检测白血病抑制因子的试剂盒及检测方法技术

本公开涉及检测白血病抑制因子的试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。该试剂盒能有效消除样本中的干扰而获得准确的结果。有效消除样本中的干扰而获得准确的结果。

【技术实现步骤摘要】
检测白血病抑制因子的试剂盒及检测方法


[0001]本公开涉及血液分析领域，特别涉及用于检测白血病抑制因子的试剂盒以及白血病抑制因子的检测方法。

技术介绍

[0002]人类白血病抑制因子(hLIF)是一种具有多种生物活性并对不同细胞类型均有影响的白细胞介素6型细胞因子，是一种具有202个氨基酸的多肽。与其他白细胞介素家族成员类似，白血病抑制因子(LIF)与含有GP130的受体复合物结合，激活类似的信号级联，如STAT3的磷酸化通路。已有研究证明，LIF的高表达水平和高血清水平在多种癌症的不良预后判断中具有一定的辅助作用。在胰腺导管腺癌中LIF是活化胰腺星状细胞，并激活癌细胞STAT3磷酸化的关键旁分泌因子。药理学上的LIF阻断和基因上的受体缺失都可以显著减缓肿瘤的进展，并增强化疗有效性。
[0003]然而还未见检测LIF的免疫学测定试剂盒在售。
[0004]因此，有必要提供利用免疫学方法准确检测LIF的试剂盒以及检测方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本公开意在提供一种检测白血病抑制因子的试剂盒及方法。该试剂盒利用免疫夹心法能够更准确检测白血病抑制因子，并且在存在干扰的情况下，特别是存在异嗜性抗体(HA)和/或自身抗体干扰的情况下下，能够有效抗干扰，而避免假性结果，或者偏高或偏低的不准确结果。
[0006]本公开的第一方面提供一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
[0007]第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；
[0008]第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；
[0009]发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和
[0010]抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。
[0011]根据一种实施方式，所述第一试剂与所述抗干扰剂以混合形式提供在所述试剂盒中作为混合试剂。
[0012]所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为100～1000μg/mL，且所述吐温20 的浓度为100～1000μg/mL。优选地，所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为300～700μg/mL，且所述吐温20的浓度为300～700μg/mL。
[0013]根据一种实施方式，固定相为超顺磁性微粒。
[0014]根据一种实施方式，所述标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶和荧光素。优选所述标记物为碱性磷酸酶。
[0015]根据一种较优的实施方式，所述标记物为碱性磷酸酶，且所述发光底物为AMPPD。
[0016]本公开的第二方面提供一种检测人类白血病抑制因子LIF的方法，包括：
[0017]将一定量的第一试剂、抗干扰剂、第二试剂混合和样本混合均匀得到第一反应液，并孵育3～10分钟；
[0018]分离出固定相；
[0019]向所述固定相中加入一定量发光底物液混合均匀得到第二反应液，并孵育10～20分钟；
[0020]检测所述第二反应液中产生的光子数，其中所测得的光子数与所述样本中LIF的含量成正比。
[0021]其中所述第一试剂、所述第二试剂、所述抗干扰剂和所述发光底物液分别如以上所定义。
[0022]根据一种实施方式，所述方法进一步包括：将所测得的光子数与标准曲线比对，以获得样本中LIF含量。
[0023]所述样本为血清或血浆。
[0024]本公开提供的试剂盒包括能够与人LIF不同表位结合的两种抗体，通过双抗体夹心法能够更准确检测到样本中的LIF。此外，所述试剂盒中还包括抗干扰剂，通过鼠IgG和吐温20的配合能够很好地消除样品中干扰物对检测的影响，特别对异嗜性抗体干扰以及自身抗体干扰有优异的效果。因此，所述试剂盒能够对不同受试者的样本中的LIF进行准确的检测。
具体实施方式
[0025]下面将结合实施方式和实施例，对本公开的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的具体实施方式仅仅是一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于这些实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
[0027]在文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的方法或者产品不仅包括所明确记载的要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为实施所述方法或者产品所固有的要素。
[0028]除非另有说明，否则如在本文中所使用的单数形式“一个/种”和“该/所述”包括所指名词的复数。
[0029]除非另有说明，否则在本文中所使用的％指质量百分数。
[0030]基于白血病抑制因子(LIF)的多种生理学活性，预期抑制LIF可产生抗肿瘤的效果。因此，在多种疾病，特别是针对癌症的治疗药物的研究中，LIF相关的研究是热点研究之一。正常健康个体中LIF的典型血浆或血清浓度为0
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10pg/ml之间。但是，由于抗体/配体复合物的清除比游离配体的清除慢，因此一旦细胞因子与抗体结合，血浆中总LIF的水平可能会增加。对血液中存在的LIF进行准确检测能够辅助相关疾病的研究并监测治疗效果。
[0031]本专利技术人对众多样本中的LIF进行检测发现，LIF的检测容易受到样本中的干扰物影响，而出现假性结果，或者显著偏高或偏低的结果，影响临床应用。因此，本专利技术人提出了一种能够抗干扰的LIF检测试剂盒。该试剂盒采用双抗体免疫夹心法，利用化学发光体系进行检测，能够有效抗干扰而获得准确的结果。
[0032]根据本公开，提供一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒。所述试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；第二试剂，所述第二试剂含有具有酶标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。
[0033]根据一种优选的实施方式，抗干扰剂与第一试剂以混合试剂形式提供在所述试剂盒中。
[0034]所述试剂盒中包括两种抗人LIF抗体可以与LIF的不同免疫原性部位或表位结合，形成抗体
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LIF
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抗体的夹心结构。具体来说，第一抗人LIF抗体与固定相结合，以便于在后续步骤中进行分离；第二抗人LIF抗体则连接着标记物，该标记物后续能够与发光底物液中的发光底物结合，产生化学发光，以便于检测。所述试剂盒适用于免疫夹心检测法。首先，样本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒，其中所述试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述第一试剂与所述抗干扰剂以混合形式提供在所述试剂盒中作为混合试剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为100～1000μg/mL，且所述吐温20的浓度为100～1000μg/mL。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为300～700μg/mL，且所述吐温20的浓度为300～700μg/mL。5.根据权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其中固定相为超...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹永彤，孟祥征，周允，赵伟，李可，段卓男，
申请(专利权)人：中日友好医院中日友好临床医学研究所，
类型：发明
国别省市：