒，其中所述带中性或负电荷的包衣包含聚谷氨酸(PGA)。104.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述带中性或负电荷的包衣包含两性离子聚合物。105.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述带中性或负电荷的包衣包含脂质体。106.如权利要求105所述的纳米颗粒，其中所述脂质体包含1,2
‑
二油酰基
‑3‑
三甲基铵
‑
丙烷(DOTAP)、1,2
‑
二
‑
O
‑
十八烯基
‑3‑
三甲基铵丙烷(DOTMA)、3β
‑
[N
‑
(N',N'
‑
二甲基氨
基乙烷)
‑
氨基甲酰基]胆固醇(DC
‑
Chol)、双十八烷基
‑
酰氨基甘氨酰精胺(DOGS)、胆固醇、1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
甘油基
‑3‑
磷酸乙醇胺(DOPE)或1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
甘油基
‑3‑
磷酸胆碱(DOPC)。107.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述核酸包括核糖核酸(RNA)。108.如权利要求107所述的纳米颗粒，其中所述RNA包括合成RNA。109.如权利要求107所述的纳米颗粒，其中所述RNA包括体外转录的mRNA。110.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述核苷酸包括整合或非整合双链DNA。111.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述核苷酸呈质粒、微环质粒或封闭端线性ceDNA的形式。112.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述癌症抗原由卵巢癌细胞、黑素瘤细胞、成胶质细胞瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、黑素瘤细胞、前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、干细胞癌细胞、间皮瘤细胞、肾细胞癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、胆管癌细胞、膀胱癌细胞、神经母细胞瘤细胞、结肠直肠癌细胞或梅克尔细胞癌细胞表达。113.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述癌症抗原包括B细胞成熟抗原(BCMA)、羧基
‑
酐酶
‑
IX(CAIX)、CD19、CD24、CD56、CD133、CEA、双唾液酸神经节苷脂、EpCam、EGFR、EGFR变体III(EGFRvIII)、ERBB2、叶酸受体(FOLR)、GD2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖
‑
2、HER2、Lewis Y、L1
‑
CAM、间皮素、MUC16、PD
‑
L1、PSMA、前列腺干细胞抗原(PSCA)、ROR1、TYRP1/gp75、SV40 T或WT
‑
1。114.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中结合所述癌症抗原的所述结合结构域包括抗体阿德木单抗、雷星
‑
阿奈妥单抗、阿麦妥昔单抗、HN1、奥戈伏单抗、欧伐瑞、阿巴伏单抗、依决洛单抗、法勒珠单抗、夫兰妥单抗、TA99、20D7、西妥昔单抗、FMC63、SJ25C1、HD37、R11、R12、2A2、Y31、4D5、3G10阿特珠单抗、阿维鲁单抗或德瓦鲁单抗的互补决定区(CDR)。115.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中结合癌症抗原的所述结合结构域是蛋白质分子。116.如权利要求115所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒内的所述不同蛋白质分子包含结合不同癌症抗原的结合结构域。117.如权利要求116所述的纳米颗粒，其中所述不同的癌症抗原由相同癌症类型表达。118.如权利要求117所述的纳米颗粒，其中所述癌症类型是卵巢癌、黑素瘤或成胶质细胞瘤。119.如权利要求116所述的纳米颗粒，其中所述不同的癌症抗原包括选自EpCam、L1
‑
CAM、MUC16、叶酸受体(FOLR)、Lewis Y、ROR1、间皮素、WT
‑
1、PD
‑
L1、EGFR和CD56的至少两种癌症抗原；选自酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1/gp75)、GD2、PD
‑
L1和EGFR至少两种癌症抗原；或选自EGFR变体III(EGFRvIII)和IL13Ra2的两种癌症抗原。120.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述蛋白质分子的至少一个结合结构域结合由T细胞或自然杀伤(NK)细胞表达的免疫细胞活化表位。121.如权利要求120所述的纳米颗粒，其中所述免疫细胞活化表位由T细胞表达。122.如权利要求121所述的纳米颗粒，其中由所述T细胞表达的所述免疫细胞活化表位包括CD2、CD3、CD7、CD8、CD27、CD28、CD30、CD40、CD83、4
‑
1BB、OX40、淋巴细胞功能相关抗原
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1(LFA
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1)、LIGHT、NKG2C或B7
‑
H3。123.如权利要求122所述的纳米颗粒，其中由所述T细胞表达的所述免疫细胞活化表位包括CD3、CD28或4
‑
1BB。124.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中结合免疫细胞活化表位的所述结合结构域包括蛋白质分子。125.如权利要求124所述的纳米颗粒，其中所述纳米颗粒内的所述不同蛋白质分子包含结合不同免疫细胞活化表位的结合结构域。126.如权利要求125所述的纳米颗粒，其中所述不同的免疫细胞活化表位包括CD3和CD28或CD3和4
‑
1BB。127.如权利要求126所述的纳米颗粒，其中至少一个结合结构域包括抗体OKT3、20G6
‑
F3、4B4
‑
D7、4E7
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C9、18F5
‑
H10、TGN1412、9D7、9.3、KOLT
‑
2、15E8、248.23.2、EX5.3D10、OKT8或SK1的CDR。128.如权利要求120所述的纳米颗粒，其中所述免疫细胞活化表位由NK细胞表达。129.如权利要求128所述的纳米颗粒，其中由所述NK细胞表达的所述免疫细胞活化表位包括NKG2D、CD8、CD16、KIR2DL4、KIR2DS1、KIR2DS2、KIR3DS1、NKG2C、NKG2E、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、NKp80或DNAM
‑
1。130.如权利要求129所述的纳米颗粒，其中至少一个结合结构域包括抗体5C6、1D11、mAb 33、P44
‑
8、SK1或3G8的CDR。131.如权利要求98所述的纳米颗粒，其中所述结合结构域通过蛋白质接头连接。132.如权利要求131所述的纳米颗粒，其中所述蛋白质接头包括Gly
‑
Ser接头。133.如权利要求131所述的纳米颗粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：蒂达尔治疗公司，
类型：发明
国别省市：