一种检测IL-6的实时荧光定量PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测IL

【技术实现步骤摘要】
一种检测IL
‑
6的实时荧光定量PCR检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，具体的说，涉及一种用于IL
‑
6的实时荧光定量PCR检测方法。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
6(Interleukin
‑
6,IL
‑
6)是细胞因子家族中的重要成员，属于白细胞介素的一种，由单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、B/T淋巴细胞、肝细胞、角质形成细胞、脂肪细胞、树突状细胞和成纤维细胞等多种免疫和基质细胞产生。IL
‑
6可作用于多种细胞，在免疫调节、炎症、造血、调节代谢和急性期反应等一系列过程中发挥重要功能。研究表明，IL
‑
6可通过多种免疫刺激机制调节宿主防御，包括诱导单核细胞向巨噬细胞的分化，调节抗原依赖的B细胞增殖和分化，增加B细胞产生IgG型抗体，并通过抑制Th1极化从而促进Th2应答。在肝脏器官，IL
‑
6可介导肝脏的急性期反应，诱导肝细胞合成C反应蛋白和纤维蛋白原。此外，作为诱发“炎症风暴”(细胞因子风暴)的重要通路，IL
‑
6在炎症免疫反应中处于中心地位，具体表现为在术后、病原体例如新型冠状病毒感染、免疫异常疾病及某些肿瘤性疾病中，IL
‑
6的表达早于其他细胞因子明显升高，持续时间较长，是急性感染早期诊断和预后判断的灵敏指标，通过对IL
‑
6水平的动态观察，还可实时了解疾病进展并指导治疗。
[0003]目前，对IL
‑
6的检测主要通过免疫学反应在蛋白质水平上或借助PCR技术在基因转录水平上对IL
‑
6进行定量。前者是临床常用的检测方法，该方法简单快速，对检测设备或平台要求不高，但存在灵敏度、准确度低等问题，可能导致“假阳/阴性”情况的发生。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一组用于检测IL
‑
6的特异性引物对和探针，还在于提供一种免核酸提取实时荧光定量PCR检测方法。
[0005]本专利技术提供一种成套试剂，由名称为IL
‑
6的引物对和名称为IL
‑6‑
P的探针组成，所述IL
‑
6由名称分别为IL
‑6‑
F和IL
‑6‑
R的单链DNA组成；
[0006]所述IL
‑6‑
F为如下(a1)或(a2)：
[0007](a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
[0008](a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；
[0009]所述IL
‑6‑
R为如下(a3)或(a4)：
[0010](a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
[0011](a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；
[0012]所述IL
‑6‑
P的核苷酸序列为如下(a5)或(a6)：
[0013](a5)序列表的序列3；
[0014](a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有
相同功能的序列。
[0015]其中，所述IL
‑6‑
P的两端分别带有荧光报告基团和荧光淬灭基团。所述IL
‑
P的5'末端具有荧光报告基团FAM，3'末端具有荧光淬灭基团BHQ
‑
1。
[0016]上述IL
‑
6也应在本专利技术的保护范围之内。
[0017]所述成套试剂或权利要求1中所述IL
‑
6的应用，为如下(b1)或(b2)：
[0018](b1)检测待测样本中是否含有IL
‑
6；
[0019](b2)制备用于检测待测样本中是否含有IL
‑
6的试剂盒。
[0020]上述成套试剂中，所述IL
‑6‑
F、所述IL
‑6‑
R、所述IL
‑6‑
P均可独立包装。所述IL
‑6‑
F、所述IL
‑6‑
R、所述IL
‑6‑
P的摩尔比可为1:1:1。
[0021]本专利技术还要求保护一种试剂盒，包括所述成套试剂或所述IL
‑
6；所述试剂盒的功能为检测待测样本中是否含有IL
‑
6。
[0022]本专利技术还提供一种检测待测样本是否含有IL
‑
6的方法，包括：以待测样本为模板，采用所述成套试剂进行实时荧光PCR并检测荧光信号，如果显示阳性扩增曲线、待测样本含有或疑似含有IL
‑
6，如果不显示阳性扩增曲线、待测菌不含有或疑似不含有IL
‑
6。
[0023]其中，所述实时荧光PCR的反应体系为:每25体积份数的反应液中包括：15体积分数的RT
‑
PCR Reaction Mix；1体积分数的Enzyme Mix；1体积分数的IL
‑6‑
F；1体积分数的IL
‑6‑
R；1体积分数的IL
‑6‑
P；2
‑
2.5体积分数的待测样品；其余为DNase&RNase
‑
free H2O。
[0024]其中，所述RT
‑
PCR Reaction Mix和Enzyme Mix来自卡尤迪生物科技(北京)有限公司的通用型免核酸提取QRT
‑
PCR试剂盒。
[0025]上述待测样本为咽拭子、血液或者血浆。
[0026]相较于免疫学检测，本专利技术的基于PCR技术的检测方法具有灵敏度高、特异度高、准确度高的特点，在早期检测中发挥更大效能。
附图说明
[0027]图1为实施例2中显示采用本专利技术提供的IL
‑
6引物和探针进行IL
‑
6的实时荧光定量PCR检测结果。
[0028]图2为实施例2中显示采用发表文献提供的IL
‑
6引物和探针进行IL
‑
6的实时荧光定量PCR检测结果。
[0029]图3实施例3中显示采用本专利技术提供的IL
‑
6引物和探针进行IL
‑
6的实时荧光定量PCR检测方法敏感性测试结果。
[0030]图4为实施例4中显示IL
‑
6实时荧光定量PCR方法在全血生物样品中的检测结果。
[0031]图5为实施例5中显示IL
‑
6实时荧光定量PCR方法在咽拭子生物样品中的检测结果。
具体实施方式
[0032]下面结合具体实施方式对本专利技术进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.成套试剂，包括名称为IL
‑
6的引物对和名称为IL
‑6‑
P的探针，所述IL
‑
6由名称分别为IL
‑6‑
F和IL
‑6‑
R的单链DNA组成；所述IL
‑6‑
F为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述IL
‑6‑
R为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述IL
‑6‑
P的核苷酸序列为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的序列。2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述IL
‑
P的两端分别带有荧光报告基团和荧光淬灭基团。3.根据权利要求1或2所述的成套试剂，其特征在于：还包括RT
‑
PCR Reaction Mix和Enzyme Mix。4.权利要求1中所述IL
‑
6。5.权利要求1
‑
3任一所述成套试剂或权利要求1中所述IL
‑
6的应用，为如下(b1)或(b2)：(b1)检测待测样本中是否...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玮，张小爱，王玉娜，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：