一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体，属于基因工程技术领域，通过定点突变的方式制备DNA聚合酶突变体的多核苷酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；根据DNA聚合酶突变体的多核苷酸构建DNA聚合酶突变体的表达载体；将DNA聚合酶突变体的表达载体转化到感受态细胞进行表达，得到DNA聚合酶突变体；通过对野生型Taq DNA聚合酶的第二结构域突变位点和第三结构域突变位点进行定点突变，通过扩增效率检测，相较于市售Taq DNA聚合酶，DNA聚合酶突变体具有更大的产物，说明DNA聚合酶突变体的PCR效率更高，具有更高的扩增活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体。

技术介绍

1、dna人工合成是推动生命科学及其相关领域发展的关键性底层技术，常用到的dna聚合酶是一种以亲代dna为模板，催化底物dntp分子聚合形成子代dna的一类酶。taq dna聚合酶是dna聚合酶的一种特殊形式，它最初是从一种嗜热细菌——水生栖热菌(thermusaquaticus)中分离出来的。这种酶在高温下仍然能够保持活性，因此被广泛用于pcr(聚合酶链式反应)技术中，以帮助扩增特定的dna片段。在pcr过程中，taq dna聚合酶会以一段已知序列的dna为模板，将单个的dntp分子添加到引物的3'-oh末端，合成一条新的dna互补链。

2、taq dna聚合酶热稳定性虽然好，但是在实际应用中，在高温下进行pcr反应时，较短的扩增时间下taq dna聚合酶的扩增效率仍然会受到影响。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体，解决较短扩增时间下扩增效率不高的问题。...

【技术保护点】

1.一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体，其特征在于，通过如下步骤制备：

2.根据权利要求1所述的一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体，其特征在于，制备DNA聚合酶突变体的多核苷酸的具体方法如下：

3.根据权利要求2所述的一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述突变位点为E315Y、K340P、T386M、D496F、P589Q、A597G、Y611 A、Q613V、E634M、W645E、L723A和A743F。

4.根据权利要求1所述的一种具有高扩增活性的耐热DNA聚合酶突变体，其特征在于，所述DNA聚合酶突变体的多...

【技术特征摘要】

1.一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体，其特征在于，通过如下步骤制备：

2.根据权利要求1所述的一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体，其特征在于，制备dna聚合酶突变体的多核苷酸的具体方法如下：

3.根据权利要求2所述的一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体，其特征在于，所述突变位点为e315y、k340p、t386m、d496f、p589q、a597g、y611 a、q613v、e634m、w645e、l723a和a743f。

4.根据权利要求1所述的一种具有高扩增活性的耐热dna聚合酶突变体，其特征在于，所述dna聚合酶突变体的多核...

【专利技术属性】
技术研发人员：李森，张伦，雍德祥，李娇，黄策，
申请(专利权)人：通用生物南京有限公司，
类型：发明
国别省市：