一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法。属于提取技术领域。本发明专利技术以人工养殖的鲟鱼皮为研究对象，用酶法制备鲟鱼皮胶原蛋白肽，研究得出酶法制备的最佳工艺条件为：酶添加量6000U/g，料液比1:5，酶解温度60℃，酶解时间7h。进一步研究了鲟鱼皮蛋白肽的分离纯化工艺及理化性质，结果表明使用3kDa的超滤膜进行分离得到的蛋白肽对ACE的抑制率最高。本发明专利技术为鲟鱼皮胶原蛋白进一步的理论和应用研究奠定了基础。定了基础。定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及提取
，更具体的说是涉及一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法。

技术介绍

[0002]史氏鲟(学名：Acipenser schrenckii)，又叫黑龙江鲟，个体大、寿命长、幼鱼成活率高，其鱼体细长呈细纺锤形，裸露无鳞，背有5行大的菱形骨板，幼鱼骨板带有尖棘，为软骨硬鳞鱼；身体背部棕灰色或褐色，幼鱼为黑色或浅灰色，腹部均为白色，鱼皮和鱼骨中均富含胶原蛋白，因此可作为天然优质胶原蛋白的提取原料。史氏鲟是鲟鱼中最具有经济价值的优质珍稀鱼类。史氏鲟是最古老的鱼类，与恐龙同年代，均起源于亿万年前白垩纪的时代，因此被美称为“活化石”。鲟鱼的肌肉中含有10多种人体必需的氨基酸，对于软化心脑血管、预防老年痴呆具有良好的功效。集观赏、美食、营养、滋补、药用于一体。
[0003]现有技术中，提取鲟鱼皮胶原蛋白及胶原肽的常见技术有：酸提取法、碱提取法、盐溶液提取法、热提取法和酶提取法。酸碱提取过程会破坏胶原蛋白原有结构，且提取介质易残留；盐提取过程会降低胶原蛋白的构象稳定性，不利于提取；热提取效率较低，得到的产品分子量较大，不具备胶原蛋白原有功能。
[0004]综上，如何提供一种提取过程高效且具有有效生物活性的鲟鱼皮蛋白肽是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法。本专利技术采取的酶提取法，操作简单不易破坏多肽的螺旋结构，基本无环境污染且蛋白肽纯度较高。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)鲟鱼皮预处理；
[0009](2)鲟鱼皮依次经除杂蛋白、脱脂处理；
[0010](3)清洗烘干后进行酶解处理，其中酶使用碱性蛋白酶，酶添加量6000U/g，料液比1:5(即鲟鱼皮与酶溶液的质量体积比为1:5g/mL)，酶解温度60℃，酶解时间7h；
[0011](4)灭酶处理，之后离心、真空抽滤；
[0012](5)利用3kDa的超滤膜进行分离，得到分子量小于3kDa的组分；
[0013](6)依次经旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥得到蛋白肽。
[0014]所取得的有益效果：本专利技术制备的鲟鱼皮蛋白肽，主要分子量在2.1k Da以内，且提取的鲟鱼皮蛋白肽对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制率最高能达到96.2％，具有很好的降血压效果，作为一种潜在的降血压抑制剂可广泛用于多肽药物研发及临床医疗、食品保健等领域。
[0015]由于本专利技术制备的鲟鱼皮蛋白肽分子量较小，对于小分子量蛋白肽需采用合适的超滤膜进行截留，如小于2k Da分子量的蛋白肽需要通过3k Da超滤膜截留。过大或过小的
超滤膜操作时，料液中的溶质易截留在膜表面，致使膜通量降低。若强行增大超滤膜设备压力，会加速大分子溶质沉积，造成膜孔堵塞并有损膜元件。
[0016]进一步的，步骤(1)中所述预处理的具体操作为：取新鲜冷冻鲟鱼皮，于10℃下解冻，刮掉鲟鱼皮下脂肪，经清洗过后晒干，晒干之后将鲟鱼皮剪成1cm
×
1cm
×
1cm大小的小块状。
[0017]进一步的，步骤(2)中所述除杂蛋白的具体操作为：将经预处理的鲟鱼皮以1:15(g/mL)的料液比加入0.1mol/L的NaOH，4℃浸泡12h。
[0018]进一步的，步骤(2)中所述脱脂的具体操作为：以1:15(g/mL)的料液比加入0.5％的NaHCO3，4℃浸泡8h。
[0019]进一步的，步骤(4)所述灭酶为100℃处理10min。
[0020]进一步的，步骤(4)所述离心的参数为8000r/min离心15min。
[0021]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：本专利技术方法可有效除去鲟鱼皮98.59％脂肪含量，制备得到的鲟鱼皮蛋白肽纯度达到95％以上。蛋白肽主要分子量分布范围在2.1kDa内，且<3k Da的蛋白肽在5mg/mL浓度下的ACE抑制率最高可达96.2％，具有较好的降血压活性。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0023]图1为本专利技术对比例1不同酶处理对酶解鲟鱼皮底物水解度DH和ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0024]图2为本专利技术对比例2不同加酶量对酶解鲟鱼皮底物水解度DH和ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0025]图3为本专利技术对比例3不同酶解温度对酶解鲟鱼皮底物水解度DH和ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0026]图4为本专利技术对比例4不同料液比对酶解鲟鱼皮底物水解度DH和ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0027]图5为本专利技术对比例5不同酶解时间对酶解鲟鱼皮底物水解度DH和ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0028]图6为本专利技术对比例6超滤各组分肽浓度对ACE抑制率的影响，其中不同字母表示存在显著差异(p＞0.05)；
[0029]图7为本专利技术实施例3鲟鱼皮蛋白肽的紫外吸收光谱；
[0030]图8为本专利技术实施例3中鲟鱼皮蛋白肽分子量。
具体实施方式
[0031]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于
本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0032]实施例中所用试剂和仪器如下：
[0033]表1试剂与材料
[0034][0035]实验用水为超纯水。
[0036]实验材料：新鲜冷冻史氏鲟鱼皮。
[0037]表2仪器与设备
[0038][0039][0040]实施例1
[0041]鲟鱼皮基本成分测定。
[0042]取新鲜冷冻鲟鱼皮，于10℃下解冻，含水量为68.47％，刮掉鲟鱼皮下脂肪，经清洗过后，放在自然阳光下晒干，晒干之后将鲟鱼皮剪成约1cm
×
1cm
×
1cm大小的正方形小块状。
[0043]按照国标方法测定鲟鱼皮中各种组分含量，具体方法如下：
[0044](1)蛋白质测定
[0045]蛋白质含量测定采用凯氏定氮法(GB/T5009.5
‑
2016)。
[0046](2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)鲟鱼皮预处理；(2)鲟鱼皮依次经除杂蛋白、脱脂处理；(3)清洗烘干后进行酶解处理，其中酶使用碱性蛋白酶，酶添加量6000U/g，料液比1:5，酶解温度60℃，酶解时间7h；(4)灭酶处理，之后离心、真空抽滤；(5)利用3kDa的超滤膜进行分离，得到分子量小于3kDa的组分；(6)依次经旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥得到蛋白肽。2.如权利要求1所述的一种鲟鱼皮蛋白肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述预处理的具体操作为：取新鲜冷冻鲟鱼皮，于10℃下解冻，刮掉鲟鱼皮下脂肪，经清洗过后晒干，晒干之后将鲟鱼皮剪成1cm
×
1cm
...

【专利技术属性】
技术研发人员：鉏晓艳，李海蓝，白婵，王炬光，邱亮，廖涛，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所，
类型：发明
国别省市：