【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因递送，具体涉及一种西瓜种胚基因递送方法。
技术介绍
1、选择适宜外植体、培养基和培养条件，通过外源激素诱导，利用植物分生组织细胞全能性，建立植物外植体体外培养体系，获得外植体再生无性系，这是植物组织培养的基本原理；根癌农杆菌通过侵染植物组织伤口，并将其质粒t-dna与宿主基因组dna结合，完成t-dna携带基因递送；基于组织培养基本原理和t-dna携带基因的递送，诞生了组织培养依赖的基因递送(tcgd)技术，实现了外源目的基因在宿主细胞内的基因递送。
2、tcgd技术自上世纪八十年代诞生以来，通过外植体和培养基选择、侵染时间和培养条件优化、根癌农杆菌菌株改良等试验，建立了众多植物种类的tcgd技术，广泛应用于基因表达调控研究和基因工程等分子育种领域；其中包括申请专利和公开报道的西瓜tcgd技术。
3、组织培养技术是基于微生物人工培养的基本原理，即无菌条件下在无菌培养基上接种单一菌株，依此建立的植物基因递送操作一般包括十项基本操作，即无菌外植体获得、外植体培养基选择，外植体预培养、侵染、脱分化、愈伤组织诱导、不定压诱导、生根诱导、抗生素压力选择和幼苗培养；植物种类、细胞再生能力和外植体差异，分别在不同层面决定了其组织培养的难易程度，继而决定了tcgd的效率。
4、tcgd过程中，包括外植体的脱分化、愈伤组织形成、诱导不定芽发生和生根等，需严格避免外植体和培养基真菌、细菌和病毒污染，确保各阶段组织和细胞的正常生长，这些在无菌培养基和无菌环境下的繁复操作，不仅极易造成培养基污染，而
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种西瓜种胚基因递送方法，本专利技术递送方法显著降低了基因递送过程的时耗和成本，提高了基因递送效率。
2、为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种西瓜种胚基因递送方法，所述西瓜种胚基因递送方法包括如下步骤：
4、(a)对含有目的基因的重组根癌农杆菌进行活化培养，得到菌液，再经离心收集沉淀、重悬，得到重悬液；
5、(b)将西瓜种子进行催芽处理，得到种胚外植体；
6、(c)将种胚外植体进行漂洗并选择下胚轴伸出种皮长度为2～3mm的种胚外植体，在距离下胚轴顶端2～3mm处接种重悬液，然后，将接种后的种胚外植体置于重悬液中并震荡处理；
7、(d)将种胚外植体埋藏于河砂中进行培养并采用潮霉素进行筛选，然后将筛选的种胚外植体进行播种培养。
8、优选地，所述活化培养包括：
9、将含有目的基因的重组根癌农杆菌在lb固体平面培养基上进行划线分离，挑选单菌落并接种到含有硫酸卡那霉素的lb液体培养基中进行培养至od值为0.5～0.8；
10、所述重悬包括采用含有乙酰丁香酮的ms液体培养基添加至沉淀中进行震荡，得到重悬液，其中，重悬液中含有目的基因的重组根癌农杆菌的浓度od值为0.5～0.6。
11、优选地，所述含有硫酸卡那霉素的lb液体培养基中硫酸卡那霉素浓度为40～60μg/ml。
12、优选地，所述含有乙酰丁香酮的ms液体培养基中乙酰丁香酮含量为0.05‰～0.2‰。
13、优选地，所述将西瓜种子进行催芽处理包括：
14、将西瓜种子埋藏于河砂中进行催芽，催芽温度为20～25℃。
15、优选地，所述河砂粒径为0.2～0.5mm。
16、优选地，所述将种胚外植体进行漂洗包括：
17、将种胚外植体在8～12℃和22～27℃变温下进行漂洗。
18、优选地，所述在距离下胚轴顶端2～3mm处接种重悬液包括：
19、在距离下胚轴顶端2～3mm处，选择3～7个点位注射重悬液，其中，注射深度为1～2mm，每个点位注射量为1～2μl。
20、优选地，所述震荡处理为以200～300r/min震荡处理20～40min。
21、优选地，所述将种胚外植体埋藏于河砂中进行培养并采用潮霉素进行筛选包括：
22、将种胚外植体埋藏于河砂中室温下继续培养2～3天，培养期间每天采用45～55μg/ml的潮霉素溶液浸泡种子8～12min。
23、与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
24、本专利技术递送方法仅需四个操作步骤即可完成基因递送，摆脱了tcgd的繁琐流程，与tcgd比较，本专利技术递送方法完成基因递送所需时间缩短了20倍以上，所需费用成本降低了50倍以上；此外，本专利技术以西瓜种子为材料，分别完成了2个编辑基因递送，结果表明，递送株系目的编辑基因检出率介于10％～14％，与tcgd技术持平，基因递送所需时间仅需0.5个月，所需费用仅是tcgd技术的1/50，可见，本专利技术的递送方法极显著提高了基因递送效率。
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1.一种西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述活化培养包括：
3.根据权利要求2所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述含有硫酸卡那霉素的LB液体培养基中硫酸卡那霉素浓度为40～60μg/ml。
4.根据权利要求2所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述含有乙酰丁香酮的MS液体培养基中乙酰丁香酮含量为0.05‰～0.2‰。
5.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述将西瓜种子进行催芽处理包括：
6.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述河砂粒径为0.2～0.5mm。
7.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述将种胚外植体进行漂洗包括：
8.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述在距离下胚轴顶端2～3mm处接种重悬液包括：
9.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述震荡处理为以200～300r/min震荡处理
10.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述将种胚外植体埋藏于河砂中进行培养并采用潮霉素进行筛选包括：
...【技术特征摘要】
1.一种西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述活化培养包括：
3.根据权利要求2所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述含有硫酸卡那霉素的lb液体培养基中硫酸卡那霉素浓度为40～60μg/ml。
4.根据权利要求2所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述含有乙酰丁香酮的ms液体培养基中乙酰丁香酮含量为0.05‰～0.2‰。
5.根据权利要求1所述的西瓜种胚基因递送方法，其特征在于，所述将西瓜种子进行催芽处理包括：
6.根据权利要...
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