本发明专利技术公开了荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法。本发明专利技术提供了氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：P1、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达产量；P2、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达效率；P3、制备猴痘病毒A29L抗原分泌蛋白制品。本发明专利技术采用信号肽引导猴痘病毒A29L真核细胞分泌表达，其中荧光素酶信号肽Ga引导猴痘病毒A29L抗原分泌表达水平显著优于白蛋白信号肽Al和抗体轻链信号肽Lc，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。降低生产成本。
【技术实现步骤摘要】
荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法
[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及荧光素酶信号肽的应用及含有荧光素酶信号肽的融合蛋白及其制备方法。
技术介绍
[0002]1958年发现一种痘病毒在实验猕猴身上导致一种类似人类天花的疾病，因此称为猴痘病毒。1970年首次在刚果一名9岁男孩身上发现猴痘病毒，症状为水疱或脓疱疹，传染性弱于天花。此后，猴痘病例不断在刚果、中非和西非等地区发现。2022年5月，新一轮的“猴痘”疫情最先在英国发现，已经遍及英国、葡萄牙、西班牙、澳大利亚、德国、法国等多个国家。目前，“猴痘”病毒疫情仍趋于蔓延态势，因此受到多个国家卫生监管部门的关注。
[0003]猴痘病毒基本的感染形态为成熟病毒粒子(mature virion，MV)，除此之外，还有一种形态：成熟病毒粒子外还包绕有一层来源于内质网膜的脂质膜(extracellular enveloped，EV)。其中，A29L抗原为猴痘病毒成熟病毒粒子的膜蛋白，也是重要的免疫靶点之一。因此，如何制备A29L蛋白成为猴痘病毒检测试剂或疫苗的关键产品研发的亟待解决的问题。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的主要问题是如何制备猴痘病毒A29L抗原。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种荧光素酶信号肽(信号肽Ga，SEQ ID No.1)，信号肽Ga可引导猴痘病毒A29L抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于白蛋白信号肽(信号肽Al)和抗体轻链信号肽(信号肽Lc)。
[0006]本专利技术首先提供了氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：
[0007]P1、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达产量中的应用；
[0008]P2、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达效率中的应用；
[0009]P3、制备猴痘病毒A29L抗原分泌蛋白制品中的应用；
[0010]所述相关生物材料为SEQ ID No.1所述多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。
[0011]在本专利技术的具体实施方式中，所述重组载体为将SEQ ID No.7所示DNA片段(SEQ ID No.5的第16
‑
66位为信号肽Ga的编码基因，即SEQ ID No.2)插入到pCGS3载体的多克隆位点(如HindIII和PacI)后得到的重组质粒。
[0012]进一步地，所述宿主细胞可为真核宿主细胞，如：HEK293细胞，CHO细胞，酵母细胞和昆虫细胞等。
[0013]在本专利技术的具体实施方式中，所述宿主细胞具体为Expi293F细胞。
[0014]进一步地，所述编码基因可为如下任一：
[0015](a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；
[0016](a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子；
[0017](a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。
[0018]上述蛋白质中，同源性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
[0019]上述蛋白质中，所述95％以上的同源性可为至少96％、97％或98％的同一性。所述90％以上的同源性可为至少91％、92％、93％或94％的同一性。所述85％以上的同源性可为至少86％、87％、88％或89％的同一性。所述80％以上的同源性可为至少81％、82％、83％或84％的同一性。
[0020]本专利技术还提供了一种融合蛋白。
[0021]本专利技术提供的融合蛋白为将SEQ ID No.1所述多肽融合于SEQ ID No.3所述猴痘病毒A29L抗原的N端得到的蛋白质。
[0022]进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
127位或SEQ ID No.5第1
‑
132位。
[0023]SEQ ID No.5的第1
‑
17位为信号肽Ga(即SEQ ID No.1)，第18
‑
127位为所述猴痘病毒A29L抗原，第128
‑
132位为Linker接头，第133
‑
138位为组氨酸标签。
[0024]本专利技术还提供了编码上述融合蛋白的核酸分子。
[0025]进一步地，所述核酸分子自5
’
端到3
’
端依次由上述多肽的编码基因和猴痘病毒A29L抗原的编码基因组成。
[0026]更进一步地，所述多肽的编码基因可为如下任一种：
[0027](a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；
[0028](a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；
[0029](a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。
[0030]更进一步地，所述猴痘病毒A29L抗原的编码基因可为如下任一种：
[0031](b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；
[0032](b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；
[0033](b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子。
[0034]更加具体地，所述核酸分子可为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.7、SEQ ID No.7的第1
‑
396位或SEQ ID No.7的第1
‑
411位。
[0035]SEQ ID No.7的第1
‑
6位为HindIII识别位点，7
‑
15位为Kozak序列，16
‑
66位为荧光
素酶信号肽Ga编码基因，第67
‑
396位为A29L抗原编码基因，第397
‑
411位为连接本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：P1、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达产量中的应用；P2、提高猴痘病毒A29L抗原在宿主细胞中的分泌表达效率中的应用；P3、制备猴痘病毒A29L抗原分泌蛋白制品中的应用；所述相关生物材料为所述多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重组载体或重组菌或转基因细胞系。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述宿主细胞为真核细胞。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述编码基因为如下任一：(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ ID No.1所示多肽的DNA分子；(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。4.融合蛋白，为将权利要求1中所述的多肽融合于猴痘病毒A29L抗原的N端得到的蛋白质。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
127位或SEQ ID No.5的第1
‑
132位。6.编码权利要求4或5所述融合蛋白的核酸分子。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子由所述多肽的编码基因和所述猴痘病毒A29L抗原的编码基因组成；所述多肽的编码基因为如下任一：(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；...
【专利技术属性】
技术研发人员：张静静，邢体坤，安文琪，宋路萍，王亚萍，
申请(专利权)人：华兰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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