用于鉴定可移植的组织样品的IgG亚型测定制造技术

本公开内容涉及用于评估从脊椎动物(例如人)供体获得的组织对移植到受者(例如相同物种的另一种脊椎动物)的适合性的方法。该方法包括使从供体获得的白细胞与来自受者的血清接触。评估受者抗体和白细胞之间的结合，特别关注与供体白细胞结合的IgG抗体的亚型。检测到亚型IgG1和IgG3的受者抗体之间的结合表明供体组织不适合移植到受者。检测到亚型IgG2和/或IgG4的受者抗体之间的结合表明供体组织可以适当地移植到受者。可以适当地移植到受者。可以适当地移植到受者。

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定可移植的组织样品的IgG亚型测定
[0001]本申请是申请日为2016年12月5日、申请号为201680080808.2、专利技术名称为“用于鉴定可移植的组织样品的IgG亚型测定”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]专利技术背景
[0003]本专利技术一般涉及器官和组织移植领域，更具体地涉及用于匹配供体组织和受者的程序，如果组织被移植到受者，所述受者的身体不会排斥组织。
[0004]器官和组织从供体体内移植到受者体内已成为一种相对常见的手术。由于脊椎动物免疫系统的基本功能(即，提醒身体“非自身”材料并帮助消除这种非自身材料)，组织不能简单地从给定物种的一个个体的身体移植进入同一物种的任何其他个体的体内而没有免疫并发症的可能性。如果移植的组织与受者的免疫系统不相容，则受者的免疫系统可以对移植的组织产生反应，从而破坏移植的组织。为了避免这种移植排斥，可以采用两种基本策略。首先，可以抑制受者的一种或多种免疫功能，从而减轻或消除针对移植物的免疫应答。其次，可以筛选和匹配移植物和受者，以减少针对移植物的受者免疫应答的可能性和/或严重性。本文描述的主题主要针对该第二策略，尽管这两种策略不是相互排斥的
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两者都可以用于相同的移植。
[0005]人们早就知道脊椎动物组织中的细胞在其表面上表达抗原，并且这些抗原可以在相同物种的个体之间显著变化。例如，人细胞在其表面上展示称为人白细胞抗原(HLA)的蛋白质。对于任何个体，由个体的细胞显示的HLA被个体的免疫系统识别为“自身”，并且个体的免疫系统不(通常)对其自身细胞产生免疫应答。然而，由不同个体人显示的HLA可以变化很大，以至于通常不由个体细胞表达的HLA，例如移植组织的HLA，可以被个体的免疫系统识别为“非自身”，从而导致针对移植组织的免疫反应。如果针对移植组织发起的免疫应答足够严重以诱导大多数或所有移植细胞的死亡或足够的移植细胞外物质的破坏，则移植的组织可能不能表现出作为移植原因的所需功能或性质。也就是说，如果针对移植组织的受者免疫应答足够严重，则导致移植的目标可能无法实现。
[0006]受者的身体可以产生的抵抗移植组织的一种类型的免疫应答取决于受者身体产生的抗体与移植组织表面上展示的抗原(例如，HLA)的结合。抗体与其相应抗原之间的特异性结合可以催化反应(“补体结合”)，其导致诱导针对移植组织的有效细胞毒性免疫应答。分析受者免疫系统组分检测供体组织为“非自身”并产生细胞毒性反应的能力并选择供体
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受者对以避免此类反应通常称为“交叉配型”，并在文献中进行了广泛讨论(见例如，Mulley等，2011，Nephrology 16：125
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133)。
[0007]一种已知的交叉配型技术涉及使从潜在移植组织的供体获得的淋巴细胞与从移植组织的建议受者获得的血清接触。血清包括在受者血液中循环的抗体。如果受者的血清包括与供体淋巴细胞上出现的抗原特异性结合的抗体，则可以检测到这种结合。在称为“流式交叉配型”的一种常见检测技术中，将供体淋巴细胞与受者血清接触一段时间，之后通过分离淋巴细胞和血清并用过量试剂冲洗淋巴细胞除去未结合的抗体。然后使淋巴细胞与能够检测受者抗体的标记试剂接触(例如，与人抗体结合的荧光抗体，任选特定类型的抗体，例如IgM或IgG，或亚型，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，然后从淋巴细胞中冲洗未结合的标
记试剂。通过将淋巴细胞悬浮在流体中并使其通过能够检测标记试剂标记的流式细胞仪来检测受者抗体与供体淋巴细胞的结合。通过流式细胞仪检测标记物和淋巴细胞(例如，检测对应于荧光素的荧光)表明被标记试剂识别的一种或多种受者抗体与淋巴细胞结合。这种结合的受者抗体通常称为“抗供体抗体”(ADAb)。如果进行多个流式交叉配型反应，每个使用对不同受者抗体类型和/或亚型具有特异性的标记试剂，则可以开发存在于潜在受者血清中的ADAb的类型和亚型的概况。
[0008]已经观察到ADAb类型和亚型可以影响移植组织被受者排斥的可能性。例如，Mulley等人认识到IgG4不会激活补体，并且使用供体白细胞检测到的ADAb仅为IgG4亚型的潜在受者可能不太可能在体内激活补体(即，表明可能是合适的供体
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受者配对)。Cicciarelli等报道了可比较的观察结果(美国专利申请公开号2010/0261203)。Gao等人(2014，Am.J.Transplant.14(7)：1581
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1591)认识到与凋亡细胞反应的亚型IgG1和IgG3的IgG抗体更可能导致移植肾的晚期排斥，这些作者认为是可归因于IgG1和IgG3亚型的补体结合能力。然而，先前的工作人员检查了抗原包被的珠子和受者血清中的抗体之间的结合，该测定可能是费力的并且不一定表明受者抗体和供体细胞之间的相互作用。
[0009]需要能够快速且准确地确定潜在组织移植物对植入个体受者(或其上)的适合性的改进的交叉配型测定法。本公开内容描述了这样的测定。
[0010]
技术实现思路
概述
[0011]本专利技术涉及评估潜在供体的身体组织与受者的移植相容性的方法。该方法包括使从潜在供体获得的白细胞与从受者获得的抗体接触。就至少IgG亚型IgG1和IgG3评估潜在供体白细胞与受者抗体之间的结合。如果检测到供体白细胞与IgG亚型IgG1和IgG3中任一种的受者抗体之间基本上没有结合，则评估身体组织与受者相容。本专利技术还涉及包括这种评估方法的组织移植程序。
[0012]在评估方法中，优选针对至少IgG亚型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4中的每一种评估供体白细胞与受者抗体之间的结合，优选使用可区别地识别亚型的差异标记的抗体，并且优选地在单个测定混合物中进行。如果需要，评估方法还可以包括使供体白细胞与差异标记的抗体接触，所述抗体可区别地识别供体的B和T细胞。在将供体白细胞与受者抗体接触后，可以通过流式细胞术评估个体供体白细胞与抗体和/或与其结合的标记。
[0013]评估方法适用于脊椎动物的受者，优选为人。
[0014]可以使用已知试剂抑制受者抗体和供体白细胞上的Fc受体之间的非特异性结合。供体白细胞在与从受者获得的抗体接触时优选是活的。
[0015]附图简述
[0016]图1是说明本文实施例5中描述的实验结果的结果的表。
[0017]图2是说明本文实施例6中描述的实验结果的结果的表。
[0018]详细说明
[0019]本公开内容涉及用于使来自供体的组织与该组织的合适受者交叉配型的方法。该方法涉及确定含有从受者获得的抗体的样品(例如从受者血液制备的血清)中存在的抗供体IgG亚型。
[0020]供体组织可以是已经从活体或最近死亡的脊椎动物(例如人类供体)收集(并且可能存储和/或冷冻)的组织，或者它可以是仍然是供体候选者的一部分的组织。在任何这些
情况下，从其收集或将来可能收集组织或从其尸体收集或将来可能收集组织的个体在本文中称为“供体”。交叉配型方法通常在供体组织从供体收集之后进行；然而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种将从脊椎动物供体获得的组织移植到受者的方法，该方法包括：将从供体获得的白细胞与从受者获得的抗体接触，评估供体白细胞与至少IgG亚型IgG1和IgG3的受者抗体之间的结合，和如果检测到供体白细胞与IgG亚型IgG1和IgG3中的任一种的受者抗体之间基本上没有结合，则将供体组织移植到受者。2.权利要求1的方法，包括评估供体白细胞与至少IgG亚型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的受者抗体之间的结合。3.权利要求2的方法，其中在单个测定中进行供体白细胞与IgG亚型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4中的每一种的受者抗体之间的结合的评估。4.权利要求1的方法，其中通过使受者抗体与特异性识别IgG1和IgG3亚类的抗体的差异标记的抗体接触来进行供体白细胞与抗体之间的结合的评估。5.权利要求1的方法，其中通过使受者抗体与可区别地识别IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类的抗体的差异标记的抗体接触来进行供体白细胞与抗体之间的结合的评估。6.权利要求5的方法，还包括使供体白细胞与可区别地识别供体的B和T细胞的差异标记的抗体接触。7.权利要求1的方法，其中在使供体白细胞与受者抗体接触后，通过流式细胞术评估个体供体白细胞。8.权利要求1的方法，其中在使供体白细胞与受者抗体接触后和在使受者抗体与可区别地识别IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类的抗体的差异标记的抗体接触后，通过流式细胞术评估个体供体白细胞。9.权利要求1的方法，其中在使供体白细胞与受者抗体接触后，在使受者抗体与可区别地识别IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类的抗体的差异标记的抗体接触后，和在使供体白细胞与可区别地识别供体的B和T细胞的差异标记的抗体接触后，通过流式细胞术评估个体供体白细胞。10.权利要求1的方法，其中所述受者是脊椎动物。11.权利要求10的方法，其中所述受者是与供体相同的物种。12.权利要求11的方法，其中所述受者是人。13.权利要求1的方法，其中受者抗体与供体白细胞上的Fc受体之间的非特异性结合被抑制。14.权利要求13的方法，其中通过在供体白细胞与受者抗体接触之前使供体白细胞与抑制抗体和表面Fc受体之间的结合的肽接触来抑制非特异性结合。15.权利要求1的方法，其中供体白细胞在与受者抗体接触时是活的。16.一种评估潜在供体的身体组织与受者的移植相容...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：NJ共享网络公司，
类型：发明
国别省市：