一种特异性识别Y68磷酸化ATP6V1B2蛋白的抗体及其制备方法和应用技术

本申请涉及多克隆抗体技术领域，具体公开了一种特异性识别Y68磷酸化ATP6V1B2蛋白的抗体及其制备方法和应用，所述抗体是通过磷酸化抗原肽免疫动物制备得到的。所述抗原肽的活性氨基酸序列为CHVKFPR（pY）AEIVHL，如SEQ ID NO:1所示，其中Y被磷酸化修饰。本申请的磷酸化抗原肽具有氨基酸序列简短，免疫原性强的特点，使用该抗原制备抗体的方法简单，成本低廉，可操作性强；并且获得的抗体免疫性强，特异性高，该抗体可应用于免疫印迹特异性检测Y68磷酸化ATP6V1B2蛋白，在ATP6V1B2的磷酸化功能研究方面有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及多克隆抗体，尤其是涉及一种特异性识别y68磷酸化atp6v1b2蛋白的抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

1、v-atpase复合物是存在于细胞囊泡膜上的一种质子泵，在溶酶体膜上有大量分布，它能将氢离子逆浓度梯度运输进入溶酶体内，维持溶酶体内的低ph值环境，降解细胞内病变的细胞器或外源大分子，从而保证溶酶体正常功能的发挥。溶酶体功能障碍与人类神经退行性疾病高度相关，如阿尔兹海默综合征、帕金森综合征等病人中常常伴随着溶酶体相关的病理改变，因此，对v-atpase复合物的功能研究有助于研发神经退行性疾病的治疗药物。

2、atp6v1b2蛋白是v-atpase复合物上的重要亚基，它对v-atpase复合物的正确组装和稳定性维持至关重要，是一个极具潜力的研究热点。atp6v1b2蛋白的第68位酪氨酸（y68）可被胞内激酶磷酸化修饰，磷酸化修饰对它的蛋白稳定性和功能发挥非常重要，因此，开发制备特异性识别y68磷酸化atp6v1b2蛋白的抗体有重要意义。

3、现有识别atp6v1b2蛋白的抗体，大多是使用atp6v1b2蛋白的一段氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种ATP6V1B2蛋白Y68位点磷酸化抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的活性氨基酸序列为CHVKFPR（pY）AEIVHL，如SEQ ID NO:1所示，其中Y被磷酸化修饰。

2.一种特异性识别ATP6V1B2蛋白Y68位点磷酸化的抗体，其特征在于，所述抗体是通过如权利要求1所述的磷酸化抗原肽免疫动物制备得到的。

3.一种如权利要求2所述的特异性识别ATP6V1B2蛋白Y68位点磷酸化的抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)免疫方式具体包括：将使用弗氏完全佐剂乳化抗原首次免疫动物；两周后...

【技术特征摘要】

1.一种atp6v1b2蛋白y68位点磷酸化抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的活性氨基酸序列为chvkfpr（py）aeivhl，如seq id no:1所示，其中y被磷酸化修饰。

2.一种特异性识别atp6v1b2蛋白y68位点磷酸化的抗体，其特征在于，所述抗体是通过如权利要求1所述的磷酸化抗原肽免疫动物制备得到的。

3.一种如权利要求2所述的特异性识别atp6v1b2蛋白y68位点磷酸化的抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)免疫方式具体包括：将使用弗氏完全佐剂乳化抗原首次免疫动物；两周后，使用弗氏不完全佐剂乳化抗原，进行二次免疫；一周后，使用弗氏不完全佐剂乳化抗原，进行三次免疫；一周后，使用弗氏不完全佐剂乳化抗原，进行四次免疫。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，将所述抗血清以elisa实验测定抗血清针对所述抗原肽的效价及其是否能够特异性识别所述磷酸化抗原肽，利用亲和分离-亲和纯化循环技术对抗血清进行纯化，通过免疫印迹实验确定抗血清是否能够特异性识别磷酸化atp6v1...

【专利技术属性】
技术研发人员：董钦才，宋采薇，曹诚，刘萱，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：