一种主动脉夹层诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种主动脉夹层诊断试剂盒，属于诊断试剂盒的领域，其中组合使用赖氨酰氧化酶(LOX)、V型胶原α1链蛋白(COL5A1)、五聚素(PTX，特别是PTX3)，可对主动脉夹层进行快速、高效、灵敏、高特异性的诊断。高特异性的诊断。

【技术实现步骤摘要】
一种主动脉夹层诊断试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种主动脉夹层诊断试剂盒。

技术介绍

[0002]主动脉夹层是一种隐匿性极强、危险性极高的疾病。根据以往报道，主动脉夹层的死亡率被严重低估，并且多数主动脉夹层患者在急性期死亡。据统计，主动脉夹层患者的死亡率在发病后每一小时增加1％，在发病一周内高达60％～70％，3个月内可达90％以上。我国主动脉夹层患者年龄比西方发达国家平均低10～20岁，主要发病人群为50岁左右的青壮年人群，多伴有慢性心血管疾病(其中高血压患者约为50％～70％)。当前，我国有相当多的主动脉夹层患者无法得到及时、有效的诊治，由此可能导致多种并发症的发生，例如急性心包压塞、急性心肌梗死、卒中、腹腔脏器缺血等，更严重者会危及生命。因此，针对主动脉夹层的早期诊断和治疗尤为重要。大多数患者发现主动脉夹层时即为夹层发作时，呈现突发性胸痛或胸背部疼痛。这一症状与急性心肌梗死和急性肺栓塞的表现相似，因而临床上不易在第一时间对这三种疾病进行鉴别，需通过D
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二聚体、胸片、CTA、主动脉造影等多项检查进行区别。然而这些检查或特异性不强，或耗时长且价格昂贵，均可能对患者生理和心理造成一定的影响。因此，目前急需足够特异且灵敏的产品可以针对主动脉夹层的急性期进行快速诊断、对其严重程度进行评估、甚至可对夹层的发生发展起到预判与提示的作用。

技术实现思路

[0003]本专利技术的专利技术人长期致力于主动脉夹层形成的病理机制研究。然而，现有技术中对于主动脉夹层并不存在公认的快速、特异且灵敏的主动脉夹层诊断分子标志物，因此对专利技术人的研究工作带来了很大的挑战。专利技术人意外地发现，赖氨酰氧化酶(LOX)、V型胶原α1链蛋白(COL5A1)、五聚素(PTX，特别是PTX3)同时在主动脉夹层患者的外周血中高表达。这三种分子的能够反映主动脉夹层发生发展中重要的病理变化，将这三种分子组合使用作为诊断试剂盒，可对主动脉夹层进行快速、高效、灵敏、高特异性的诊断。另外，在前述三种分子的基础上进一步组合使用肌腱蛋白C(TNC)或微纤丝关联蛋白(MFAP，特别是MFAP2)时，可进一步提高检测的特异性和灵敏性。
[0004]因此，本专利技术涉及一种试剂盒，其中含有赖氨酰氧化酶(LOX)、V型胶原α1链蛋白(COL5A1)、五聚素(PTX)。
[0005]在一个具体实施方案中，所述五聚素为PTX1、PTX2、PTX3或PTX4，优选PTX3。
[0006]在一个具体实施方案中，所述试剂盒还含有肌腱蛋白C(TNC)。
[0007]在一个具体实施方案中，所述试剂盒还含有微纤丝关联蛋白(MFAP)，其例如为MFAP1、MFAP2、MFAP3、MFAP4或MFAP5，优选为MFAP2。
[0008]本专利技术还涉及前述任一种试剂盒在制备用于诊断主动脉夹层的装置中的用途。
附图说明
[0009]图1：不同基因在主动脉夹层患者与正常人的主动脉细胞中表达情况的对比
[0010]图2：不同蛋白在不同组患者外周血中的表达的ELISA测试结果，其中*表示p<0.05，**表示p<0.01
具体实施方案
[0011]本文所述的赖氨酰氧化酶(LOX)、V型胶原α1链蛋白(COL5A1)、五聚素(PTX)、肌腱蛋白C(TNC)、微纤丝关联蛋白(MFAP)，在本领域中均具有公知且确切的含义，但现有技术中均没有任何将其用于主动脉夹层的诊断的报道。
[0012]具体地，赖氨酰氧化酶(LOX)是一种促进组织中细胞外基质正确交联的酶，已知其与肿瘤细胞生长相关。COL5A1是细胞外基质中必要的胶原蛋白组成成分，有报道称由于它的突变造成的其蛋白结构的不稳定可导致Ehlers
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Dalnos综合征的形成。五聚素(PTX)是一种炎症相关的蛋白，具有PTX1、PTX2、PTX3、PTX4等亚型，有报道称PTX3与感染和败血症相关。肌腱蛋白C(TNC)是细胞外基质的成分，有报道称其与胰腺癌、儿童脑干神经胶质瘤、结肠直肠癌等癌症相关。微纤丝关联蛋白(MFAP)也是细胞外基质的成分，具有MFAP1、MFAP2、MFAP3、MFAP4、MFAP5等亚型，有报道称MFAP2与胃癌和乳头状甲状腺癌相关。
[0013]本文所述“特异性”，是指通过该试剂盒能够准确地判断患者患有主动脉夹层，并且该判断结果不受其它疾病的影响。为了实现高特异性的诊断，本专利技术的试剂盒中所使用的分子一方面要在主动脉夹层患者和健康人中显示出表达的差异，另一方面在主动脉夹层患者和其它心血管疾病患者中也要有表达的差异，这样结合所使用的多种蛋白的测试结果(例如，当本专利技术的试剂盒中所使用的各分子均显示出阳性时)，才能够准确地得出患者是否患有主动脉夹层的结论，而不会得到假阳性或假阴性的结果。
[0014]以下实施例载明了本专利技术的具体实施方案，并验证了本专利技术所取得的效果。应理解下述实施例仅起到例示作用，本专利技术的技术方案不限于该实施例。
[0015]实施例
[0016]1.材料及试剂
[0017]人赖氨酰氧化酶(LOX)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0018]人V型胶原α1链(COL5A1)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0019]人五聚素3(PTX3)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0020]人肌腱蛋白C(TNC)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0021]人微纤丝关联蛋白(MFAP2)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0022]解整合素样金属蛋白酶12(ADAM12)ELISA试剂盒：购自Proteintech公司
[0023]THY1细胞表面抗原(THY1)ELISA试剂盒：购自CUSABIO公司
[0024]除上述外，本实施例所用的其它材料和试剂也均为市售产品。
[0025]2.实验方法和结果
[0026]2.1.初步筛选
[0027]根据专利技术人此前已获得的单细胞测序数据，专利技术人初步确定了与主动脉夹层可能有关的目标基因，并在此基础上利用FindAllMarkers算法初步筛选了在主动脉夹层患者细胞中特异性高表达的基因，包括LOX、COL5A1、PTX3、MFAP2、TNC、ADAM12、THY1。在此分析过程
中，于正常组与夹层组之间q值大于0.05的基因则会被过滤掉。
[0028]如图1所示，与正常主动脉细胞相比，前述各分子在主动脉夹层患者细胞中的表达显著更高。
[0029]2.2.人主动脉标本免疫组化染色
[0030]对相对正常的主动脉组织石蜡切片和主动脉夹层标本的石蜡切片进行了免疫组化实验。
[0031]具体地，将石蜡切片于68℃烘片1小时，脱蜡至水，用pH 7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟。然后用适量pH 9.0的EDTA缓冲液将切片进行高压修复(高压锅出气后计时2分钟)。高压锅流水自然冷却，从缓冲液中取出玻本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，其中含有赖氨酰氧化酶、V型胶原α1链蛋白、五聚素。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述五聚素为PTX3。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其还含有肌腱蛋白C。4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王利，陈奕男，姚芳，
申请(专利权)人：青岛百洋智心科技有限公司，
类型：发明
国别省市：