用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组制造技术

本发明专利技术涉及用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游内部引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游内部引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游外部引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的环状引物Loop F和核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的环状引物LoopB。使用所述LAMP引物组进行乙型流感病毒定性检测，快速、高效、特异性强、结果易判断、无需特殊仪器且不依赖变温。无需特殊仪器且不依赖变温。无需特殊仪器且不依赖变温。

【技术实现步骤摘要】
用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组


[0001]本专利技术涉及用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，属于分子生物学


技术介绍

[0002]流感病毒属于正黏病毒科，分为甲、乙、丙、丁四种类别，其中乙型流感病毒是人类流感疾病的主要病原体，且几乎专门感染人类，约占人类总感染数的三分之一。乙型流感病毒会引起急性呼吸道疾病，其所致疾病的临床表现为发病快、发热、畏寒、头痛、乏力、干咳和腹泻等，严重时可导致死亡。乙型流感病毒传播迅速、波及范围广、发病率和死亡率较高，严重威胁人类健康。
[0003]乙型流感病毒检测方法对于乙型流感病毒早期快速诊断十分关键。而乙型流感病毒早期快速诊断对于其治疗和防控起到至关重要的作用。目前，临床应用的乙型流感病毒检测方法有免疫荧光法、酶免疫测定法、免疫色谱法、逆转录
‑
聚合酶链反应(RT
‑
PCR)和实时荧光定量PCR技术等。这些方法或检测时间较长，或步骤繁琐，或需要特殊的仪器，难以广泛应用。免疫层析法是近年来发展的一种快速诊断技术，该技术应用免疫胶体金或免疫酶染色可使特定区域显示一定的颜色，从而实现特异性的快速免疫诊断，但灵敏度不高。
[0004]以LAMP为代表的等温扩增技术是一种能在体外恒温条件下高效、快速且经济地扩增核酸的检测技术。该技术方法能够在60～65℃恒温条件下，30min内实现核酸靶标分子的高特异性和高灵敏度扩增，具有快速、高效、特异性强、结果易判断、无需特殊仪器且不依赖变温的优点。目前，等温扩增技术已经被广泛应用于新型冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、埃博拉病毒，寨卡病毒等一系列病原微生物的快速检测。因此，若能开发基于等温扩增的乙型流感病毒检测方法，对解决现有乙型流感病毒检测方法所存在的问题十分重要。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本专利技术提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，所述LAMP引物组靶向HA基因，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游内部引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游内部引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游外部引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的环状引物Loop F和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的环状引物Loop B。
[0006]在本专利技术的一种实施方式中，所述HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0007]本专利技术还提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒，所述LAMP检测试剂盒包括上述LAMP引物组。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，所述LAMP检测试剂盒还包括荧光染料和LAMP预混液。
[0009]在本专利技术的一种实施方式中，所述荧光染料为SYTO 9荧光染料、SYTO 12荧光染料或SYTO 16荧光染料中的至少一种。
[0010]本专利技术还提供了一种定性检测乙型流感病毒的方法，其特征在于，所述方法为：使
用上述LAMP检测试剂盒对待测样本进行检测，将LAMP引物组、LAMP预混液、荧光染料和待测样本混合，得到LAMP反应体系；将LAMP反应体系进行孵育，孵育过程检测孵育液的荧光值，若孵育液的荧光值较孵育前有变化且变化幅度超过20％，则待测样本中有乙型流感病毒。
[0011]在本专利技术的一种实施方式中，所述孵育的温度为60～65℃、时间为30～60min。
[0012]在本专利技术的一种实施方式中，所述LAMP反应体系由12.5μL 2
×
LAMP预混液、2.5μL 10
×
Primer Mix、3.0μL待测样本、1.0μL荧光染料和9.0μL去离子水H2O组成；所述10
×
Primer Mix含有16μM上游内部引物FIP、16μM下游内部引物BIP、2μM上游外部引物F3、2μM下游外部引物B3、4μM环状引物Loop F和4μM环状引物Loop B。
[0013]在本专利技术的一种实施方式中，所述10
×
Primer Mix的配置方法为：将上游内部引物FIP、下游内部引物BIP、上游外部引物F3、下游外部引物B3、环状引物Loop F和环状引物Loop B添加至无菌水中。
[0014]本专利技术还提供了上述LAMP引物组或上述LAMP检测试剂盒或上述方法在乙型流感病毒定性检测中的应用。
[0015]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0016]本专利技术提供了用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，所述LAMP引物组靶向HA基因，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游内部引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游内部引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游外部引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的环状引物Loop F和核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的环状引物Loop B。使用所述LAMP引物组对待测样本进行乙型流感病毒定性检测，具有快速、高效、特异性强、结果易判断、无需特殊仪器且不依赖变温的优点，极具应用前景。
附图说明
[0017]图1：引物可靠性检测结果。
[0018]图2：最低检测限检测结果。
具体实施方式
[0019]提供下述实施例是为了更好地进一步理解本专利技术，并不局限于所述最佳实施方式，不对本专利技术的内容和保护范围构成限制，任何人在本专利技术的启示下或是将本专利技术与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本专利技术相同或相近似的产品，均落在本专利技术的保护范围之内。
[0020]下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
[0021]实施例1：一种用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒
[0022]本实施例提供了一种用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒，所述LAMP检测试剂盒由靶向乙型流感病毒的HA基因(SEQ ID NO.7)的LAMP引物组、SYTO 9荧光染料和LAMP预混液组成；所述LAMP引物组由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游内部引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游内部
引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游外部引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的环状引物Loop F和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的环状引物Loop B组成；
[0023]LAMP引物组中：
[0024]SEQ ID NO.1：
[0025]TGTTGGTGTTGTTGTCAGTGGTACTCACCTCATGTGGTCA
[0026]SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于乙型流感病毒检测的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组靶向HA基因，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游内部引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游外部引物F3、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游内部引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游外部引物B3、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的环状引物Loop F和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的环状引物Loop B。2.如权利要求1所述的LAMP引物组，其特征在于，所述HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。3.用于乙型流感病毒检测的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP检测试剂盒包括权利要求1或2所述的LAMP引物组。4.如权利要求3所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP检测试剂盒还包括荧光染料和LAMP预混液。5.如权利要求4所述的LAMP检测试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为SYTO 9荧光染料、SYTO 12荧光染料或SYTO 16荧光染料中的至少一种。6.一种定性检测乙型流感病毒的方法，其特征在于，所述方法为：使用权利要求3～5任一项所述的LAMP检测试剂盒对待测样本进行检测，将LAMP引物组、LAMP预混液、荧光染料和待测样本混合，得到LAMP反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹焕才，陈名利，殷建，茹静，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：