用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其应用制造技术

本发明专利技术涉及植物的分子生物学鉴定技术领域，具体而言，涉及用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其应用。本发明专利技术通过分析苗药夜寒苏ITS2基因，设立刺夜寒苏特异性引物探针，拟建立一种准确、快速、简便可检测苗药夜寒苏植物的实时荧光PCR检测方法，可为苗药夜寒苏种质资源鉴定及质量标准的制定供一定依据。资源鉴定及质量标准的制定供一定依据。资源鉴定及质量标准的制定供一定依据。

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其应用


[0001]本专利技术涉及植物的分子生物学鉴定
，具体而言，涉及用于鉴定夜寒苏的引物探针组合产品及其应用。

技术介绍

[0002]姜花属(姜科)又被称为野姜花，约有87个种类，主要分布在中国、印度、和南亚。姜花属植物因其在造纸业、观赏植物、香水、化妆品、医药和食品方面的普遍使用而被广泛栽培。目前姜花属植物也被作为一种传统中药材用于治疗胃病、流行性感冒、支气管炎、腹泻、哮喘、恶心呕吐、毒蛇咬伤和利什曼病。它富含的挥发油成分也被表明含有抗菌、抗氧化、抗细胞毒性、抗乙酰胆碱酯酶、抗炎性、治疗糖尿病、镇痛、保肝和杀虫等多种生物活性。
[0003]夜寒苏(Rhizoma hedychii)取自姜花属植物姜花(Hedychium coronarium Koen)和黄姜花(Hedychium flavum Roxb.)根茎的多来源药物，常见于我国西南地区，在贵州黔东南、黔南、贵阳、遵义等地区均有分布。夜寒苏性温、味微苦辛、无毒，具有补肾虚、祛风除湿、温中散寒、解表发汗的功效，贵州苗族民间早于20世纪70年代就将该药多用于治疗消化不良、胃气虚弱、体弱自汗、风湿筋骨疼痛、头痛身痛、感冒、寒湿白带、跌打损伤等症状。现有研究表明夜寒苏挥发油的研究表明其主要含α－蒎烯、β－蒎烯、二羟丙茶碱E、E
‑
橙花叔醇1，8－桉油素、芳樟醇等物质，这些物质是具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等的重要生物活性物质。尽管夜寒苏已作为传统苗药应用于各种疾病治疗，然而目前尚未被《中国药典》《地方标准》所收录，没有明确的质量控制标准。夜寒苏外形酷似食用生姜，对夜寒苏的生物性鉴别主要集中在性状鉴别、显微鉴别及挥发油等化学成分鉴别中，然而传统鉴别分析方法都存在一定局限性。因此，找到一种快速高效的鉴别分析方法在夜寒苏的种质资源鉴别中仍然具有很大的潜力。
[0004]随着分子生物学的快速发展，分子生物分析技术因其灵敏度高、快速、准确的优势，在植物育种、生物分类学研究、种质资源保护、种群遗传图谱构建和系统发育分析方面发挥了重要作用。但现有技术中还未有行之有效的鉴别夜寒苏的方法。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及一种引物探针组合产品，包括核苷酸序列为SEQ ID NO：1～2所示的引物对和SEQ ID NO：3所示的探针。
[0007]本专利技术还涉及一种含有如上所述组合产品的试剂盒。
[0008]本专利技术还涉及一种鉴定夜寒苏源性成分的方法，包括：
[0009]获取怀疑含有夜寒苏源性成分的待检测样品中的DNA；
[0010]以所述DNA为模板，使用如上所述组合产品，或如上所述的试剂盒进行扩增，若发生特异性扩增，则表明含有夜寒苏源性成分。
[0011]本专利技术通过分析苗药夜寒苏ITS2基因，设立刺夜寒苏特异性引物探针，拟建立一
种准确、快速、简便可检测苗药夜寒苏植物的实时荧光PCR检测方法，可为苗药夜寒苏种质资源鉴定及质量标准的制定供一定依据。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0013]图1为本专利技术一个实施例所提供的引物对18SrRNA F/R对夜寒苏的Taqman实时荧光PCR扩增结果；
[0014]A：YHS001；B：YHS002；C：YHS003；D：YHS004；E：J001；F：J002；G：Blank；
[0015]图2为本专利技术一个实施例所提供的夜寒苏特异性Taqman实时荧光PCR方法扩增结果；
[0016]A：YHS001；B：YHS002；C：YHS003；D：YHS004；E：J001；F：J002；G：Blank；
[0017]图3为本专利技术一个实施例夜寒苏实时荧光PCR方法灵敏度的确定；
[0018]A：21.1ng/μL；B：2.11ng/μL；C：0.211ng/μL；D：0.0211ng/μL；E：0.00211ng/μL；F：Blank；
[0019]图4为本专利技术一个实施例对市售夜寒苏成分检测结果；
[0020]A：市售夜寒苏1；B：市售夜寒苏2；C：市售夜寒苏3；D：市售夜寒苏4；E：市售夜寒苏5；F：市售夜寒苏6；G：市售夜寒苏7；H：市售夜寒苏8；I：市售夜寒苏9；J：市售夜寒苏10；K：Blank。
具体实施方式
[0021]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0022]除非另有说明，用于披露本专利技术的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本专利技术所属领域普通技术人员所通常理解的相同。通过进一步的指导，随后的定义用于更好地理解本专利技术的教导。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0023]本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括
A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
[0024]本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。
[0025]本专利技术中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。
[0026]本专利技术中涉及浓度数值，其含义包括在一定范围内的波动。比如，可以在相应的精度范围内波动。比如2％，可以允许
±
0.1％范围内波动。对于数值较大或无需过于精细控制的数值，还允许其含义包括更大波动。比如100mM，可以允许
±
1％、
±...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物探针组合产品，包括核苷酸序列为SEQ ID NO：1～2所示的引物对和SEQ ID NO：3所示的探针。2.根据权利要求1所述的组合产品，所述探针标记有信号物质。3.根据权利要求2所述的组合产品，所述探针为自身淬灭探针。4.根据权利要求3所述的组合产品，所述探针的荧光发射基团独立地选自AMCA、Pacific Blue、Atto 425、BODIPY FL、FAM、Alexa Fluor 488、TET、JOE、Yakima Yellow、VIC、HEX、Quasar 570、Cy3、NED、TAMRA、ROX、Aqua Phluor593、Texas Red、Atto 590、Cy5、Quasar 670、Cy5.5以及Cy5.5中的任一种。5.根据权利要求4所述的组合产品，所述探针的淬...

【专利技术属性】
技术研发人员：任永超，宋云，潘鸿广，李炎琪，陈贵，许倩，卿云光，任永奇，
申请(专利权)人：黔南布依族苗族自治州检验检测院，
类型：发明
国别省市：