一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，特点是包括将水产动物蛋白酶解肽溶液与螯合金属化合物溶液按1:4～1:2混合后，置于高压均质机中加压直至压力达200~300 kg/cm2后，将溶液通过间隙为0.05~0.1 mm的狭缝以500~1000m/s的速度高速撞向不锈钢板，狭缝出口端的压力为大气压，收集狭缝出口端溶液，重复高压射流操作50~100次，得到金属螯合肽溶液，再加入无水乙醇产生絮凝，离心除去上清液，将沉淀物用无水乙醇洗涤离心后烘干，得酶解水产动物蛋白金属螯合，优点是螯合率高，螯合温度低且时间短。螯合温度低且时间短。

【技术实现步骤摘要】
一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及螯合肽
，尤其是涉及一种一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法。

技术介绍

[0002]利用水产蛋白资源如鱼肉、鱼皮、鱼鳞、鱼肝、鱼骨胶等，经酶解制备成寡肽，再在高温下与金属离子如锌、铁、钙进行螯合，制备金属螯合肽可以提高水产资源的附加值，开发各种营养强化食品的常用手段。
[0003]蛋白质与金属离子的螯合通常在水溶液中进行，当蛋白质与金属离子盐溶液反应到一定时间，加入乙醇后离心便可获得。蛋白肽的团聚，除受pH影响外，还与肽链长度、温度等有关。一般水产动物蛋白利用酶解技术降低了肽链的长度，然后通过超声波的辅助及提高温度促进蛋白肽运动，减缓蛋白肽的团聚，以提高蛋白金属螯合肽的螯合率。但超声波的空爆作用不强，同时过高温度也会使蛋白肽变性而促进团聚。因此，目前的技术螯合率低，且螯合温度高、时间长。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种螯合率高，螯合温度低且时间短的提高水产动物蛋白酶解肽金属螯合率的方法。
[0005]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，包括以下步骤：（1）水产动物蛋白酶解肽溶液的制备取水产动物蛋白加入蛋白质量2～4倍的去离子水后，用NaOH调pH至碱性，然后加入蛋白酶，于45
±
2 ℃下酶解4 h，接着升温至90 ℃以上，保温20 min灭酶后，4000
‑
6000 r/mim 离心10
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20min，收集上层清液并冷冻干燥，得到粉末，将粉末用pH为7.0~7.5的Tris
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HCl缓冲液溶解得到质量浓度为5 % ~ 6 %的水产动物蛋白酶解肽溶液；（2）螯合金属化合物溶液的制备将取待螯合的金属化合物用pH为7~8的Tris
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HCl缓冲液溶解得到质量浓度为5 % ~ 6 %的螯合金属化合物溶液；酶解水产动物蛋白肽一般有二个等电点，酸性侧等电点一般在pH 5.0~5.5,碱性侧等电点一般在pH 9.0~9.5，酶解水产动物蛋白肽的pH越接近等电点，蛋白肽越易团聚，与金属离子的接触表面积就越小，其螯合率就越低。用去离子水配制酶解水产动物蛋白肽使其pH值呈中性，远离了酶解水产动物蛋白肽二个等电点，但随着蛋白肽与金属离子的结合，溶液的pH会不断下降而缓慢接近蛋白肽酸性侧等电点，从而导致蛋白肽的金属螯合率较低。本专利技术用Tris
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HCl缓冲液代替去离子水配制酶解水产动物蛋白肽及螯合金属化合物溶液，溶液的pH值在整个螯合阶段都处于7.0~7.5，从而提高了蛋白肽的金属螯合率；（3）金属螯合肽溶液的制备
将水产动物蛋白酶解肽溶液与螯合金属化合物溶液按1:4～1:2混合后，置于高压均质机中加压直至压力达200~300 kg/cm2后，将溶液通过间隙为0.05~0.1 mm的狭缝以500~1000m/s的速度高速撞向不锈钢板，狭缝出口端的压力为大气压，收集狭缝出口端溶液，重复高压射流操作50~100次，得到金属螯合肽溶液；采用反复高压射流法促进蛋白肽与金属离子的结合，利用射流阶段可形成的剪切力将团聚蛋白肽剪散，利用射流末端压力的瞬间下降形成空爆将团聚蛋白炸散，利用射流末端与不锈钢板的强烈碰撞将团聚蛋白肽撞散，提高了与金属离子的接触表面积，从而提高了金属螯合肽螯合率。同时，该技术常温下可螯合，且螯合时间大大缩短；（4）金属螯合肽的分离纯化将金属螯合肽溶液中加入溶液6
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10倍体积的无水乙醇，产生絮凝，在4000
‑
5000 r/min的转速下离心5
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15 min，除去上清液，将沉淀物用无水乙醇洗涤离心1
‑
2次后，置于40
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50℃电热鼓风干燥箱中烘干，得酶解水产动物蛋白金属螯合肽。
[0006]进一步，所述的蛋白酶为胰蛋白酶和地衣芽孢杆菌蛋白酶，所述的胰蛋白酶和所述的地衣芽孢杆菌蛋白酶的用量均为1000～3000 U/g。
[0007]进一步，所述的水产动物蛋白肉为鲐鱼、鲣鱼或马鲛鱼。
[0008]进一步，所述的金属为锌、铁或铜。
[0009]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，该方法用Tris
‑
HCl缓冲液代替去离子水配制酶解水产动物蛋白肽及螯合金属化合物溶液从而提高了蛋白肽的金属螯合率，进一步采用反复高压射流法促进蛋白肽与金属离子的结合，从而进一步提高了金属螯合肽螯合率。同时，本方法可常温下螯合，且螯合时间大大缩短。
具体实施方式
[0010]以下结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。具体实施例
[0011]一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，包括以下步骤：（1）水产动物蛋白酶解肽溶液的制备取水产动物肉加入肉质量2～4倍的去离子水后，用NaOH调pH至碱性，然后加入蛋白酶，于45
±
2 ℃下酶解4 h，接着升温至90 ℃以上，保温20 min灭酶后，4000
‑
6000 r/mim 离心10
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20min，收集上层清液并冷冻干燥，得到粉末，将粉末用pH为7.0~7.5的Tris
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HCl缓冲液溶解得到浓度为5 % ~ 6 %的水产动物蛋白酶解肽溶液；其中蛋白酶为胰蛋白酶和地衣芽孢杆菌蛋白酶，胰蛋白酶和所述的地衣芽孢杆菌蛋白酶的用量均为1000～3000 U/g（2）螯合金属化合物溶液的制备将取待螯合的金属化合物用pH为7~8的Tris
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HCl缓冲液溶解得到质量浓度为5 % ~ 6 %的螯合金属化合物溶液；（3）金属螯合肽溶液的制备将水产动物蛋白酶解肽溶液与螯合金属化合物溶液按1:4～1:2体积比混合后，置于高压均质机中加压直至压力达200~300 kg/cm2后，将溶液通过间隙为0.05~0.1 mm的狭缝以500~1000m/s的速度高速撞向不锈钢板，狭缝出口端的压力为大气压，收集狭缝出口端
溶液，重复高压射流操作50~100次，得到金属螯合肽溶液；（4）金属螯合肽的分离纯化将金属螯合肽溶液中加入溶液6
‑
10倍体积的无水乙醇，产生絮凝，在4000
‑
5000r/min的转速下离心5
‑
15 min，除去上清液，将沉淀物用无水乙醇洗涤离心1
‑
2次后，置于40
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50℃电热鼓风干燥箱中烘干，得酶解水产动物蛋白金属螯合肽。
[0012]实施例1一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，包括以下步骤：取鲐鱼暗色肉酶解肽冻干肽粉，用pH为7.2的Tris
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HCl缓冲液配制质量浓度为5.35 %的鲐鱼暗色肉酶解肽溶液，并用pH为7.2的Tris
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HCl缓冲液配制质量浓度为5.35 % ZnSO4溶液，按ZnSO4溶液：鲐鱼本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酶解水产动物蛋白金属螯合肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）水产动物蛋白酶解肽溶液的制备取水产动物蛋白加入蛋白质量2～4倍的去离子水后，用NaOH调pH至碱性，然后加入蛋白酶，于45
±
2 ℃下酶解4 h，接着升温至90 ℃以上，保温20 min灭酶后，4000
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6000 r/mim 离心10
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20min，收集上层清液并冷冻干燥，得到粉末，将粉末用pH为7.0~7.5的Tris
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HCl缓冲液溶解得到质量浓度为5 % ~ 6 %的水产动物蛋白酶解肽溶液；（2）螯合金属化合物溶液的制备将取待螯合的金属化合物用pH为7~8的Tris
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HCl缓冲液溶解得到质量浓度为5 % ~ 6 %的螯合金属化合物溶液；（3）金属螯合肽溶液的制备将水产动物蛋白酶解肽溶液与螯合金属化合物溶液按1:4～1:2混合后，置于高压均质机中加压直至压力达200~300 kg/cm2后，将溶液通过间隙为0.05~0.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：程永发，王玥，林邦楚，李勇勇，付世骞，王焙，莫雨珂，李玉霜，刘梦晴，娄永江，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：