本发明专利技术提供了一种内质网靶向人工蛋白、重组酿酒酵母、内质网靶向囊泡、免疫佐剂和疫苗，属于生物医学及递药领域技术领域。本发明专利技术的内质网靶向人工蛋白通过Pardaxin肽靶向真核细胞的内质网，通过Atg8片段锚定在囊泡上并发生自组装，形成表面展示Pardaxin靶向多肽的内质网靶向囊泡。本发明专利技术还提供了一种内质网靶向磁性囊泡，由磁性介孔硅纳米粒子包被上述方案所述制备方法制备得到的内质网靶向囊泡得到，本发明专利技术的内质网靶向磁性囊泡为广谱内质网靶向磁性囊泡佐剂，能够负载抗原。本发明专利技术为不同致病性感染提供了一种新型广谱疫苗佐剂，为合成生物学疫苗制备与生产提供了新思路。生物学疫苗制备与生产提供了新思路。生物学疫苗制备与生产提供了新思路。
【技术实现步骤摘要】
一种内质网靶向人工蛋白、重组酿酒酵母、内质网靶向囊泡、免疫佐剂和疫苗
[0001]本专利技术属于生物医学及递药领域
，具体涉及一种内质网靶向人工蛋白、重组酿酒酵母、内质网靶向囊泡、免疫佐剂和疫苗。
技术介绍
[0002]内质网(Endoplasmic reticulum，ER)作为真核细胞中极为重要的膜性细胞器之一，是蛋白折叠与转运、脂质合成、囊泡运输、钙离子储存的主要场所，并且参与多种信号转导途径的调控过程。不仅如此，内质网还通过其发达的延伸结构，建立与质膜、线粒体、内吞体、溶酶体等其他膜性结构的连接位点，在胞内细胞器及质膜的信息、物质及能量交流过程中扮演重要角色。鉴于内质网对真核细胞生长代谢过程的极端重要性，其结构与功能的紊乱将对真核细胞及生物机体产生重大影响。大量研究发现，内质网功能紊乱与迄今发现的众多人类重大疾病，如癌症、自身免疫疾病、病原微生物感染、神经退行性疾病、糖尿病等均存在紧密联系。随着精准医学理论与技术的不断发展，开发具有精准内质网靶向的药物成为预防与攻克相关疾病的重要趋势。
[0003]内质网与胞内蛋白的合成、加工和运输密不可分。基于对蛋白质在胞内运输的探索，更多具有内质网趋向性的信号肽得以被发现。这些内质网信号肽多修饰于蛋白质的N端，根据其序列的不同执行着不同的功能。内质网信号肽包括KDEL肽、Eriss肽和Pardaxin肽等。其中，Pardaxin肽(GFFALIPKIISSPLFKTLLSAVGSALSSSGGQE，SEQ ID NO.1)是一种天然抗菌肽，具有内质网定位能力，其内质网靶向机制可能与高效的磷脂酰胆碱囊泡成孔能力有关(磷脂酰胆碱是内质网的主要甘油磷脂，占比60％)。
[0004]目前，还没有关于利用Pardaxin肽制备内质网靶向囊泡的记载。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种内质网靶向人工蛋白、重组酿酒酵母、内质网靶向囊泡、免疫佐剂和疫苗，本专利技术的内质网靶向人工蛋白能够用于制备内质网靶向囊泡。
[0006]本专利技术提供了一种内质网靶向人工蛋白，从N端到C端，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0007]本专利技术还提供了上述方案所述内质网靶向人工蛋白的编码基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0008]本专利技术还提供了一种重组酿酒酵母，以ura3缺陷型的酿酒酵母作为原始细胞，包含重组质粒；所述重组质粒插入有上述方案所述的编码基因。
[0009]本专利技术还提供了上述方案所述的人工蛋白或者所述的编码基因或者所述的重组酿酒酵母在制备内质网靶向囊泡中的应用。
[0010]本专利技术还提供了一种内质网靶向囊泡的制备方法，包括以下步骤：
[0011]将上述方案所述的重组酿酒酵母接种于SC
‑
Gal培养基，进行第一诱导培养；
[0012]将第一诱导培养后的重组酿酒酵母接种于不含氮源的SC
‑
Gal培养基，进行第二诱导培养；
[0013]对所述第二诱导培养后的培养物进行离心，收集沉淀的酵母细胞，提取酵母细胞的原生质体，得到酵母原生质体；
[0014]对所述酵母原生质体依次进行破碎和超速离心，收集沉淀，得到内质网靶向囊泡粗品；
[0015]采用镍柱对所述囊泡粗品进行纯化，得到内质网靶向囊泡；
[0016]所述SC
‑
Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：无氨基酵母氮源6.7g/L、半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；
[0017]所述不含无氨基酵母氮源的SC
‑
Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；
[0018]所述混合氨基酸包括以下质量份的组分：L
‑
脯氨酸2份、L
‑
亮氨酸10份、L
‑
缬氨酸2份、L
‑
丙氨酸2份、L
‑
丝氨酸2份、L
‑
赖氨酸2份、L
‑
谷氨酸2份、L
‑
甲硫氨酸2份、L
‑
苏氨酸2份、L
‑
谷氨酰胺2份、L
‑
甘氨酸2份、L
‑
异亮氨酸2份、L
‑
色氨酸2份、L
‑
天冬氨酸2份、L
‑
酪氨酸2份、L
‑
苯丙氨酸2份、肌醇2份、L
‑
半胱氨酸2份、对氨基苯甲酸2份、L
‑
天门冬酰胺2份和腺嘌呤0.5份。
[0019]本专利技术还提供了一种内质网靶向磁性囊泡，包括磁性介孔硅纳米粒子和包被在所述磁性介孔硅纳米粒子孔道内的内质网靶向囊泡，所述内质网靶向囊泡由上述方案所述制备方法制备得到。
[0020]优选的，所述磁性介孔硅纳米粒子的内核为MnFe2O4纳米粒子；所述磁性介孔硅纳米粒子的外壳为介孔二氧化硅；所述磁性介孔硅纳米粒子的制备方法包括以下步骤：
[0021]将MnFe2O4悬浮于有机溶剂，得到悬浮液；
[0022]将所述悬浮液、造孔剂和水第一混合，去除所述有机溶剂，得到第一混合液；
[0023]将所述第一混合液、水、甲醇和乙酸乙酯第二混合，得到第二混合液；
[0024]将所述第二混合液、氢氧化铵溶液、四乙氧基硅烷和3
‑
氨丙基三乙氧基硅烷第三混合，得到第三混合液；
[0025]对所述第三混合液进行离心，收集沉淀，洗涤所述沉淀后去除造孔剂，得到磁性介孔硅纳米粒子。
[0026]本专利技术还提供了上述方案所述的内质网靶向磁性囊泡在制备免疫佐剂中的应用。
[0027]本专利技术还提供了一种疫苗，包括磁性介孔硅纳米粒子，以及包被在所述磁性介孔硅纳米粒子的孔道内的内质网靶向囊泡和抗原，所述内质网靶向囊泡由上述方案所述制备方法制备得到。
[0028]优选的，所述抗原包括病原菌抗原或肿瘤抗原。
[0029]本专利技术提供了一种内质网靶向人工蛋白，从N端到C端，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本专利技术的内质网靶向人工蛋白含有N端6
×
His标签、Pardaxin肽、绿色荧光蛋白和酿酒酵母Atg8片段。本专利技术的内质网靶向人工蛋白通过Pardaxin肽靶向真核细胞的内质网，通过Atg8片段锚定在囊泡上并发生自组装，形成表面展示Pardaxin靶向多肽的内质网靶向囊泡。
ccagagctgaagtcaagtttgaaggtgaca ctttggtcaa ccgtatcgaa ttgaagggta ttgatttcaaggaagacggtaacatcttag gtcacaaatt ggaatacaac tacaactctc acaacgtctacattatggctgacaagcaaa agaacggtat caaggtcaat ttcaagatca gacacaacattgaggatggttctg本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种内质网靶向人工蛋白，其特征在于，从N端到C端，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述内质网靶向人工蛋白的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种重组酿酒酵母，其特征在于，以ura3缺陷型的酿酒酵母作为原始细胞，包含重组质粒；所述重组质粒插入有权利要求2所述编码基因。4.权利要求1所述的人工蛋白或者权利要求2所述的编码基因或者权利要求3所述的重组酿酒酵母在制备内质网靶向囊泡中的应用。5.一种内质网靶向囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求3所述的重组酿酒酵母接种于SC
‑
Gal培养基，进行第一诱导培养；将第一诱导培养后的重组酿酒酵母接种于不含无氨基酵母氮源的SC
‑
Gal培养基，进行第二诱导培养；对所述第二诱导培养后的培养物进行离心，收集沉淀的酵母细胞，提取酵母细胞的原生质体，得到酵母原生质体；对所述酵母原生质体依次进行破碎和超速离心，收集沉淀，得到内质网靶向囊泡粗品；采用镍柱对所述囊泡粗品进行纯化，得到内质网靶向囊泡；所述SC
‑
Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：无氨基酵母氮源6.7g/L、半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；所述不含无氨基酵母氮源的SC
‑
Gal培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：半乳糖20g/L和混合氨基酸2g/L；所述混合氨基酸包括以下质量份的组分：L
‑
脯氨酸2份、L
‑
亮氨酸10份、L
‑
缬氨酸2份、L
‑
丙氨酸2份、L
‑
丝氨酸2份、L
‑
赖氨酸2份、L
‑
谷氨酸2份、L
‑
【专利技术属性】
技术研发人员：喻其林，赵妍，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。