一种DNA合成纠错酶及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种DNA合成纠错酶及应用，属于基因工程技术领域，是将Taq DNA聚合酶中催化DNA合成的结构域、纠正DNA错配用酶中的纠错活性结构域以及MutS蛋白中特异识别DNA双链错配的功能结构域，分别利用柔性linker连接融合而成；该DNA合成纠错酶同时具有DNA催化合成、特异性识别及修复错配DNA双链三种功能，使碱基错误率＜10

【技术实现步骤摘要】
一种DNA合成纠错酶及应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种DNA合成纠错酶及应用。

技术介绍

[0002]DNA人工合成是推动生命科学及其相关领域发展的关键性底层技术。常规的遗传操作技术仅能对已有的序列进行有限的改在，而DNA人工合成可以提高我们对生命体理解、预测和操控的能力。
[0003]DNA人工合成中产生的合成错误会严重影响基因片段组装及后续改造，数据表明原核和真核细胞内的DNA复制错误率在10
‑7‑
10
‑8之间，而人工合成DNA没有体内的各种错配修复机制的保障，所以保真度不高，错误率高达10
‑2‑
10
‑3。经过互补配对后的双链DNA片段的核苷酸插入、缺失、取代错误主要表现为错配和凸起等，这些错误的去除更多是借助基于生物体内的DNA修复体系开发出的DNA酶促纠错技术，再利用具有错配结合或错配切割活性的酶对DNA双链纠错，从而富集正确序列。
[0004]为了降低DNA人工合成的错误率并提高效率，所以提出一种DNA合成纠错酶及应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种DNA合成纠错酶及应用，以解决
技术介绍
中的问题。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0007]一种DNA合成纠错酶，是将Taq DNA聚合酶(Taq DNA polymerase)中催化DNA合成的结构域、纠正DNA错配用酶中的纠错活性结构域以及MutS蛋白(Thermus aquaticus Muts)中特异识别DNA双链错配的功能结构域，分别利用柔性linker连接融合而成，该DNA合成纠错酶包括Taq DNA polymerase
‑
linker
‑
T7 Endonuclease
Ⅰ‑
linker
‑
Thermus aquaticus Muts和Taq DNA polymerase
‑
linker
‑
Exonuclease
Ⅲ‑
linker
‑
Thermus aquaticus Muts。
[0008]进一步地，柔性linker的氨基酸序列为GGGGSGGGGSGGGGS。
[0009]进一步地，纠正DNA错配用酶包括T7核酸内切酶I(T7 EndonucleaseⅠ)、核酸内切酶、V8
‑
氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶、核酸内切酶Ⅲ(ExonucleaseⅢ)、尿嘧啶
‑
DNA糖基化酶、核酸内切酶
Ⅷ
、拓扑异构酶Ⅰ、T4嘧啶二聚体糖基化酶、人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶和核酸内切酶IV。
[0010]进一步地，Taq DNA polymerase
‑
linker
‑
T7 Endonuclease
Ⅰ‑
linker
‑
Thermus aquaticus Muts的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，具体如下：
[0011]MRGMLPLFEPKGRVLLVDGHHLAYRTFHALKGLTTSRGEPVQAVYGFAKSLLKALKEDGDAVIVVFDAKAPSFRHEAYGGYKAGRAPTPEDFPRQLALIKELVDLLGLARLEVPGYEADDVLASLAKKAEKEGYEVRILTADKDLYQLLSDRIHVLHPEGYLITPAWLWEKYGLRPDQWADYRALTGDESDNLPGVKGIGEKTARKLLEEWGSLEALLKNLDRLKPAIREKILAHMDDLKLSWDLAKVRTDLPLEVDFAKRREPDRERLRAFLERLEFGSLLHEFGLLESPKALEEAPWP
PPEGAFVGFVLSRKEPMWADLLALAAARGGRVHRAPEPYKALRDLKEARGLLAKDLSVLALREGLGLPPGDDPMLLAYLLDPSNTTPEGVARRYGGEWTEEAGERAALSERLFANLWGRLEGEERLLWLYREVERPLSAVLAHMEATGVRLDVAYLRALSLEVAEEIARLEAEVFRLAGHPFNLNSRDQLERVLFDELGLPAIGKTEKTGKRSTSAAVLEALREAHPIVEKILQYRELTKLKSTYIDPLPDLIHPRTGRLHTRFNQTATATGRLSSSDPNLQNIPVRTPLGQRIRRAFIAEEGWLLVALDYSQIELRVLAHLSGDENLIRVFQEGRDIHTETASWMFGVPREAVDPLMRRAAKTINFGVLYGMSAHRLSQELAIPYEEAQAFIERYFQSFPKVRAWIEKTLEEGRRRGYVETLFGRRRYVPDLEARVKSVREAAERMAFNMPVQGTAADLMKLAMVKLFPRLEEMGARMLLQVHDELVLEAPKERAEAVARLAKEVMEGVYPLAVPLEVEVGIGEDWLSAKEGGGGSGGGGSGGGGSMAGYGAKGIRKVGAFRSGLEDKVSKQLESKGIKFEYEEWKVPYVIPASNHTYTPDFLLPNGIFVETKGLWESDDRKKHLLIREQHPELDIRIVFSSSRTKLYKGSPTSYGEFCEKHGIKFADKLIPAEWIKEPKKEVPFDRLKRKGGKKGGGGSGGGGSGGGGSMEGMLKGEGPGPLPPLLQQYVELRDQYPDYLLLFQVGDFYECFGEDAERLARALGLVLTHKTSKDFTTPMAGIPLRAFEAYAERLLKMGFRLAVADQVEPAEEAEGLVRREVTQLLTPGTLLQESLLPREANYLAAIATGDGWGLAFLDVSTGEFKGTVLKSKSALYDELFRHRPAEVLLAPELLENGAFLDEFRKRFPVMLSEAPFEPEGEGPLALRRARGALLAYAQRTQGGALSLQPFRFYDPGAFMRLPEATLRALEVFEPLRGQDTLFSVLDETRTAPGRRLLQSWLRHPLLDRGPLEARLDRVEGFVREGALREGVRRLLYRLADLERLATRLELGRASPKDLGALRRSLQILPELRALLGEEVGLPDLSPLKEELEAALVEDPPLKVSEGGLIREGYDPDLDALRAAHREGVAYFLELEERERERTGIPTLKVGYNAVFGYYLEVTRPYYERVPKEYRPVQTLKDRQRYTLPEMKEKEREVYRLEALIRRREEEVFLEVRERAKRQAEALREAARILAELDVYAALAEVAVRYGYVRPRFGDRLQIRAGRHPVVERRTEFVPNDLEMAHELVLITGPNMAGKSTFLRQTALIALLAQVGSFVPAEEAHL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA合成纠错酶，其特征在于，是将Taq DNA聚合酶中催化DNA合成的结构域、纠正DNA错配用酶中的纠错活性结构域以及MutS蛋白中特异识别DNA双链错配的功能结构域，分别利用柔性linker连接融合而成。2.根据权利要求1所述的一种DNA合成纠错酶，其特征在于，包括Taq DNA polymerase
‑
linker
‑
T7 Endonuclease
Ⅰ‑
linker
‑
Thermus aquaticus Muts和Taq DNA polymerase
‑
l inker
‑
Exonuclease
Ⅲ‑
l inker
‑
Thermus aquaticus Muts。3.根据权利要求1所述的一种DNA合成纠错酶，其特征在于，柔性linker的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：李森，张伦，雍德祥，吴志荷，
申请(专利权)人：通用生物南京有限公司，
类型：发明
国别省市：