一种心肌缺血损伤标志物CAPG及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种心肌缺血损伤标志物CAPG及其应用。本发明专利技术通过在心梗小鼠模型尾静脉注射AAV9

【技术实现步骤摘要】
一种心肌缺血损伤标志物CAPG及其应用


[0001]本专利技术涉及一种心肌缺血损伤标志物CAPG及其应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]研究发现，巨噬细胞加帽蛋白(CAPG)广泛参与细胞信号转导、吞噬作用、囊泡运动、细胞运动等生物学活动，CAPG最初在兔的肺泡巨噬细胞中发现。现有研究表明，CAPG具有参与肌动蛋白的调节，参与巨噬细胞中受体介导的起皱作用、吞噬作用，参与真核细胞有丝分裂等生物学功能，在肿瘤细胞中，CAPG参与的细胞信号转导、吞噬作用、囊泡运动、细胞运动等生物学活动常脱离了正常的调控，因此CAPG被认为是潜在的肿瘤形成促进因素和抗肿瘤药物作用靶点
[0003]此外，CAPG作为一种致癌基因，在胃癌、肝细胞癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤和卵巢癌中均过表达，且其过表达与肿瘤的转移和侵袭有关。Yun等研究发现，人脑胶质瘤组织中CAPG的信使RNA和蛋白水平显著升高，对CAPG过表达的U87和U251人脑胶质瘤细胞系以及CAPG敲除的U87和U251人脑胶质瘤细胞系的细胞增殖实验显示，CAPG过表达的U87和U251人脑胶质瘤细胞系增殖速度较快，而CAPG敲除处理的U87和U251人脑胶质瘤细胞系停止增殖或增殖缓慢，表明CAPG高表达可作为人脑胶质瘤预后不良的独立预后因素。Bahrami等研究发现，CAPG高表达与膀胱癌患者生存期呈负相关，CAPG在癌旁正常组织以及膀胱癌组织中均表达，并在膀胱癌组织中呈过表达，故推断CAPG过表达与膀胱癌的不良预后有关。CAPG在真核细胞有丝分裂过程中具有重要作用，可影响DNA复制过程，并具有促进细胞增殖的作用，因此，CAPG可能增强膀胱癌发生发展过程中癌细胞的侵袭力，促进癌细胞的转移，可能成为新的膀胱癌预后判断生物标志物。
[0004]然而，目前关于CAPG在心肌缺血损伤中的作用还未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是：提供CAPG在心肌缺血损伤中的新用途，为心肌缺血损伤提供一种新的治疗和诊断靶点。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了检测CAPG表达的试剂或试剂盒在制备检测心肌缺血损伤的试剂或试剂盒中的应用。
[0007]本专利技术还提供了抑制CAPG的表达和/或活性的试剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。
[0008]优选地，所述试剂包括特异性干扰CAPG基因表达的RNAi、microRNA、shRNA、siRNA、腺相关病毒载体，以及CAPG蛋白的抗体和CAPG蛋白的活性抑制剂中的至少一种。
[0009]优选地，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体为AAV9病毒，其包含如SEQ ID NO：1所示的基因序列。
[0010]优选地，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的siRNA，其序列如SEQ ID NO：2
‑
3所示。
[0011]本专利技术还提供了一种用于治疗心肌缺血损伤的药物，包括医学上可接受的载体和有效量的活性成分，所述的活性成分包括抑制CAPG的表达和/或活性的试剂。
[0012]优选地，所述试剂包括特异性干扰CAPG基因表达的RNAi、microRNA、shRNA、siRNA、腺相关病毒载体，以及CAPG蛋白的抗体和CAPG蛋白的活性抑制剂中的至少一种。
[0013]优选地，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体为AAV9病毒，其包含如SEQ ID NO：1所示的基因序列。
[0014]优选地，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的siRNA，其序列如SEQ ID NO：2
‑
3所示。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0016]1.本专利技术通过在心梗小鼠模型尾静脉注射AAV9
‑
shCAPG病毒，发现下调CAPG的表达可以改善心梗后的心肌细胞凋亡与心功能，本专利技术首次揭示了巨噬细胞加帽蛋白(CAPG)作为心肌缺血损伤的治疗靶点和诊断靶点的新用途，为心肌缺血损伤的诊断和治疗提供了新的药物作用靶点，具有十分重要的临床转化价值；
[0017]2.CAPG作为心肌缺血损伤的诊断标志物，可以采用现有的酶联免疫检测试剂盒方便地检测CAPG蛋白的表达，具有检测迅速的优点，且只需抽取病人的微量外周静脉血即可实现方便地检测。
附图说明
[0018]图1展示了与健康对照组相比，心梗病人血清中CAPG蛋白表达显著上调；
[0019]图2展示了与假手术对照组相比，心梗小鼠不同时间点血清中CAPG蛋白表达情况；
[0020]图3展示了小鼠心梗7天后的心脏超声检测结果；
[0021]图4展示了小鼠心梗7天后的Masson染色结果和心肌梗死面积统计结果；
[0022]图5展示了小鼠心梗3天后Tunel染色结果；
[0023]图6展示了乳鼠原代心肌细胞12小时缺氧诱导下，通过检测心肌细胞凋亡蛋白表达情况检测干扰CAPG对心肌细胞凋亡的影响；
[0024]图7展示了乳鼠原代心肌细胞12小时缺氧诱导下，通过Tunel染色检测干扰CAPG对心肌细胞凋亡的影响；
[0025]图8展示了乳鼠原代心肌细胞、成纤维细胞缺氧处理12h后CAPG的表达情况；con：常氧对照组；hypo:缺氧处理组；
[0026]图9展示了通过检测心肌细胞凋亡蛋白表达情况分析缺氧成纤维细胞分泌的CAPG对心肌细胞凋亡的影响；Control(CON)：常氧心肌细胞对照组；DMEM：缺氧12hDMEM培养基处理心肌细胞组；siNC上清组：(si
‑
scram(siNC)转染的成纤维细胞缺氧12h的上清处理心肌细胞组；siCAPG上清组：成纤维细胞转染si
‑
CAPG缺氧12h的上清，处理的心肌细胞组。
[0027]图10展示了通过Tunel染色检测成纤维细胞分泌的CAPG对心肌细胞凋亡的影响；Con：常氧心肌细胞对照组；DMEM：心肌细胞缺氧12h，加入DMEM培养基；siNC(si
‑
scram)：心肌细胞缺氧12h，加入siNC成纤细胞上清；si
‑
CAPG：心肌细胞缺氧12h，加入siCAPG成纤维上清。
具体实施方式
[0028]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0029]实施例
[0030]一、实验方法与试剂：
[0031]1.Western Blot实验
[0032](1)配置SDS聚丙烯酰胺凝胶:将干净的玻璃板置于配胶架中，加入少量ddH2O，验漏，配置10％浓度的分离胶，灌胶后立刻用无水乙醇压平液面，室溫下聚合，待分离胶完全聚合后，倒出覆盖层液体，用ddH2O轻轻清洗干净，配置5％的浓缩胶，混匀后迅速灌胶，立即插入梳子，注意不要有气泡。
[0033](2)上样:将梳子轻轻的从凝固的浓缩胶中拔出，用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测CAPG表达的试剂或试剂盒在制备检测心肌缺血损伤的试剂或试剂盒中的应用。2.抑制CAPG的表达和/或活性的试剂在制备治疗心肌缺血损伤的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括特异性干扰CAPG基因表达的RNAi、microRNA、shRNA、siRNA、腺相关病毒载体，以及CAPG蛋白的抗体和CAPG蛋白的活性抑制剂中的至少一种。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体为AAV9病毒，其包含如SEQ ID NO：1所示的基因序列。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为特异性干扰CAPG基因表达的siRNA，其序列如SEQ ID NO：2
‑
3所示。6.一种用于治疗心肌缺血损伤的药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚惠，邹云增，戴宇翔，姜红，尹超，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：