【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体而言，涉及抗cldn18.2全人源单克隆抗体fab2片段的抗体对、试剂盒和应用。
技术介绍
1、胃癌是起源于胃粘膜上皮的恶性肿瘤，随着人们饮食结构的改变和工作压力的增加，胃癌的发病率逐年上升，据调查全球每年有100万新发生胃癌患者，美国约35％初次诊断罹胃癌的患者为转移性胃癌。cldn18.2蛋白是一种cd29样分化的蛋白，属于claudin蛋白质家族的一员，位于细胞膜表面，正常情况下仅低水平表达于胃粘膜分化上皮细胞，但在病理状态下，claudin18.2在多种肿瘤中往往出现异常高的表达，包括80％的胃肠道腺瘤、60％的胰腺肿瘤，因此是具有潜力治疗癌症的热门靶点。cldn18.2含有暴露的胞外环，可用于单克隆抗体结合，目前cldn18.2抗体已经被用于治疗癌症的研究中，对临床上胃癌病人血液里血药浓度的变化情况的检测以及临床试验指导意义重大。
2、血药浓度是指药物吸收后在血浆内的总浓度，包括与血浆蛋白结合的或者在血浆中游离的药物，也可泛指药物在全血中的浓度。监测病人血液中的血药浓度能够防止药物在体内浓度过高而产生毒副作用或检测药物的疗效，能够指导临床选择适合不同个体的最佳治疗方案和最合适的治疗剂量。目前血药浓度监测的方法包括光谱法、色谱法和免疫法，但这几种监测方法灵敏度低、特异性差、操作步骤繁琐，耗时较长，或者受到仪器的限制而不能广泛应用到临床上。鉴于此，开发出一种稳定的血药浓度检测方法和合适的检测试剂显得尤为重要。
技术实现思路
1、为解决上述问
2、本专利技术提供了抗cldn18.2全人源单克隆抗体fab2片段的抗体对，包括含有轻链和重链的第一抗体，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列分别与seqid no.1或seq id no.3一致或者编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列与seq id no.2或seq id no.4一致。
3、优选的，还包括第二抗体，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列分别为seqid no.1、seq id no.3；编码所述第二抗体的轻链、重链的核酸序列分别为seq id no.2、seq id no.4。
4、所述cldn18.2全人源单克隆抗体为已公开专利cn202080068747.4中的靶向cldn18.2的抗体。
5、本专利技术提供了所述抗体对的核酸，其与seq id no.1～seq id no.4任一项所示的核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列。优选的，所述抗体对的核酸包括seqid no.1～seq id no.4任一项所示的核苷酸序列，或与seq id no.1～seq id no.4任一项所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与seq id no.1～seq idno.4所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列。
6、本专利技术中所述的核酸可以是dna、rna、cdna或pna。在本专利技术实施例中，所述核酸为dna形式。所述dna形式包括cdna、基因组dna或人工合成的dna。所述dna可以是单链的或是双链的。核酸可以包括具有不同功能的核苷酸序列，如编码区和非编码区如调控序列(例如启动子或转录终止子)。
7、本专利技术提供了表达单元，其包括启动子、终止子和本专利技术所述的核酸。
8、本专利技术中还提供了含有所述的核酸或所述的表达单元的转录单元，所述转录单元是指启动子开始至终止子结束的dna序列。启动子和终止子两侧或之间还可包括调控片段，所述调控片段可以包括与核酸序列可操作地连接的启动子、增强子、转录终止信号、多腺苷酸化序列、复制起点、核酸限制性位点、和同源重组位点，例如启动子的增强子，poly(a)信号等。
9、本专利技术提供了表达载体，其包括：载体骨架和本专利技术所述的核酸；或载体骨架和本专利技术所述的表达单元。本专利技术所述的表达载体，是指重组载体或核酸载体，是一种重组dna分子，其包含期望的编码序列和对可操作连接的编码基因在具体宿主生物内的表达所必不可少的合适的核酸序列或元件。
10、本专利技术还提供了宿主，其包括如下i)～iii)所示中的至少一种：
11、i)分泌如本专利技术所述的抗体对；
12、ii)基因组整合如本专利技术所述的核酸或如本专利技术所述的表达单元；
13、iii)转染或转化如本专利技术所述的表达载体。
14、本专利技术中表达载体转染或转化进入宿主；所述转化的方法为化学转化和电转化，所述转染的方法为磷酸钙共沉淀、人工脂质体法、病毒转染。所述的病毒转染包括腺病毒转染、腺相关病毒转染、慢病毒转染中的任一种。相关制备方法均为现有技术，在此不进行赘述。
15、进一步的，本专利技术所述宿主包括真菌细胞或动物细胞。所述真菌细胞包括霉菌、酵母，所述酵母包括啤酒酵母、酿酒酵母、毕赤酵母和假丝酵母等。所述动物细胞包括人、鼠、兔、猪、斑马鱼等。优选的，所述宿主为293f细胞或者cho细胞。
16、本专利技术提供了所述抗体对的制备方法，通过培养本专利技术所述的宿主以获得所述抗体对。
17、本专利技术提供了所述的抗体对、核酸、表达单元、表达载体、宿主在制备检测癌症病人血液中血药浓度的产品中的应用。
18、本专利技术还提供了检测胃癌病人血药浓度的elisa试剂盒，其包括本专利技术所述的抗体对和可接受的试剂或载体。所述的可接受的试剂包括包被液、洗涤液、稀释液、显色剂和/或终止剂；所述的载体为固相载体，包括聚氯乙烯微孔滴定板、聚苯乙烯微孔滴定板、聚丙酰胺微孔滴定板和/或纤维素微孔滴定板。
19、优选的本专利技术所述的试剂盒包括由seq id no.1、seq id no.3分别编码的轻链、重链形成的第一抗体以及由seq id no.2、seq id no.4分别编码的轻链、重链形成的第二抗体，所述第一抗体为检测抗体，其标记有生物素且浓度为0.1ug/ml，所述第二抗体为捕获抗体且浓度为1ug/ml。
20、作为本专利技术的一个示例，所述试剂盒的制备方法为：将捕获抗体稀释后2-8℃包被过夜，弃去板内液体后洗板，加入封闭液孵育1h洗板，加稀释后的样本孵育1h，弃去板内液体后洗板，加入酶标抗体孵育1h洗板，加入二抗孵育1h洗板，最后加入显色液显色。在本专利技术所述的制备方法中，洗板时洗涤剂为每次200ul/孔。
21、本专利技术提供的方法可为诊断目的的，也可为非诊断目的的。例如，包括对人体或动物体，或者离体的来自于人体或动物体的样品进行的以诊断为目的检测方法；也包括对模拟样品进行的以科研或其他非诊断目的检测方法。
22、相对于现有技术，本专利技术所述用于定量分析胃癌病人血药浓度的抗体对具有下述有益效果：1)可用于快速检测胃癌病本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗CLDN18.2全人源单克隆抗体Fab2片段的抗体对，包括含有轻链和重链的第一抗体，其特征在于，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列分别与SEQID NO.1或SEQ ID NO.3一致或者编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列分别与SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4一致。
2.根据权利要求1所述的抗体对，其特征在于，还包括第二抗体，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3；编码所述第二抗体的轻链、重链的核酸序列分别为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4。
3.编码权利要求1或2所述抗体对的核酸，其包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4任一项所示的核苷酸序列。
4.表达单元，其特征在于，其包括启动子、终止子和权利要求3所述的核酸。
5.表达载体，其特征在于，包括：载体骨架和权利要求3所述的核酸；或载体骨架和权利要求4所述的表达单元。
6.宿主，其特征在于，其包括如下I)～III)所示中的至少一种
7.检测胃癌病人血药浓度的ELISA试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的抗体对和可接受的试剂或载体。
8.根据权利要求7所述的ELISA试剂盒，其特征在于，包括由SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3分别编码的轻链、重链形成的第一抗体以及由SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4分别编码的轻链、重链形成的第二抗体，所述第一抗体为检测抗体，其标记有生物素且浓度为0.1ug/mL，所述第二抗体为捕获抗体且浓度为1ug/mL。
9.权利要求8所述的ELISA试剂盒的在制备检测癌症病人血液中血药浓度的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.抗cldn18.2全人源单克隆抗体fab2片段的抗体对，包括含有轻链和重链的第一抗体，其特征在于，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列分别与seqid no.1或seq id no.3一致或者编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列中至少90％的序列分别与seq id no.2或seq id no.4一致。
2.根据权利要求1所述的抗体对，其特征在于，还包括第二抗体，编码所述第一抗体的轻链、重链的核酸序列分别为seq id no.1、seq id no.3；编码所述第二抗体的轻链、重链的核酸序列分别为seq id no.2、seq id no.4。
3.编码权利要求1或2所述抗体对的核酸，其包括seq id no.1～seq id no.4任一项所示的核苷酸序列。
4.表达单元，其特征在于，其包括启动子、终止子和权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：安文琪，王斌，赵云霞，江魁，李永东，王涛，王澳楠，冯晓婷，
申请(专利权)人：华兰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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