一种硒多肽的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种硒多肽的提取方法，其包括改性多孔吸附树脂制备方法，所述步骤如下：L1、将苯乙烯、二乙烯基苯、丙烯酸和氨基丙烯酸酯，通过自由基聚合，得到中间产物；L2、将所述中间产物泡在1,2

【技术实现步骤摘要】
一种硒多肽的提取方法


[0001]本专利技术属于多肽提取
，具体涉及一种硒多肽的提取方法。

技术介绍

[0002]硒是人类和动物体内必需微量元素，其具有预防肿瘤和强身健体的作用。富硒大米中的硒大多数以硒蛋白的形式存在，若要进一步分解为硒多肽，则需要特定的酶去催化。如曹辉等人利用木瓜蛋白酶水解硒米，获得了具有较强还原能力的硒多肽，并证实了大米蛋白水解物是一种天然的抗氧化多肽；申衍豪等人采用五种不同的蛋白酶对大米蛋白进行水解，得到了最佳条件，并且成功获得了对人体自由基有清除作用的产物。因此，硒多肽的高效提取和获得，对科研和生活，均具有重要的作用。
[0003]收集硒多肽的前驱体——硒蛋白的方法主要有多孔吸附树脂吸附和解吸附法。目前常见的树脂为HP20树脂。一般地，将树脂进行填柱，然后让硒蛋白样品缓慢渗入并通过树脂，最后用醇溶液解吸附，收集解吸附液，经后处理得到所需要产物。然后HP20树脂产品多数被跨国外企把持，且吸附效果也具有一定的瓶颈。因此，如何采用高效的提取方法来提取硒多肽前驱体，继而获得产率高、杂质少的硒多肽产物，一直是国内科研学者追求的目标。
[0004]因此，亟需找到一种技术方法，来解决上述问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中，多数采用HP20树脂产品作为提纯硒蛋白的技术手段，本专利技术将这一成熟应用的树脂，替换为本专利技术所公开的新型苯基型的极性树脂作为吸附硒蛋白的设备。该树脂的分子结构微观上呈三维网状结构，其中含有苯环基团这一常见结构，另外同时含有少量的羧基和氨基两种极性基团，可以对硒蛋白中的相关极性基团具有优异的亲和作用，从而使得其吸附效率大大提升。值得注意的是，同时含有羧基和氨基的树脂，其吸附效果是优于仅含有一种极性基团的吸附树脂的，原因可能是两种基团同时存在具有协同效应，促进了吸附的进行。
[0006]本专利技术公开了一种硒多肽的提取方法，其包括如下步骤：
[0007]S1、将富硒碎米粉用溶剂脱脂，然后除去溶剂，加入水，得到混合原液；
[0008]S2、将所述混合原液均质，然后过筛，得到的滤液通过改性多孔吸附树脂，然后用水清洗吸附后的所述改性多孔吸附树脂再用醇溶液进行解吸附，除去所述醇溶液，得到粗蛋白；
[0009]S3、将所述粗蛋白注入固定化酶解罐中进行酶解，所得粗产物进行离心，取上清液，然后将所述上清液经干燥，得到所述硒多肽；
[0010]其中，所述改性多孔吸附树脂制备方法如下：
[0011]L1、将苯乙烯、二乙烯基苯、丙烯酸和氨基丙烯酸酯，通过自由基聚合，得到中间产物；
[0012]L2、将所述中间产物泡在1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入二甲氧基甲烷和催化剂三氯
化铁，加热反应，除去溶剂后得到改性多孔吸附树脂。
[0013]本专利技术所合成的树脂为主链为自由基方式合成的无规聚合物，其后经傅克反应接枝烷基链后形成网状的多孔型聚合物，所得聚合物球磨至粒径一般在2
‑
3mm之间；孔径约在25
‑
30nm左右；孔隙率约为45
‑
55％。
[0014]进一步地，S1步骤中，所述溶剂选自正己烷或石油醚。
[0015]进一步地，S3步骤中，所述酶解所采用的酶选自蛋白酶、纤维素酶或脂肪酶的一种或多种。
[0016]进一步地，S2步骤中，所述醇溶液选自乙醇溶液、丙醇溶液、丁醇溶液或己醇溶液。
[0017]进一步地，L1步骤中，所述苯乙烯、二乙烯基苯、丙烯酸和氨基丙烯酸酯的摩尔比为1:1:1:1
‑
1:5:0.2:0.2。
[0018]进一步地，所述固定化酶解罐中的酶解条件为：pH为8
‑
10，温度为40
‑
50℃。
[0019]进一步地，S3步骤中，所述酶解的时间为1
‑
3h。
[0020]进一步地，S2步骤中，所述过筛的目数为400
‑
600目。
[0021]进一步地，L2步骤中，所述加热的温度为80
‑
100℃，加热的时间为12
‑
20h。
[0022]本专利技术具有以下有益技术效果：
[0023]本专利技术所公开的硒多肽的提取方法，经富硒碎米脱脂、树脂吸附和解吸附、酶解，所得硒多肽提取效率高；且纯度高，硒多肽的硒含量高，提取效果好。这主要是因为本专利技术的吸附树脂与硒蛋白结构相似，且具有良好的比表面积和孔隙率，从而对硒蛋白有高效的吸附。
具体实施方式
[0024]以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0025]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0026]本专利技术所涉及的富硒米粉采购自吉首市富硒米粉加工厂，采购回来后粉碎至粒径更小的颗粒使用；
[0027]本专利技术所涉及的固定化酶解罐为50L，采购自安徽晨翔瑞达机械有限公司。
[0028]本专利技术所涉及的HP20树脂，采购自日本三菱化学。
[0029]实施例1
[0030]一种硒多肽的提取方法，其包括如下步骤：
[0031]S1、将富硒碎米粉泡在正己烷中，脱脂4h，然后除去溶剂，自然风干，加入水，得到混合原液；
[0032]S2、将所述混合原液用均质机均质，然后过200目的筛，得到的滤液取30ml，过改性多孔吸附树脂装填的柱子(直径为10cm，高度为1m)，然后用水清洗吸附后的所述改性多孔吸附树脂若干次，再用乙醇溶液(50wt％)进行解吸附，减压蒸馏除去所述醇溶液，得到粗蛋白；
[0033]S3、将所述粗蛋白注入固定化酶解罐中，用碱性蛋白酶，在pH＝8、温度为40℃的条件下，进行酶解，所得粗产物用离心机进行高速离心，取上清液，最后将上清液冷冻干燥，得到产物硒多肽；
[0034]其中，所述改性多孔吸附树脂制备方法如下：
[0035]L1、将苯乙烯、二乙烯基苯、丙烯酸和氨基丙烯酸酯按规定的物质的量投料(苯乙烯:二乙烯基苯:丙烯酸:氨基丙烯酸酯＝1:5:0.2:0.2，n/n/n/n)，在催化量的BPO和溶剂水的反应条件下，90℃下反应6h，得到中间产物；
[0036]L2、将所述中间产物50g，泡在50ml的1,2
‑
二氯乙烷中，然后加入30g二甲氧基甲烷和20g的催化剂三氯化铁，在90℃下反应6h，除去溶剂后，用乙醇洗涤，得到改性多孔吸附树脂。
[0037]实施例2
[0038]一种硒多肽的提取方法，其包括如下步骤：
[0039]S1、将富硒碎米粉泡在石油醚中，脱脂4h，然后除去溶剂，自然风干，加入水，得到混合原液；
[0040]S2、将所述混合原液用均质机均质，然后过200目的筛，得到的滤液取30ml，过改性多孔吸附树脂装填的柱子(直径为12cm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种硒多肽的提取方法，其特征在于，所述硒多肽的提取方法包括如下步骤：S1、将富硒碎米粉用溶剂脱脂，然后除去溶剂，加入水，得到混合原液；S2、将所述混合原液均质，然后过筛，得到的滤液通过改性多孔吸附树脂，然后用水清洗吸附后的所述改性多孔吸附树脂再用醇溶液进行解吸附，除去所述醇溶液，得到粗蛋白；S3、将所述粗蛋白注入固定化酶解罐中进行酶解，所得粗产物进行离心，取上清液，然后将所述上清液经干燥，得到所述硒多肽；其中，所述改性多孔吸附树脂制备方法如下：L1、将苯乙烯、二乙烯基苯、丙烯酸和氨基丙烯酸酯，通过自由基聚合，得到中间产物；L2、将所述中间产物泡在1,2
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二氯乙烷中，然后加入二甲氧基甲烷和催化剂三氯化铁，加热反应，除去溶剂后得到改性多孔吸附树脂。2.根据权利要求1所述硒多肽的提取方法，其特征在于，S1步骤中，所述溶剂选自正己烷或石油醚。3.根据权利要求1所述硒多肽的提取方法，其特征在于，S3步骤中，所述酶解所采用的酶选自蛋白酶、纤维素酶或脂肪酶的一种或多种。4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：李相钊，张中庆，
申请(专利权)人：山东至善硒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：