一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及试剂盒技术领域，且公开了一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，所述试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人免疫球蛋白E的含量，试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体。该特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE(一抗)就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂呈蓝色，加终止液后呈黄色。显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。血清中特异性IgE的浓度。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及试剂盒
，具体为一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]定性和定量检测过敏原特异性人IgE.过敏反应是
‑‑‑
种特殊的病理性免疫反应，是人体对一种或多种原本无害的物质产生不正常的反应。其主要原因是患者吸入或食入含有过敏性物体刺激机体，触发细胞大量:分泌药理适性物质，引起
‑
系烈过敏症状，例如过敏性哮喘，过敏性鼻炎，湿疹、发痒、流泪、皮炎以及肠置道过敏症等e同时产生相当量的E型兔疫球白,引起人类过敏反应的过敏原种类繁多，如能从中查到引起机体过敏的物质，就能很好地预防和治疗过敏反应，为此我们提出了一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

[0003](一)解决的技术问题
[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，具备能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度的优点，解决了上述
技术介绍
中所提出的问题。
[0005](二)技术方案
[0006]本专利技术提供如下技术方案：一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，所述试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人免疫球蛋白E的含量，试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验，往预先包被人免疫球蛋白E捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的人免疫球蛋白E呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。
[0007]优选的，所述血清的处理要求如下：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000
×
g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于
‑
20℃或
‑
80℃保存，但应避免反复冻融。
[0008]优选的，所述血浆的处理要求如下：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2
‑
8℃1000
×
g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于
‑
20℃或
‑
80℃保存，但应避免反复冻融。
[0009]优选的，所述组织匀浆的处理要求如下：用预冷的PBS(0.01M,pH＝7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，
于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000
×
g离心5～10分钟，取上清检测。
[0010]优选的，细胞培养物上清液或其它生物标本的处理要求如下：请1000
×
g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于
‑
20℃或
‑
80℃保存，但应避免反复冻融。
[0011]优选的，所述试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
[0012]优选的，所述操作步骤如下：
[0013]S1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
[0014]S2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
[0015]S3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加；
[0016]S4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，再用水浴锅或恒温箱温育60min；
[0017]S5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；
[0018]S6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
[0019]S7、每孔加入终止液50μL，并在450nm波长处测定各孔的OD值；
[0020]S8、以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
[0021]与现有技术相比，本专利技术提供了一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，具备以下有益效果：
[0022]1、该特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE(一抗)就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂呈蓝色，加终止液后呈黄色。显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。
[0023]2、该特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，该试剂盒是一种用酶联免疫法(ELISA)快速、精确测定体内引起过敏反应的特异E型免疫球蛋白的体外诊断工具。它可定性和定量地测定人体抗特种过敏原的E型免疫球蛋白在血清中的水平，从而帮助医生正确地诊断引起病人过敏反应的过敏原。本过敏原检测盒适合广泛的过敏原检测，特别适用于少儿患者，同时也非常适用于湿疹以及其他皮肤病患者和对皮试过敏的患者。
附图说明
[0024]图1为本专利技术结构示意图。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]请参阅图1，一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒及其使用方法，试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人免疫球蛋白E的含量，试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验，往预先包被人免疫球蛋白E捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的人免疫球蛋白E呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。
[0027]血清的处理要求如下：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000
×
g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于
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20℃或
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80℃保存，但应避免反复冻融；血浆的处理要求如下：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人免疫球蛋白E的含量，试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验，往预先包被人免疫球蛋白E捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色的深浅和样品中的人免疫球蛋白E呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算样品浓度。2.根据权利要求1所述的一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述血清的处理要求如下：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000
×
g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于
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20℃或
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80℃保存，但应避免反复冻融。3.根据权利要求1所述的一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述血浆的处理要求如下：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2
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8℃1000
×
g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于
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20℃或
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80℃保存，但应避免反复冻融。4.根据权利要求1所述的一种特异性IgE抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述组织匀浆的处理要求如下：用预冷的PBS(0.01M,pH＝7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹彤旻，朱科，
申请(专利权)人：湖南浩欧博生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：