含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术公开了含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法。本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法。本发明专利技术提供的融合蛋白为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒E8L抗原的N端得到的蛋白质，融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1

【技术实现步骤摘要】
含有猴痘病毒E8L抗原的融合蛋白及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种猴痘病毒E8L抗原制备方法。

技术介绍

[0002][0003]猴痘病毒基本的感染形态为成熟病毒粒子(mature virion，MV)，除此之外，还有一种形态：成熟病毒粒子外还包绕有一层来源于内质网膜的脂质膜(extracellular enveloped，EV)。其中，E8L抗原为猴痘病毒成熟病毒粒子的膜蛋白，也是重要的免疫靶点之一。因此，制备E8L蛋白为猴痘病毒检测试剂或疫苗的关键产品研发的关键步骤。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的主要问题是如何制备猴痘病毒E8L抗原。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种白蛋白信号肽(信号肽Al，SEQ ID No.1)，信号肽Al可引导猴痘病毒E8L抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于荧光素酶信号肽(信号肽Ga)和抗体轻链信号肽(信号肽Lc)。
[0006]本专利技术首先提供了一种融合蛋白。
[0007]本专利技术提供的融合蛋白为将为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒E8L抗原的N端得到的蛋白质。
[0008]进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
291位或SEQ ID No.5第1
‑
296位。
[0009]SEQ ID No.5的第1<br/>‑
16位为信号肽Al(即SEQ ID No.1)，第18
‑
291位为所述猴痘病毒E8L抗原，第292
‑
296位为Linker接头，第297
‑
302位为组氨酸标签。
[0010]本专利技术还提供了编码上述融合蛋白的核酸分子。
[0011]进一步地，所述核酸分子自5
’
端到3
’
端依次由上述多肽的编码基因和猴痘病毒E8L抗原的编码基因组成。
[0012]更进一步地，所述多肽的编码基因可为如下任一：
[0013](a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；
[0014](a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；
[0015](a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。
[0016]更进一步地，所述猴痘病毒E8L抗原的编码基因可为如下任一：
[0017](b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；
[0018](b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；
[0019](b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子。
[0020]更加具体地，所述核酸分子可为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.8、SEQ ID No.8的第1
‑
888位或SEQ ID No.8的第1
‑
903位。
[0021]SEQ ID No.8的第1
‑
6位为HindIII识别位点，7
‑
15位为Kozak序列，16
‑
63位为白蛋白信号肽Al编码基因，第64
‑
888位为E8L抗原编码基因，第889
‑
903位为连接肽(Linker，接头)基因，第904
‑
921位为组氨酸标签基因，第922
‑
924位为终止密码子，第925
‑
932位为PacI识别位点。重组表达质粒pCGS3
‑
Al
‑
E8L含有重组蛋白Ga
‑
E8L的编码基因，重组蛋白Al
‑
E8L的编码基因的编码序列是SEQ IDNo.7的第16
‑
924位，重组蛋白Al
‑
E8L的编码基因编码氨基酸序列是序列5的蛋白质。
[0022]上述核酸分子或编码基因中，同一性是指核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定核苷酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Perresidue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)，检索一对核苷酸序列的同一性，进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
[0023]上述核酸分子或编码基因中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6
×
SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2
×
SSC，0.1％SDS和1
×
SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
[0024]本专利技术还提供了上述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。
[0025]其中，所述表达盒是指能够在宿主细胞中表达上述融合蛋白的DNA，该DNA不仅包括启动目的基因转录的启动子，还可包括终止目的基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
[0026]在本专利技术的具体实施方式中，所述重组载体为将SEQ ID No.8所示DNA片段(SEQID No.8的第16
‑
63位为信号肽Al的编码基因，即SEQ ID No.2)插入到pCGS3载体的多克隆位点(如HindIII和PacI)后得到的重组质粒。相应地，所述转基因细胞系为将所述重组质粒导入到Expi293F细胞后所得。
[0027本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.融合蛋白，为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒E8L抗原的N端得到的蛋白质。2.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
291位或SEQ ID No.5的第1
‑
296位。3.编码权利要求1或2所述融合蛋白的核酸分子。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子由所述多肽的编码基因和所述猴痘病毒E8L抗原的编码基因组成；所述多肽的编码基因为如下任一：(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子；所述猴痘病毒E8L抗原的编码基因为如下任一：(b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；(b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子；(b4)所述核酸分子为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.8、SEQ ID No.8的第1
‑
888位或SEQ ID No.8的第1
‑
903位的DNA分子。5.含有权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢体坤，张静静，安文琪，宋路萍，
申请(专利权)人：华兰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：