一种猴痘病毒A35R抗原及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猴痘病毒A35R抗原及其制备方法。本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种猴痘病毒A35R抗原及其制备方法。本发明专利技术提供的融合蛋白，为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒A35R抗原的N端得到的蛋白质，融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1

【技术实现步骤摘要】
一种猴痘病毒A35R抗原及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种猴痘病毒A35R抗原及其制备方法。

技术介绍

[0002]2022年5月，新一轮的“猴痘”疫情最先在英国发现，已经遍及英国、葡萄牙、西班牙、澳大利亚、德国、法国等多个国家。目前，“猴痘”病毒疫情仍趋于蔓延态势，因此受到多个国家卫生监管部门的关注。
[0003]猴痘病毒潜伏期约6
‑
16天，症状为发热、剧烈头痛、淋巴结病、背痛、肌痛、重度疲乏无力。传播方式为动物传人和人际传播，其中，人际间传播因密切接触了感染的呼吸道分泌物、感染者的皮肤损伤或最近被病人体液或病变材料污染的物品而造成，通常需要长时间的面对面接触才会发生呼吸道飞沫传播。
[0004]猴痘病毒基本的感染形态为成熟病毒粒子(mature virion，MV)，除此之外，还有一种形态：成熟病毒粒子外还包绕有一层来源于内质网膜的脂质膜(extracellular enveloped，EV)。其中，A35R与牛痘病毒的A33R高度相似，是一种细胞外包膜病毒(EEV)特异性II型膜糖蛋白，在有效的EEV形成中起着关键作用，并有助于病毒颗粒的有效细胞间传播，是开发猴痘病毒治疗性抗体的潜在靶点。因此，制备A35R蛋白为猴痘病毒检测试剂或疫苗的关键产品研发的关键步骤。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的主要问题是如何制备猴痘病毒A35R抗原。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种荧光素酶信号肽(信号肽Ga，SEQ ID No.1)，信号肽Ga可引导猴痘病毒A35R抗原分泌至培养上清，经过镍柱亲和层析即可获得高纯度抗原，且其分泌表达产量显著高于白蛋白信号肽(信号肽Al)和抗体轻链信号肽(信号肽Lc)。
[0007]本专利技术首先提供了一种融合蛋白。
[0008]本专利技术提供的融合蛋白为将为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒A35R抗原的N端得到的蛋白质。
[0009]进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
141位或SEQ ID No.5第1
‑
146位。
[0010]SEQ ID No.5的第1
‑
17位为信号肽Ga(即SEQ ID No.1)，第18
‑
141位为所述猴痘病毒A35R抗原，第142
‑
146位为Linker接头，第147
‑
152位为组氨酸标签。
[0011]本专利技术还提供了编码上述融合蛋白的核酸分子。
[0012]进一步地，所述核酸分子自5
’
端到3
’
端依次由上述多肽的编码基因和猴痘病毒A35R抗原的编码基因组成。
[0013]更进一步地，所述多肽的编码基因可为如下任一：
[0014](a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；
[0015](a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；
[0016](a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子。
[0017]更进一步地，所述猴痘病毒A35R抗原的编码基因可为如下任一：
[0018](b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；
[0019](b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；
[0020](b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子。
[0021]更加具体地，所述核酸分子可为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.7、SEQ ID No.7的第1
‑
438位或SEQ ID No.7的第1
‑
453位。
[0022]SEQ ID No.7的第1
‑
6位为HindIII识别位点，7
‑
15位为Kozak序列，16
‑
66位为荧光素酶信号肽Ga编码基因，第67
‑
438位为A35R抗原编码基因，第439
‑
453位为连接肽(Linker，接头)基因，第454
‑
471位为组氨酸标签基因，第472
‑
474位为终止密码子，第475
‑
482位为PacI识别位点。重组表达质粒pCGS3
‑
Ga
‑
A35R含有重组蛋白Ga
‑
A35R的编码基因，重组蛋白Ga
‑
A35R的编码基因的编码序列是SEQ ID No.7的第16位
‑
474位，重组蛋白Ga
‑
A35R的编码基因编码氨基酸序列是序列5的蛋白质。
[0023]上述核酸分子或编码基因中，同一性是指核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定核苷酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)，检索一对核苷酸序列的同一性，进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
[0024]上述核酸分子或编码基因中，所述严格条件可为如下：50℃，在7％十二烷基硫酸钠(SDS)、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，2
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.5
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在50℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；还可为：50℃，在7％SDS、0.5M Na3PO4和1mM EDTA的混合溶液中杂交，在65℃，0.1
×
SSC，0.1％SDS中漂洗；也可为：在6
×
SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2
×
SSC，0.1％SDS和1
×
SSC，0.1％SDS各洗膜一次。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.融合蛋白，为将氨基酸序列是SEQ ID No.1的多肽融合于猴痘病毒A35R抗原的N端得到的蛋白质。2.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5、SEQ ID No.5的第1
‑
141位或SEQ ID No.5的第1
‑
146位。3.编码权利要求1或2所述融合蛋白的核酸分子。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子由所述多肽的编码基因和所述猴痘病毒A35R抗原的编码基因组成；所述多肽的编码基因为如下任一：(a1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.2的DNA分子；(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码所述多肽的DNA分子；(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码所述多肽的DNA分子；所述猴痘病毒A35R抗原的编码基因为如下任一：(b1)编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.4所示的DNA分子；(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码相同蛋白质的DNA分子；(b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子；(b4)所述核酸分子为编码链的核苷酸序列是SEQ ID No.7、SEQ ID No.7的第1
‑
438位或SEQ ID No.7的第1
‑
453位的DNA分子。5.含有权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静静，邢体坤，安文琪，宋路萍，李静波，
申请(专利权)人：华兰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：